2014年执业药师专一基础班讲义版1-62第18讲

1、重点1.系统适用性重点1.系统适用性试验及相关计2.常用的固定相和检测气相色谱法（gas chromatography，GC） 系采用气经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方相被测物质气化后，被载气带入色谱柱进行分离优点：分离效能高、灵敏度高、样品用量少、分析速度缺点：不适于难挥发和热稳定性差的物质的分分类1）按分分类1）按分离机制：吸附色谱法、分配色谱2）按固定相的物态：气-固色谱法、气-液色谱3）按色谱柱的粗细和填料：填充柱色谱法、毛细管柱色谱1. 载气源：气相色谱气，常用载气为氮气相为气体，称为载气，可用氦、氮、氢作2样部分：进样方式可分为溶液直接进样或顶空进样顶空进样：适宜于固体和液

2、体样品中挥发性组分的分离和测定方法：将固态或液态的供试品制成供式液后，置于密闭的小瓶中， 在恒温控制的一定体积的顶空气注入色谱柱。3. 色谱柱：为填充3. 色谱柱：为填充柱或毛细管填充柱常用固定液：有甲基聚硅氧烷、聚乙二毛细管柱常用固定液有：甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基硅氧烷、聚乙二醇按方法不同，毛细管色谱柱分为（1）开管型毛细管柱（涂壁细管柱WCOT、载体涂层毛细管柱SCOT）（2）填充型毛细管开管型毛细管柱，尤其是SCOT柱目前使用最多的毛细管柱4. 柱温箱：温度4. 柱温箱：温度的波动影响结果的重现性要求：控温精度在1，且温度波动小于每小时0.15. 检测器适合气相色谱的检测器有

3、：火焰离子化检测器（FID）、热导检测6. 数据处理系统仪、积分仪以及计算机工作站气相色谱检测器气相色谱检测器可分为浓度型检测器和质量型检测器两大类浓度型检测器的响应值与载气中组分的浓度成正比有热导检测器TCD、电子捕获检测器ECD等质量型检测器的响应值时间内进入检测器的组分质量成正比有火焰离子检测器FID、火焰光度检测器等1.火焰离子化检测器（FID）1.火焰离子化检测器（FID）：对氢碳化合物响应良150 防水气凝结（否则倒流），通常为 250 - 350 适合大多数药物，药物气相色谱分析一般选用FID检测器2.电子捕获检测器适用于含卤素、硫、氧、羰基基等强电负性基团化合物的检广泛用于有机

4、氯和有机残留量及含硫、卤素药物的测定3.质谱检测器（MS）：可用于多数药物的检测，能给出相应的结构信4.热导检测器 （TCD）：测定范围广，但灵敏度低，实际应用较少基于分配机制基于分配机制分离的气-液色谱法（GLC）是最常用的气相色谱方GLC的固定相是由固定液和载体组成载体：是一种惰性固体微粒，用作支持物固定液：是涂渍或化学键合在载体上的高沸点液体，在气相色谱操温度下为液体（一）固定（一）固定烃类：常用的角鲨烷（鲨鱼烷）是标准非极性固定液硅氧烷类 ：应用最广的通用型固定液 。 甲基硅橡胶，如（SE-30，最高使用温度醇类：聚乙二醇（如PEG-20M） 是药物分析最常用的固定液之一（二）载一般载

5、体为化学惰性的多孔性微粒。常用的载体为硅藻土型载体在各品种项在各品种项下规定色谱条件不能改变的条件：检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱材可以改变的条件,如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏除另有规定外，气相色谱法的系统适用性实验应照HPLC法项下的规进行1.内标2.外标1.内标2.外标具体内容同HPLC测定法项下相应内容与规定3.面积归一化4.标准溶液加入法：顶空进样时采用此法可消除基质效应的影含量（一）鉴别 ：（一）鉴别 ：供试液主峰的保留时间与对照品溶液一如：Ch.P采用气相色谱法对多烯酸乙酯进行鉴别（二）杂质检查：内标法、外标法、面积

6、归一化法和标准溶液加入法（三）含量测定：内标法、外标法和标准溶液加入法重点：1.电泳法的常用术重点：1.电泳法的常用术语（电泳淌度、电渗2.电泳法适用的药物电泳法（electrophoresis） 是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷等）在惰性支持介质（纸、醋、素薄膜、琼脂糖凝胶、聚丙酰胺凝胶等）中，在电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方泳区带图谱并计算其含量（%）的方法其在电场中，带电在电场中，带电粒子的电泳迁移速度v （ -电泳淌度；E电场强度电泳淌度：场强下离子的平均电泳速度电泳淌度与组分的荷质比成正双电层与电渗冲液带正电，且形成双电层。

7、在电场的作用下，带正电的缓冲液整体向负极移动，形成电渗。影响电泳分离：(1)缓冲影响电泳分离：(1)缓冲液的pH值和离子强度pH直接影响组分的荷电情况，是电泳分离的重要条件。（pH恒定离子强度太小则缓冲容，且区带易扩散。若太大，则因受相电荷离子的牵制力，组分迁移速度慢，且发热，也使区带扩散 。(2)电场强度 ：电场强度越大，淌度越大，分离越完全。但若大(3)样品浓度：通常为1%，太浓会拖尾，太稀则定量测定结果精密度1.纸电泳法：以1.纸电泳法：以色谱滤纸为支持物2.醋素薄膜电泳法：主要用于测定个蛋白质组分的相对含3.琼脂糖凝胶电泳4.聚丙烯酰胺凝胶电泳5.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法：测定蛋白质分子三、毛细管电泳法（capillary 淌度和（或）分配行为上的差异而实现组分分离的一种分析方法。毛细管电泳法的主要分三、毛细管电泳法（capillary 淌度和（或）分配行为上的差异而实现组分分离的一种分析方法。毛细管电泳法的主要分离模式1.毛细管区带电泳2.毛细管凝胶电泳3.毛细管等速电泳4.毛细管等电聚焦电泳5.胶束电动毛细管色谱 (MEKC或6.毛细管电色谱1.鉴别：主成分与对照品迁移率一1.鉴别：主成分与对照品迁移率一如： Ch.P用琼脂糖凝胶电泳法对肝素钠乳膏进行鉴别。2.分子量测定：以相对迁移率与标准蛋白质的分子量对数，用标准分子量计算供试