淮山药多糖的免疫调节作用研究

1、淮山药多糖的免疫调节作用研究【摘要】目的讨论淮山药粗多糖对小鼠的免疫调节作用。方法小鼠灌胃给予不同剂量200，400和800g/kg的淮山药多糖，1次/d，连续8d，进展nA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验TT法、测定血清溶血素测定半数溶血值法、小鼠碳廓清实验。结果山药多糖具有增强小鼠淋巴细胞增殖才能的作用，促进小鼠抗体生成的作用和增强小鼠碳廓清才能的作用。结论淮山药多糖具有一定的免疫功能增强作用。【关键词】淮山药；多糖；免疫调节Abstrat：bjetiveTinvestigatetheiunlgienhaneentfDisreappsitaThunb.plysaharide.ethdsDisr

2、eappsitaThunb.plysaharideindifferentdsages(200,400,800g/kg)eregivenbyIGfr8d.Aseriesftestserearriedut,suhasthespleenlyphellstransfratinfnAinduingethd(TTethd),helytitestfbldseruandhehreandusearbntest.ResultsTheresultsshedthatDisreappsitaThunb.plysaharideassignifianttnAinduedieLyphytetransfratintest；H5

3、0raisedinallthreenentratins;ratifnyte-arphagearbngraineliinatinhassignifianthangestthentrl.nlusinDisredppsitaThunb.plysaharidepssessesaptentialeffetfiuneregulatin.Keyrds：DisreappsitaThunb.;Plysaharide;Iunityderatin山药属常用中药，味甘、性平，具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精等作用。山药多糖DisreappsitaThunb.plysaharide是从山药中别离提纯的水溶性多糖成分，具

4、有免疫调节作用。以往有关山药的药理研究多针对河南省出产的铁棍山药和太谷山药等怀山药品种。而山药在全国大局部地区均有栽培，淮山药为其在淮河中下游地区江苏、安徽两省北部传统栽培品种。以食用为主，兼作药用。对淮山药等山药地方品种的药理作用至今仍缺乏研究。为了充分利用淮山药资源，本实验研究了江苏产淮山药粗多糖对小鼠的免疫调节作用。1材料将淮山药削皮切片，晒干后粉碎，枯燥后称取粗粉60目900.0g，参加适量蒸馏水在水浴中浸提，其间不断搅拌，静置冷却后离心3000r/in，5in除去不溶物，搜集上清液，减压浓缩。在冷却后的上清液中参加95%乙醇至醇含量在80%以上，不断搅拌，有大量沉淀生成，离心，搜集沉

5、淀，分别用无水甲醇和乙醚洗涤，以除去水分和杂质，得到灰白色粉末状粗多糖38.88g(1g粉末相当于生药23.14g)。粗多糖得率可以到达4.32%，该粗多糖中含有18.43%的山药多糖。1.3绵羊红细胞SRB与补体制备安康绵羊颈脉取血，将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中朝一个方向摇动，以脱纤维，用阿氏液保存于4冰箱保存备用。用时生理盐水2000r/in离心10in洗涤3遍。采集豚鼠血，别离出血清至少5只豚鼠的混合血清，前将1l压积SRB参加到5l豚鼠血清中，放4冰箱30in，经常振荡，离心取上清，分装小瓶，-70保存。用时以生理盐水按110稀释。2方法小鼠随机分为对照组给予蒸馏水及山药多糖200

6、，400，800g/kg13个剂量组，每组10只。灌胃体积0.1l/10g体重，1次/d，连续8d。2.1nA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验1640培养液用微孔滤膜过滤除菌，参加10%小牛血清、1%谷氨酰胺200g/l、青霉素100g/l、链霉素100g/l及2-巯基乙醇5l/l，用无菌H11l/L或无菌NaH1l/L调pH至7.07.2，制成完全培养液；用7.27.4的PBS缓冲液作溶剂，现用现配TT溶液5g/l；以3.5%的无菌NaH3将无菌Hansks液pH调至7.27.4；用双蒸水配制成100g/l的nA液，过滤除菌后，-20保存；在96l异丙醇中参加4lHl1l/L制成酸性异丙醇溶液。各

7、组动物连续灌胃至第8天，每鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾，于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用摄子轻轻将脾撕碎，制成单个细胞悬液，200目过滤，用Hanks液屡次洗涤、离心后悬浮于2l完全培养液中，用台酚染色计活细胞，调整细胞浓度为2106个/l，分两孔放入培养孔中，每孔1l，一孔加50lnA液，另一孔作为对照，置5%2，37培养72h，培养完毕前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7l，参加0.7l不含小牛血清的1640培养液，同时参加50lTT液，继续培养4h。培养完毕，每孔参加1l酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，移入1l比色杯中，于分光光度计，570n处测定光密度2。转贴于论文联盟.ll

8、.2.2血清溶血素测定半数溶血值H50的测定各组动物连续灌胃至3d时，每鼠腹腔注射2%v/v绵羊红细胞悬液0.2l。5d期间不停顿灌胃后，小鼠经眼眶取血于离心管中，放置1h，3500r/in离心15in，搜集血清，血清用生理盐水缓冲液稀释320倍。将稀释后血清1l置试管内，依次参加10%v/vSRB0.5l，补体1l用生理盐水按110稀释，另设不加血清的对照管以生理盐水代替。置37恒温水浴中保温30in后，冰浴终止反响。2000r/in离心10in。取上清液1l，都氏试剂3l于试管内，同时取10%v/vSRB0.25l加都氏试剂至4l，于另一支试管内，作为SRB的半数溶血值。充分混匀，放置10

9、in后，于540n处以对照管作空白，分别测定各管光密度值2。溶血素的量以半数溶血值H50表示，按以下公式计算：各小鼠的半数溶血值H50=样品管光密度SRB半数溶血时的光密度稀释倍数2.3小鼠碳廓清实验将印度墨汁用生理盐水稀释4倍制成用墨汁，称取1.0gNa23加蒸馏水至1000l配置成0.1%Na23溶液。各组动物连续灌胃至8d时，每鼠尾静脉注入注射用墨汁0.1l/10gb，注入后立即计时，于注入后0.5，6in分别从内眦静脉丛取血20l，加到2lNa23溶液中，用分光光度仪计在600n波长处测光密度值，以Na23溶液作为空白对照。颈椎脱臼处死小鼠，取肝脏、脾脏，用滤纸吸干脏器外表血污，称重3

10、。按以下公式计算廓清指数K：廓清指数K=lgD50-lgD6/(t6-t0.5)2.4数据统计计量资料用s)表示，各组间实验数据的比拟采用两样本均数t检验，P0.05有显著差异。3结果3.1nA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验TT法用加nA孔的光密度值减去不加nA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖才能。结果如下。表1淮山药多糖对小鼠淋巴细胞增殖才能的影响(略)以上结果说明山药多糖400，800g/kg剂量时，具有增强小鼠淋巴细胞增殖的才能的作用。3.2血清溶血素的测定实验H50法结果见表3。表3淮山药多糖对小鼠血清溶血素的影响(略)以上结果说明淮山药多糖各剂量都具有促进小鼠抗体生成的作用。3.3小鼠碳廓清实验结果见表4。表4淮山药多糖对小鼠碳廓才能的影响(略)以上结果说明淮山药多糖800g/kg剂量时，具有增强小鼠碳廓清才能的作用。4讨论本研究测定了淮山药粗多糖对小鼠免疫功能的影响。结果显示淮山药粗多糖对能增强小鼠淋巴细胞增殖才能、促进小鼠抗体生成、增强小鼠碳廓清才能等作用。结果说明淮山药多糖对小鼠体液免疫、细胞免疫功能、非特异性