鼻NKT细胞淋巴瘤的免疫表型、EBV感染及TCRγ基因重排的检测

1、鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型、EBV熏染及TCR基因重排的检测刘繁荣，钟清玲，熊小亮，朱静，宋恩霖，温文【摘要】目的检测鼻NK/T细胞淋巴瘤NK/TL的免疫表型、EBV熏染及TR基因重排，为诊断和区分诊断提供根据。要领网络诊断鼻NK/TL48例患者白腊包埋标本，用免疫组化SP法标识表记标帜LA、D79、D20、D56、D3、D45R及EBV抗体研究其免疫表型；EBER探针原位杂交要领检测EBV编码的小分子RNAEBER；聚合酶链式反响扩增要领检测TR基因重排。效果48例鼻NK/TL均表达LA，D3、D45R、D56和EBV阳性率别离为44%、52%、73%和19%，D79和D20均阴性；EB

2、ER阳性率为81%；TR基因重排阳性率为19%。结论鼻NK/TL免疫表型不同等，并非全部病例D56阳性，白腊切片中D3阳性定位于细胞质；EBER在肿瘤细胞中高表达，提示它们大概为NK细胞泉源；部门TR基因重排阳性病例应为鼻NK样T细胞淋巴瘤。【关键词】鼻NK/T细胞淋巴瘤；免疫组化；原位杂交；聚合酶链式反响Keyrds：NK/Telllypha;Iunehistheistry;Insituhybridizatin;PlyerasehainReatin0弁言鼻NK/TL是我国较常见的面中线部恶性肿瘤，以往诊断为中线恶性网状细胞增生症或多形性构造细胞增殖症，进一步被证明为鼻NK/TL。但是，如今对

3、鼻NK/TL的免疫表型、EBV熏染、肿瘤细胞泉源等题目尚存在争议。本研究对48例鼻NK/TL病例标本，接纳多种要领，阐发其免疫表型、EBV熏染及TR基因重排环境，为其诊断和区分诊断提供根据。1质料与要领1.1病例网络选自医学院病理学教研室和附院病理科比年来鼻NK/TL病例48例，另拔取布满性大B细胞淋巴瘤DLBL11例和外周T细胞淋巴瘤PTL8例作为比较，每例经2名以上淋巴瘤诊断履历富厚的病理专家复片确诊。全部病例均为白腊包埋构造。1.2免疫构造化学染色接纳SP法,LA、D79、D20、D56、D3、D45R及EBV抗体和DAB显色试剂盒均购自福州迈新公司。取白腊包埋构造3厚一连切片，通例脱蜡

4、、水化，一抗4留宿，DAB显色，苏木素复染。用PBS取代一抗作阴性比较。细胞膜和(或)细胞质呈棕黄色颗粒为阳性。1.3原位杂交因鼻NK/TL与EBV熏染有较高的相干性，我们举行了EBER原位杂交的检测。试剂盒购自福州泰普公司。白腊切片卵白酶K消化，用地高辛标识表记标帜的EBV寡核苷酸探针杂交，DAB显色，苏木素复染。以EBER阳性的鼻咽癌为阳性比较，用TBS取代探针作阴性比较。细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。1.4TR基因重排接纳DNA纯化试剂盒(QIAGENE公司)提取白腊包埋构造的DNA，TR通用引物TVG/TJX(GIBBRL公司)基因扩增，琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外光灯不雅察效果

5、。用人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株的DNA作阳性比较，以2例淋逢迎反响性增生作阴性比较。PR阳性判断尺度1：带宽不凌驾1，边沿整洁,条带在盼望范畴内。2效果2.17种抗体在48例鼻NK/TL和19例比较组中的表达见表1。全部检测的48例鼻NK/TL和比较组19例淋巴瘤均表达LA100%；21例44%表达D3，阳性定位于细胞质，见图1。8例比较组外周T细胞淋巴瘤定位于细胞膜；D56，见图2。D45R和EBV阳性例数别离为35例73%、25例52%和9例19%；全部检测的48例鼻NK/TL均不表达D79和D20；比较组19例均不表达D56和EBV。2.2EBER原位杂交效果见表2。48例鼻NK/

6、TL中有39例81%为EBER阳性，阳性细胞别离占肿瘤细胞的30%90%，阳性细胞呈簇状或布满型漫衍，未见反响性小淋巴细胞EBER阳性，见图3；比较组19例淋巴瘤均EBER阴性。表17种抗体在48例鼻NK/TL和19例比较组中的表达略表2EBER检测与构造范例的干系略：标识表记标帜分子量；1：阳性比较；2：鼻NK/TL；5、6、7、8、9：PTL病例均见阳性条带；3：阴性比较；4：DLBL均未见阳性条带3讨论鼻NK/TL在我国明显高于西欧国度。但是，如今对鼻NK/TL的免疫表型、EBV熏染、肿瘤细胞泉源等题目尚存在争议，肿瘤细胞既能表达T细胞外貌标识表记标帜物D3、D45R等，也能表达NK细胞

7、的外貌标识表记标帜物D56，不克不及断定肿瘤细胞毕竟来自T细胞或NK细胞2。本研究选用6种淋巴瘤常用标识表记标帜物对48例鼻NK/TL举行检测，效果表现肿瘤细胞不表达B细胞标识表记标帜物D79和D20；D45R的阳性率为52%,与文献报道相似3。48例鼻NK/TL的D3阳性率为44%，阳性反响位于细胞质，而比较组8例PTL的D3阳性率为100%，且阳性反响位于细胞膜，与文献报道同等4。故阳性定位的不同也有助于鼻NK/TL和PTL的区分。本组48例病变的D56阳性率为73%，切合Jaffe等2检测的D56在鼻NK/TL中阳性率大于70%的报道。只管D56是如今认定的NK细胞外貌标识表记标帜物，但

8、是我们的研究效果表白并非全部的鼻NK/TL都表达D56。13例D56阴性的病例中，4例D3阳性定位在胞质，切合鼻NK/TL的表示；对别的9例D56和D3均阴性的病例再次复片，均能寻到诊断鼻NK/TL的形态学特性，临床特点也切合诊断。在48例鼻NK/TL中，EBV免疫表型和EBER检出率别离为19%和81%，全部EBV免疫表型阳性的病例EBER均阳性，说明鼻NK/TL中EBV原位杂交检测优于免疫组化，故原位杂交检测EBER可作为鼻NK/TL紧张的帮助诊断，与文献报道相似5。本研究中，9例TR基因重排阳性，说明鼻NK/TL中存在T细胞的单克隆性增生，但基因重排率较文献6报道94.45%低，大概与其接纳TR特异性引物有关；同时D56均阳性，且单纯NK细胞系不出现TR基因重排，说明鼻NK/TL瘤细胞可同时泉源于