利咽解毒颗粒微生物限度检查方法验证

1、利咽解毒颗粒微生物限度检查方法验证利咽解毒颗粒微生物限度检查方法验证利咽解毒颗粒功能主治：具有清肺利咽，解毒退热的作用；用于外感风热所致的咽痛、咽干，喉核红肿、两腮肿痛，发热恶寒；急性扁桃体炎，急性咽炎，腮腺炎见上述证候者。?中国药典?2022年版一部附录XIII规定当建立药品的微生物限度检查法时，应进展细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适宜于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。因此，我们按中国药典2022年版一部规定的常规法对利咽解毒颗粒进展了细菌、霉菌及酵母菌数回收率的试验。1材料1.1样品利咽解毒颗粒消费厂家：神威药业集团，批号10090732、10090931、100

2、90932。规格：每袋装6g无蔗糖，相当于饮片19g。1.2仪器设备脉动真空灭菌柜，型号XG1.U本文由论文联盟.LL.搜集整理山东新华医疗器械股份；生化培养箱，型号LRH-150B广东省医疗器械厂；电热恒温培养箱，型号GHP-9160上海一恒科技；电热鼓风枯燥箱，型号101-2A上海沪南科学仪器联营厂；生物平安柜，型号BH-1300IIA/B3苏州安泰空气技术。1.3培养基及试剂改良马丁培养基批号090908、改良马丁琼脂培养基批号090325、营养琼脂培养基批号100105、玫瑰红钠琼脂培养基批号1003082、营养肉汤培养基批号091215、曙红亚甲蓝琼脂培养基批号1003082、胆盐乳

3、糖培养基批号1003022、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基批号091120、聚山梨酯80、司盘80、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠等。1.4验证用菌种：金黄色葡萄球菌B26003；大肠埃希菌B44102；枯草芽孢杆菌B63501；黑曲霉菌F98003；白色念珠菌F98001均购自中国药品生物制品检定所。2菌液制备方法分别取经33培养24h的金黄色葡萄球、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌营养肉汤液体培养物1l，参加至9l0.9%无菌Nal溶液中，10倍稀释至10-5约为50100fu/l的菌悬液，备用。取经25培养48h的白色念珠菌改良马丁液体培养物1l，参加至9l0.9%无菌Nal溶液中

4、，10倍稀释至10-6约为50100fu/l的菌悬液，备用。取经25接种黑曲霉的新颖培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，2328培养57天，参加35l含0.05%l/l聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后用塞有脱脂棉的弯型针头注射器吸出孢子悬液，再将脱脂棉去掉，将孢子悬液移至无菌试管内，用含0.05%l/l聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1l含孢子数50100fu的孢子悬液，备用。3供试液制备取样品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100l，振摇溶解制成1：10供试液。4回收率实验方法与结果4.1验证试验进展3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的

5、回收率。在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率应均不低于70%。假设试验组的菌回收率试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数；假设任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应采用培养基稀释法、离心沉淀法、薄膜过滤法、中和法等方法或结合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进展方法验证。4.2供试品对照组：取1：10的供试液，每个平皿中加1l，共加4个平皿，2个参加营养琼脂培养基，2个参加玫瑰红钠琼脂培养基，每个平皿参加培养基

6、约20l，摇匀，放冷凝固。细菌置33培养箱中培养72小时，霉菌酵母菌置25培养120小时计数。4.3试验组：取1：10的供试液1l和上述2.菌液制备中制备好的5种菌液1l，分别加至平皿中，参加营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基约20l，摇匀，放冷凝固。细菌置33培养箱中培养72小时，霉菌酵母菌置25培养120小时计数。4.4菌液组：取与试验组一样的5种菌液1l，分别加至平皿中，参加营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基约20l，摇匀，放冷凝固。细菌置33培养箱中培养72小时，霉菌酵母菌置25培养箱培养120小时计数。结果见下表：4.5稀释剂对照组：取稀释剂1l和上述制备好的阳性对照菌液1l，加至平皿中，参加营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基约20l，摇匀，放冷凝固。细菌置33培养箱中培养72小时，霉菌酵母菌置25培养箱培养120小时计数。5讨论根据从上述结果可以看出：1稀释剂对照组回收率试验均大于70%，说明稀释剂对测定无干扰2采用平皿法检验供试品，人工污染5株代表菌株，该供