离子对色谱和亲水色谱在药用真菌中的应用

1、目 录TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc7124 摘要 PAGEREF _Toc7124 1 HYPERLINK l _Toc15953 1 引 言 PAGEREF _Toc15953 2 HYPERLINK l _Toc1408 2 药物分析分离中的色谱方法 PAGEREF _Toc1408 2 HYPERLINK l _Toc29421 2.1 生物膜色谱及其在药物活性成分分析中的应用 PAGEREF _Toc29421 2 HYPERLINK l _Toc13542 2.2 亲水作用色谱固定相及其在中药分离中的应用 PAGEREF _Toc13542 2 HYP

2、ERLINK l _Toc5805 2.3 光谱相关色谱及其在中药色谱指纹图谱分析中的应用 PAGEREF _Toc5805 3 HYPERLINK l _Toc26351 2.4 脂质体电动色谱及其评价药物-膜相互作用 PAGEREF _Toc26351 4 HYPERLINK l _Toc3928 3 展望 PAGEREF _Toc3928 4 HYPERLINK l _Toc7361 参考文献 PAGEREF _Toc7361 5 PAGE 4离子对色谱和亲水色谱在药用真菌中的应用摘要：现在药学的迅速发展促进针对药物及其代谢产物在过程的不断深入研究中，建立了许多新的、巧妙、精确而有快速的

3、色谱分析方法。包括亲水作用色谱固定相在药分离中的应用，薄层色谱法在药物分析中的应用，液相色谱串联质谱法，脂质体电动色谱。这些方法的诞生使得当代生物医学与中医学理论能够兼容。本文综述了这些色谱方法的具体应用过程及其特点。关键词：亲水作用色谱 薄层色谱法 串联质谱法 脂质体1 引 言色谱工艺歼拓系统从1996年推出至今的十几年中，结合新的反相介质和新型凝胶介质已在天然药物活性成分研究和分离中获得了应用。对分离具有活血化瘀的活性成分多种黄酮、抗炎作用的紫草中的萘醌等的应用咀及用于心血管治疗的银杏叶活性成分银杏总黄酮、银杏黄酮醇甙及银杏内酯的分离和生产取得了成果。目前在其他活性成分的研究、分离和生产中

4、的应用正在不断发展之中。随着药物的迅速发展，对药物的检测方法及其分离工艺的开发研究也越来越吸引更多的人去研究，并且取得了一系列成果。近十几年发展起来的生物膜色谱技术对在药物与生物膜的相互作用方面的研究进展展现了其在医药研究的广阔应用前景。传统的药物筛选在动物模型上完成，劳动密集，耗费时间长，而且只能是小规模筛选。为克服动物模型的种种不利因素，人们一直在努力尝试新的高效、快速、准确的体外药物筛选方法。2 药物分析分离中的色谱方法2.1 生物膜色谱及其在药物活性成分分析中的应用随着生命科学的发展，各个学科都在相互的交叉与相互的渗透中找到新发展的方向。近十几年来发展起来的生物膜色谱的技术便是生命科学

5、和色谱学来相结合产物。目前这个技术已经应用到了预测药物和细胞膜相互的作用和多肽以及蛋白和脂双层相互的作用，溶质和蛋白相互的作用，蛋白纯化，核酸分离的纯化，异构体的拆分，生物膜亲和色谱及磷脂合成等这些领域，并在固定的化酶反应器的方面得到应用。传统药物的筛选在动物模型上来完成的，目前国际上认可的是受体模型与酶模型高通量的筛选方法，从组合化学合成的大量化合物中筛选出具有生物活性有效的药物。然而即使是这种方法也是难以用于成分较复杂的药物，如中草药药效的分析，因为中药里面的各组分间可能会存在着药效互补以及毒性互消等复杂相互的作用，药效亦为组合的药效，这不是单一的受体模型可以去完成的。从模拟人体的细胞膜对

6、药物吸收角度来进行药物活性成分分析，是近些年物分析研究的工作一个新的亮点。现在大多数药物的学家相信一种化合物细胞膜通透性是对于它的活性起着关键性的作用，因为绝大多多数的药物必须得进入细胞才可以表现它的活性，而且内用的药物还必须透过目标的细胞细胞膜才可以起作用，而且药物活性和毒性以及在体内分布及的其它生理的过程都是取决于药物在膜上分配的状况。2.2 亲水作用色谱固定相及其在中药分离中的应用反相液相色谱是当前分离分析与分离制备中应用的最为广泛色谱模式，其依靠疏水的固定相和溶质间疏水相互的作用，实现了弱极性与中等极性的化合物高效的分离。但RPLC对强极性的化合物（如寡糖和糖苷以及强极性寡肽等）的保留

7、是很弱的，甚至不会保留，因此强极性的化合物在RPLC上得不到很好分离。用来分离强极性的化合物液相色谱的方法主要是离子交换色谱法和正相色谱法以及亲水作用色谱法。它们是可以作为RPLC补充是用于强极性的化合物分离，近些年，HILIC受到的关注越来越多，一方面是因为强极性的化合物分离问题引起了各研究领域重视，如药物分析与代谢组学以及蛋白质组学等，研究领域都在不同的程度涉及强极性化合物分离的问题，还有就是由于HILIC独有的优势，HILIC模式对于强极性的化合物和亲水化合物有很好的保留和分离选择性，是解决各类强极性化合物和亲水化合物分离问题是最可靠的手段。其次是HILIC模式流动相体系比较的简单和操作

8、起来比较的方便，而且还克服了NPLC流动相对于水溶性物质的溶解性差和保留的时间对于流动相中的水含量敏感及和质谱检测器不是很兼容等一些的缺点。HILIC的分离机理和RPLC是完全不同的，两者分离的选择性有着很好的正交性，而两者流动相的体系却是和相似的，非常适合用在构建HILICRPLC二维色谱的系统HO，将其可用于多肽等一些复杂样品分离，弥补常用IEC-RPLC二维体系中的不足，成为了解决复杂的样品分离中问题有效的手段之一。近些年来关于HILIC综述的文章越来越多，它们都是在一定的程度上涉及HILIC的固定相。但专门是针对HILIC固定的相进行综述文章比较少。HILIC的固定相主要的特征是固定相

9、的表面，和水有着很好的亲和性强极性基团，如氨基和羟基以及酰胺基等一些。早期亲水的作用色谱分离的材料主要是有原有正相色谱的固定相，比如硅胶和氨基键合硅胶以及二醇基键合硅胶等。2.3 光谱相关色谱及其在中药色谱指纹图谱分析中的应用根据相同化学物质以有的相同光谱或者波谱，在大多数的情况下，同一个样本化学的成分在同种的类型上色谱柱中保留的时间是不可能完全的相同。但是洗脱顺序是应基本的不变，实现了不同的实验条件下所获得中药的色谱指纹图谱仪器的系统误差校准是完全的可能，比较可行的方法是根据化学物质光谱或者质谱识别的相同组，分在了不同色谱中流出的时间，再可利用化学的计量学方法作相应组分的色谱校准。不同两个的

10、色谱曲线，虽对应流出的组分保留的时间上有些不相同，但它们的光谱或者质谱相同或者相似，通过对所有的不同流出的时间点光谱相关的计算，可以获得一个类似是色谱光谱相关的系数曲线。现设可通过某种的适当方法，可得到一个由联用色谱仪，如GC-MS或者是HPLC-DAD，测试获得色谱指纹的图谱中某一个的纯物质光谱可记为Si，该纯物质光谱是可通过对色谱峰来进行纯度的检验，或者通过选择性的区域确定去获得的。根据光谱的相关系数大小，就可识别出来不同的实验条件下所获得中药色谱指纹图谱中的同一化学物质对应流出的组分，而勿需具体的鉴定该组分为什么样的化学物质，继结合目标的纯物质光谱所在原色谱的峰簇保留的时间和信息，正确的

11、判断其准确峰位置，以实现在中药色谱指纹图谱中仪器系统的误差来校准。2.4 脂质体电动色谱及其评价药物-膜相互作用药物吸收和分布以及代谢于排泄等等都涉及到了跨生物膜转运，药物可发挥疗效，在生物膜中通透性是不可去忽视重要的因素，而药物和生物膜相互的作用反映药物膜的通透性。新药的研发过程中，动物试验高代价以及伦理学上问题致使得其它体外的模型应运而生的，包括了细胞技术和磷脂膜色谱及微乳电动的色谱与生物分配的胶束色谱等，这些的模型作为新药研发的初期药动学筛选的工具都有着优点和缺点。大家都知道，所有的生物膜都是具有基本相同结构于性质，两亲性磷脂是生物膜主要组成的部分，因此，相比于其它的模拟生物膜聚集体，比

12、如胶束和微乳等，液晶态脂的质体本质的属性更为接近生物膜。目前来讲以脂质体的模拟生物膜体外的模型有脂质体、水系统与固定化脂质的体液相色谱，国外的研究报道是比较多的，主要是用于来测定药物亲脂性并且预测药物小肠的吸收等。但是用这些的方法来模拟生物膜的时候存在着测定繁琐或是色谱柱不容易制备等一些的问题，可借助毛细管电泳高效的特点，将脂质体的溶液加到毛细管中去作为运行的溶液。脂质体是假固定相，药物迁移的行为反映其和脂质体相互的作用，称为脂质体电动色谱。3 展望色谱工艺歼拓系统从一九九六年推出至今的这些年来，结合了新反相的介质于新型的凝胶介质，已在天然的药物活性成分的研究中于分离中获得广泛的应用，特别是质谱色谱的连用，大大的扩大了色谱适用的范围于分式简便性。对分离具有活血化瘀活性的成分多种是黄酮和抗炎的作用的紫草中的萘醌等的应用，及还用于心血管的治疗，银杏叶的活性成分的银杏总黄酮和银杏黄酮醇甙以及银杏内酯分离于生产都取得了不错的成果。目前在其它的活性成分研究和分离以及生产中的应用在不断的扩大和发展。我们相信，色谱工艺开拓的系统以及新的色谱介质随着开拓的系统和高速的逆流色谱(Hi小Speed Count