细胞传代实验报告

1、细胞传代培育一.试验目的初步把握哺乳动物细胞的原代培育与传代培育的根本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下根底。二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培育条件下使其生存、生长、生殖或传代，这一过程称为细胞培育。细胞培育技术的最大优点是使我们得以直接观看活细胞，并在有把握的环境条件下进展试验，避开了体内试验时的很多简单因素，还可以与体内试验互为补充，可同时供给大量生物性状一样的细胞作为争辩对象，消耗少，比较经济，因此成为生物学争辩的重要手段。细胞培育可分为原代培育和传代(继代)培育。直接从体内猎取的组织细胞进展首次培育为原代培育；当原代培育的细胞增殖到达肯定密度后，则需

2、要做再培育，马上培育的细胞分散后，从一个容器以 1：2 或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培育，为传代培育，传代培育的累积次数就是细胞的代数。细胞培育是一种程序简单、要求条件多而严格的试验性工作。全部离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph 值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的标准和要求，特别是无菌操作是细胞培育成败的关键。三、材料和试剂1、细胞：2932、试剂：0.25胰酶、164010小牛血清3、仪器和器材：倒置显微镜，培育箱、电动枪，培育板，吸液枪，5ml 玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培育板中原来的培育液吸去。212ml 0.25胰酶溶液，使板内幕胞都浸入溶液中。32

3、ml培育箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再依据 观看的生长状况确定的传代比例传代剩余的细胞拿来做细胞计数4ml 左右的培育液前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培育板放入培育箱整理整理超净台附：消化液配制方法：2.5100ml10 xpbs1l，滤器过滤除菌，4保存，37下回温。10 x pbs配方：na2hpo4(14.2g)kh2po4(2.32g)nacl(80g)kcl(2.02g)(调至ph=7.4五、试验结果22到达七八成满。这时需再次传代六、争辩与反思无菌操作中的留意事项75 2030前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，翻开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成

4、。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端， 将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应当在酒精灯的四周进展。每天观看细胞形态，把握好细胞是否安康的标准：安康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。多做，熟能生巧篇二：细胞生物学试验 传代培育1、了解动物细胞传代培育的根本原理。2、把握动物细胞传代培育的根本操作，并对hela 细胞进展传代培育。hela 是 henriettalackshenriettalacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各争辩机构，并无限次地生殖分

5、裂下去。培育细胞的特性：贴附生长：必需贴附于支持物外表才能生长。见于各种实体瘤细胞。悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物外表。见于各种造血系统肿瘤细胞。每代贴附生长细胞的生长过程：1、游离期 细胞接种后在培育液中呈悬浮 状态也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。1042104、血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白生长基质正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。4、埋伏期 此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株埋伏期一般为6245、对数生长期 细胞数随时间变化成倍增长，活力最正确，最适合进展试验争辩。6、停顿期平台期 细

6、胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂细胞传代方法1、悬浮生长细胞传代离心法传代：离心1000 转/分去上清，沉淀物加培育液后再混匀传代。 直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培育液去除l2 一 23，用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。2.悬浮生长细胞传代hela此类细胞局部呈现贴壁生长现象 进展传代。3、贴壁生长细胞传代承受酶消化法传代。常用的消化液有0.25的胰蛋白酶液。细胞培育用液的配制1、d-hanks氯化钠 80.0g 磷酸氢二钠nahpo 2ho 0.6g 氯化钾 4.0g 磷酸二氢钾 0.6g 三蒸水 1000ml2、d-hanksd-hanks100ml 三蒸水 896ml

7、0.5% 酚红液 4ml3、消化液：胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分别。胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过肯定限度会损伤细胞。胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无 ca2+、mg2+的 pbs 缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25 。用滤器过滤除菌。胰蛋白酶液消化时间：2-10 分钟。用含血清培育液终止其对细胞的消化作用完全培育基的组成根底培育基80一95血清5一20一般加10碳酸氢钠2.0 g/l青、链霉素各100卑位毫升血清质量好坏是试验成败的关键。常用血清有胎牛血洁、生牛血清、小牛血情、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最

8、好。消退补体活性56 ，30 血清的消毒：过滤除菌试验用具：离心管2支，移液枪每个台面一把，枪头，吸管4根，培育皿2试验药品：0.25胰酶，dhanks，1640用 75然后用 75%乙醇擦一下台面，点燃酒精灯。取尖吸管、吸量管各一支，套好吸球，放置在专用的架上。从冰箱中取出0.25胰酶、dhanks、培育基。可以把胰酶和dhanks 的瓶盖翻开或者拧松。取待传代的细胞，用尖吸管弃去旧的培育基，参加dhanks。轻轻摇动后将hanks 弃掉。25 分钟后快速将消化液吸出。消化时间长短是试验成败的关键，宁可短消化，不能过消化。否则细胞会变死。在倒置显微镜下观看，当细胞质回缩，胞间间隙加大为消化适

9、宜。取培育基参加细胞，反复轻轻吹打培育皿壁，制备细胞细胞悬液。吹打的部位均匀， 从上到小，从左到右，挨次进展吹打，保证各个部位的培育细胞均能吹打到，成片的细胞已经分散成小的细胞团或者单细胞便停顿吹打。吹打时用力不要过猛， 尽量不要消灭气泡，以免损伤细胞。1000rpm5 无需准确计数时离心可略细胞离心毕，尖吸管弃去上清，吸取培育基适量，参加离心管，将细胞重悬、吹匀。无需准确计数时离心可略吸量管吸取适量培育基1.5ml0.5ml1105106/ml37 度c02待培育基本身为红色，当ph2的培育基吸掉，更换颖培育基连续培育。培育基：rm164010%胎牛血清留意事项 灯火焰。每次最好只进展一种细

10、胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培育用液应严格分开。每天观看细胞形态，把握好细胞是否安康的标准：安康细胞的形态饱满，折光性好， 生长致密时即可传代。如觉察细胞有污染迹象，应马上实行措施，一般应弃置污染的细胞，假设必需挽救，可加含有抗生素的bss 或培育基反复清洗，随后培育基中参加较大量的抗菌素，并经常更换培育基等篇三：原代细胞培育试验报告试验：细胞培育试验目的初步把握哺乳动物细胞的原代培育与传代培育的根本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下根底。试验原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培育条件下使其生存、生长、生殖或传代，这一过程称为细胞培育。细胞培育技术的最大优点是

11、使我们得以直接观看活细胞，并在有把握的环境条件下进展试验，避开了体内试验时的很多简单因素，还可以与 因此成为生物学争辩的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的争辩领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。 细胞培育可分为原代培育和传代(继代)培育。直接从体内猎取的组织细胞进展首次培育为原代培育；当原代培育的细胞增殖到达肯定密度后，则需要做再培育，马上培育1：2代培育，传代培育的累积次数就是细胞的代数。细胞培育是一种程序简单、要求条件多而严格的试验性工作。全部离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph 值、无机盐影响，消毒、配液等均有

12、严格的标准和要求，特别是无菌操作是细胞培育成败的关键。试验用品材料和标本 乳兔、hela器材和仪器 手术器械、平皿、培育瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培育箱、倒置显微镜。2.3试剂含有5小牛血清的mem0.01mol pb0.2胰蛋白酶一 edta75乙醇。试验方法原代细胞培育原理细胞培育(cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、生殖和传代，进展细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的争辩。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，进展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由

13、体内直接取出组织或细胞进展培育叫原代培育。原代培育 动物的胚胎、幼仔的脏器等更简洁进展原代培育。操作取材75乙醇的烧杯中数秒钟消 剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿中。切割用灭菌的pbs 液将取出的脏器清洗三次，然后用眼科手术剪刀认真将组织反复剪碎，直1mm3pbs钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。消化、接种培育0.250.02edta1ml，参加离心管中，与组织块混匀后，加上管口塞子，37810510ml5mem吹打混匀，移入二个培育瓶中，置于二氧化碳培育箱中培育。结果细胞接种后一般几小时内就能贴壁，并开头生长，如接种的细胞密度适宜，5 天到一周即可形成单层。传代细胞培育原理体外培育的原代

14、细胞或细胞株要在体外持续地培育就必需传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的连续。培育的细胞形成单层集合以后，由于密度过大生存空间缺乏而引起养分枯竭，将培育的细胞分散，沉着器中取出，以1:2l:3比率转移到另外的容器中进展培育，即为传代培育。细胞“一代”指从细胞接种到分别再培育的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代36常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数100 个细胞。一般0.20.53523是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进展各种试验。操作hela510.在倒置镜下观看被消化的细胞假设细胞变园相互之间不再连接成片这时应马上在超净台

15、中将消化液倒掉，参加35ml颖培育液，吹打，制成细胞悬液。将2ml 左右，加到另一个培育瓶中并向每个瓶中分别加3ml塞，送回二氧化碳培育箱中，连续进展培育。结果224单层，需要再次进展传代。器材及液体的预备和无菌操作的留意事项器材和液体的预备细胞培育用的玻璃器材12， 2pbs1520memg6无菌操作中的留意事项75 2030严禁用手直接拿无菌的物品，如瓶塞等，而要用器械，如止血钳、镊子等去拿。培育瓶要在超净台内才能翻开瓶塞，翻开之前用乙醇将瓶口消毒，翻开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，翻开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁

16、筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应当在酒精灯的四周进展。试验报告原代细胞和传代细胞培育有哪些区分?总结一下你自己的阅历，怎样才能既快速，又保证无菌操作。 | 评论boydead |28%擅长领域： 暂未定制提问者对答复的评价：感谢相关内容2022-12-11 细胞培育的试验报告怎么写呢？2022-03-12 细胞培育如何计数？ 132022-10-07 细胞培育 52022-10-19 羊水穿刺细胞培育失败 162022-04-28 动物细胞培育的留意事项 18细胞培育:根本技术细胞培育:pbs细胞培育:血清细胞培育:二氧化

17、碳2022-03-08 动物细胞培育 :根本技术指南 (第 5 版) 中英文版本可以也发给我一份吗？.2022-10-27 动物细胞培育-根本技术指南第五版 英r.i.弗雷谢尼 著，章.2022-01-09第5版pdfnasa10.12022-05-16 我在查找动物细胞培育：根本技术指南第五版.pdf12022-12-21940.1更多关于细胞培育:根本技术 的问题22022-09-13 10:24 202202215 |细胞培育试验目的初步把握哺乳动物细胞的原代培育与传代培育的根本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下根底。试验原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培育

18、条件下使其生存、生长、生殖或传代，这一过程称为细胞培育。细胞培育技术的最大优点是使我们得以直接观看活细胞，并在有把握的环境条件下进展试验，避开了体内试验时的很多简单因素，还可以与体内试验互为补充，可同时供给大量生物性状一样的细胞作为争辩对象，消耗少，比较经济，因此成为生物学争辩的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的争辩领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。 细胞培育可分为原代培育和传代(继代)培育。直接从体内猎取的组织细胞进展首次培育为原代培育；当原代培育的细胞增殖到达肯定密度后， 1：2 或其他比率转移到另一个或几个容

19、器中扩大培育，为传代培育，传代培育的累积次数就是细胞的代数。细胞培育是一种程序简单、要求条件多而严格的试验性工作。全部离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph 值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的标准和要求，特别是无菌操作是细胞培育成败的关键。试验用品材料和标本 乳兔、hela超净工作台、二氧化碳培育箱、倒置显微镜。2.35小牛血清的mem0.01mollpbs，0.250.02edta75乙醇。试验方法原代细胞培育原理细胞培育(cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、生殖和传代，进展细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的争辩。近年来，广

20、泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，进展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进展培育叫原代培育。原代培育 动物的胚胎、幼仔的脏器等更简洁进展原代培育。操作取材75乙醇的烧杯中数秒钟消 剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿中。切割用灭菌的pbs 液将取出的脏器清洗三次，然后用眼科手术剪刀认真将组织反复剪碎，直1mm3pbs钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。消化、接种培育0.250.02edta1ml，参加离心管中，与组织块混匀后，加上管口塞子，37810510ml5mem吹打混匀，移入二个培育瓶中，置于二氧化碳培育箱中培育。结果细胞接种后一般几小

21、时内就能贴壁，并开头生长，如接种的细胞密度适宜，5 天到一周即可形成单层。传代细胞培育原理体外培育的原代细胞或细胞株要在体外持续地培育就必需传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的连续。培育的细胞形成单层集合以后，由于密度过大生存空间缺乏而引起养分枯竭，将培育的细胞分散，沉着器中取出，以1:2l:3比率转移到另外的容器中进展培育，即为传代培育。 细胞“一代”指从细胞接种到分别再36 次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停顿期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数100 个细胞。一般0.20.53523是活力最好时期，称指数增生期(对

22、数生长期)，适宜进展各种试验。操作hela510在超净台中将消化液倒掉，参加35ml2ml3ml送回二氧化碳培育箱中，连续进展培育。结果224单层，需要再次进展传代。器材及液体的预备和无菌操作的留意事项器材和液体的预备细胞培育用的玻璃器材12， 2pbs1520memg6无菌操作中的留意事项75 2030 翻开之前用乙醇将瓶口消毒，翻开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，翻开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从 总之，在整个无菌操作过程中都应当在酒精灯的四周进展。试验报告(1).原代细胞和传代细胞培育有哪些区分?篇四：试验五 细胞的传代培育5 细胞的传代培育一、试验目