高表达ΔNp73基因对大肠癌细胞生物学行为的影响及其机制研究

1、高表达Np73基因对大肠癌细胞生物学举动的影响及其机制研究固然比年来对大肠癌治疗的研究已经获得了很大希望，但始终不克不及改变其发病率和殒命率高的特点，对患者预后亦无显着改进。因此，本研究探究np73基因的高表达对大肠癌细胞生物学举动的影响，为临床防治大肠癌提供较可靠的理论根据。1质料与要领1.1实行质料1.3台盼兰活细胞记数测定细胞的增殖本领与细胞活力胰酶消化劳绩细胞含悬浮及贴壁细胞制备单细胞悬液，以冷pbs悬浮，细胞浓度为1105/l。取9滴细胞悬液移入小试管内，加1滴0.4%台盼兰事情液，混匀，在3in内用血球记数板别离记数活细胞和死细胞。1.4细胞增殖曲线tt测定取对数生恒久细胞悬液20

2、0l/孔含2103个细胞接种至96孔板，于37、5%2、饱和湿度造就箱，每组天天取3个复孔，每孔参加20ltt5g/l造就4h后弃造就液，每孔参加二甲基亚砜(ds)200l，振荡10in溶解结晶紫。酶联免疫检测仪测定490n波长各孔光汲取值a490值。1.5流式细胞仪检测细胞凋亡1.6byden小室体外侵袭实行用改进的byden小室法1：用人工基质覆盖illiellhaber滤膜上的微孔，向小室内参加1105/l的细胞悬液,造就12h后取出滤膜,将下室面的细胞刮下，将膜结实，结晶紫染色细胞，高倍镜下随机取5个视野,计数细胞,取均匀值。1.8统计学要领数据效果以s表现,接纳t查验,spss10.

3、0统计学软件举行阐发。2效果2.1台盼兰拒染实行2.2tt法测定细胞生长曲线tt效果表现，转染np73的lv细胞较转染空载体pdna3的lv细胞组和空缺比较组细胞生长显着增快，差异有统计学意义p0.01，见图1。图1tt法测定细胞生长曲线2.3基因转染对大肠癌细胞凋亡率的影响图2np73转染对lv细胞凋亡的影响2.4byden小室体外侵袭实行3讨论研究表白np73由于n末了转录活化区缺失导致转录活化成效完全丧失,对p53和全长型p73的转录活化和促凋亡活性有显着的负调治作用2,3,np73除与大肠癌的产生、生长干系严密外，对神经母细胞瘤也是一个预示较差预后的分子标记4。但在某些肿瘤中，如甲状腺

4、肿瘤，np73却有着按捺增殖的作用5,6。由于np73基因在差异的肿瘤中对细胞凋亡和血管天生的影响差异，因此本实行以np73基因在对大肠癌细胞的生长、凋亡率、体外侵袭性以及对血管调治因子的表达调治作为重要切入点举行了研究。本实行接纳台盼兰拒染、tt测定对转染后细胞的体外生长环境举行了阐发。台盼兰拒染、tt测定均可反响细胞的增殖环境，但作用的机制与侧重点差异。台盼兰是一种有机染料，当细胞损伤或殒命时，可透过细胞膜与崩溃的dna结合，使其着色，而活细胞制止其进入，借此可区分活细胞和死细胞。本实行用该要领测定细胞的总数与存活率。tt是一种淡黄色的化合物，它到场活细胞线粒体的能量代谢。在活细胞线粒体内

5、的琥珀酸脱氢酶可将tt复原成难溶性的紫兰色结晶物frazan并沉淀在细胞中，而死细胞无此成效。在必然的细胞范畴内，tt结晶物形成的量与活细胞数成正比。ds能溶解细胞中蓝紫色的结晶物，用酶联免疫检测仪在490n波优点测定其光汲取值，可以间接反响活细胞数目。我们以为，台盼兰拒染实行操纵简朴，便利快捷，但效果受报酬因素影响较多。tt法较客不雅正确，是一种较好的断定细胞增殖的指标，而byden小室体外侵袭实行，那么为检测大肠癌细胞转染np73基因后的侵袭力改变提供了直接证据。本实行将3种实行要领的效果相结合阐发更具正确性和说服力。进一步流式细胞阐发提示np73基因转染lv后细胞凋亡比例显着淘汰。这一效果提示np73基因过表达可以促进大肠癌细胞的恶性增殖，其大概的机制是np73的过表达通过影响p73的反式激活而导致其启动子活性的削弱,按捺p73诱导的凋亡2。综上所述，np73以高表达的方法到场大肠癌的产生生长，按捺大肠癌细胞凋亡，上调血管天生因子vegf的表达，促进了大肠癌血管增生，加强了大肠癌细胞的侵袭性。鉴于np73基因对大肠癌细胞的这些影响,我们以为，对np73举行检测，有利于从基因程度相识大肠癌的产生气