大肠杆菌培养基优化

1、大肠杆菌培养基优化第1页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二实验目的1.掌握发酵培养基的配制方法2.熟悉用正交试验优化发酵培养基的方法3.学习比浊法测定发酵液菌浓的方法第2页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二实验原理一、培养基的配制1.确定培养基的基本组成2.确定所用原材料的种类3.确定所用原材料的浓度配比关系第3页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二二、培养基优化1.单因素法2.正交试验法3.均匀试验设计第4页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二三、正交试验法1.概念利用已经设计好的表格-正交表-来安排试验并进行数据分

2、析的一种方法。它是从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。第5页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二2.基本工具正交表记号：Ln（tm）L：正交表的符号n：表的行数（可安排试验的次数）t：表中的字码数（水平数）m：表的列数（最多可安排因素个数）L8(27) L9(34) L16(45)第6页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二3.正交表的特点试验点分布均匀、整齐可比任何一列中各字码（水平）都出现，且出现的次数相等任何两列中各横行组成的数字对，包含着所有可能的数字对

3、，且各种数字对出现的次数相等第7页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二试验的基本步骤: 1明确任务 确定指标 2制定因素水平表（1）确定因素（A、B、C）（2）选择因素的变化范围（3）确定因素水平数（4）制定因素水平表第8页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二 3设计试验方案（1）选择正交表（2）表头设计（不混杂）（3）列出试验方案（4）进行实验第9页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二4析试验结果 (1）方法一：直接比较 (2)方法二 :直观分析直观分析法是通过对每一因素的平均极差来分析问题。所谓极差就是平均效果中最大值和最小值的差。有了

4、极差，就可以找到影响指标的主要因素，并可以帮助我们找到最佳因素水平组合。 极差的大小反应在所选择的因素水平范围内该因素对测定结果影响的程度。极差大的因素在所选择的因素水平范围内对测定结果的影响最大，在测试过程中必须严格控制。第10页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二四、比浊法测定发酵液菌浓细菌培养物在生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高。细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度（OD值），表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进而反映出其相对生长量。 第11页，共1

5、4页，2022年，5月20日，15点9分，星期二操作步骤一、培养基的配制 1.将酵母浸膏、蛋白胨、氯化钠作为培养基的主要影响因素，每一因素设定3个水平，进行三因素三水平的正交试验。 2.按表2配制9组培养基入100ml锥形瓶中，每瓶25ml。二、灭菌 锥形瓶培养基：标记，加棉塞、报纸包扎。 1ml移液管2支 121，灭菌20min第12页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二三、接种将菌种（教师预先培养好）摇匀后用无菌移液管吸取0.5ml悬液，接到每一组培养基中（接种量要完全一样）四、发酵将三角瓶置于恒温摇床中，37，120rpm培养12h第13页，共14页，2022年，5月20日，15点9分，星期二五、比浊法测定各发酵液OD值取下摇瓶，以空白培养基为对照，于6