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文档简介

1、免疫组织化学技术方法小结倪灿荣 一、免疫组织化学根据示踪物不同，可构成不同的免疫组化方法 1.荧光素-免疫荧光组化技术 直接法 间接法 LsAB法 2.酶(HRP-AKP)-免疫酶组化技术 直接法、间接法、桥法、PAP法、双PAP法、APAAP法、Epos法、EnVision法、UIP法、PicTureTMplus法、ABC法、S-P法 3.金IGSS、IGS组织抗原第一抗体过氧化物酶直接法酶桥法组织抗原第一抗体第二抗体第三抗体（抗酶抗体）HRP组织抗原第一抗原第二抗体PAP复合物PAP法HRP组织抗原第一抗原第二抗体PAP复合物双PAP法HRPAPAAP法组织抗原一抗HRP多聚骨架EPOS

2、方法 3.亲和细胞化学方法-生物素和卵白素 ABC法、LsAB法(S-P法)、CSA法LSAB法ABC法与S-P法的特点和区别点特点 1.均为亲和细胞化学方法； 2.生物素化二抗与特异性一抗结合； 3.亲和素(Avidin)与生物素(Boitin)结合； 4.亲和素与链霉亲和素(Streptavidin)均有四个结合位点,其中三个位点与酶(HRP和AKP)结合,一个位点与生物素结合。ABC法与S-P法的特点和区别点区别点 1. ABC(SABC)法将酶标记在生物素(Bi-HRP)上,而S-P法将酶直接标记在链霉亲和素上(四个位点中的三个标记上酶分子)； 2.应用时ABC法应在30min前将av

3、idin与bio-HRP等量混合，而S-P法不需耍。问题1.免疫组化直接法、间接法、桥法与PAP法的共同点和不同点？2.PAP法、ABC法、EnVision法的共同点和不同点？3.免疫荧光组化法、免疫酶组化法和免疫金银组化方法间的共同点和不同点？4.PAP法、ABC法、EnVision法和IGSS法的共同点和不同点？5.S-P法与CSA法的共同点和不同点？CSA法原理图二、与其他技术相结合的免疫组化方法 RCA法 PCR-免疫组化方法 RCA是一种能够在恒温条件下，使标记在抗体上的寡核苷酸，在DNA聚合酶的作用下，加入互补并标记有示踪物的寡核苷酸，随着扩增循环的进行，将大量的示踪物沉淀在抗原抗

4、体复合物的周围，或杂交分子周围，再通过IHC方法再放大示踪物。 原位免疫PCR Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表达了蛋白A与链霉亲和素的嵌合体分子获得成功，建立了免疫PCR技术,一种新的抗原检测系统，随后在免疫PCR的基础上，建立了在细胞或组织原位检测抗原的原位免疫PCR（in situ immuno-PCR）。 HRP特异底物为H2O2 ，在分解H2O2过程中，与H2O2形成初级复合物，无电子供体时，反应不再继续进行，当电子供体存在时，反应以一定的速度形成第二种复合物。 之后HRP催化H2O2已形成的中间型产物，迅速生成水，酶被还原，电子供体被氧化、聚合，再经氧化环化，最后形成吲哚

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