粗叶悬钩子根部多糖含量测定

1、粗叶悬钩子根部多糖含量测定 周建衡，李天骄，洪振丰，胡娟【摘要】目的建立粗叶悬钩子根部多糖的含量测定方法。方法利用苯酚-硫酸法显色，标准曲线在490n处分光光度法测定粗叶悬钩子根部多糖含量。结果回归方程：Y=0.8325X+0.0223，r=0.9998，测得粗叶悬钩子根多糖含量9.473%，平均回收率为99.69%，RSD=0.56%n=6。结论该方法简便，精细度及重现性均较好，可用于粗叶悬钩子多糖的提取和含量测定。【关键词】粗叶悬钩子；多糖；苯酚-硫酸法;分光光度法Abstrat：bjetiveTstudytheptiuextratinpressfplysaharidesfrRubusal

2、eaefliusPir.ethdsThententfplysaharidsfrRubusaleaefliusPirasdeterinedbyspetrphtetryat490nResultsTheregressinequatinasY=0.8325+0.0223，r=0.9998TheperentfplysaharideinRubusaleaefliusPiras9.473%.Theaveragereveryrateas99.69%andRSDas0.56%(n=6)nlusinTheethdisprvedtbesiple，aurateandreliable，anditanbeusedtext

3、ratanddeterinetheplysaharidesfrRubusaleaefliusPir.Keyrds：RubusaleaefliusPir；Plysaharide；Deterinatin粗叶悬钩子为双子叶植物蔷薇科植物，粗叶悬钩子的根、叶均可入药，具有活血化淤、清热解毒之成效1，能清利湿热，并且使湿热内蕴所致的淤毒去除。据广州部队编写的?常用中草药手册?记载：“活血祛淤，清热止血，治急慢性肝炎、肝脾肿大、行军性血红蛋白尿、乳腺炎、外伤出血、口腔炎。?广西中草药?中记载：“清热，消肿，止血，散淤。在福建闽南安溪一带广泛应用于各型肝炎的治疗，有着良好的民间用药基矗本文采用苯酚-硫酸法测

4、定粗叶悬钩子根部多糖的含量，得到满意的效果。1仪器与药品2方法与结果2.1葡萄糖标准溶液的配制精细称取105枯燥至恒重的葡萄糖50.52g，用蒸馏水溶解并定容到100l即为0.5052g/l的葡萄糖标准溶液。2.4粗叶悬钩子多糖的提取及精制2将粗叶悬钩子根于ESP350型粉碎机中粉碎呈粉末，取粗叶悬钩子粉50g置于1000l烧瓶中，加水固液比110微沸回流3次，1h/次，抽滤，合并提取液，蒸发至300l，参加无水乙醇使得醇浓度不低于70%,析出沉淀,过滤得析出物，加水溶解再次抽滤得液体，用Sevag法除去蛋白重复3次，加无水乙醇使醇浓度达80%以上,置冰箱中静置过夜，倾去上清液得沉淀，加无水乙

5、醇搅拌后抽滤,得滤渣,滤渣用无水乙醇、丙酮洗涤屡次，沉淀枯燥得多糖纯品。转贴于论文联盟.ll.2.5换算因子测定准确称取65枯燥恒重的粗叶悬钩子多糖20g，置100l容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，作为多糖储藏液。准确量取多糖储藏液0.10l，加水至1.00l，按测定标准曲线的方法测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=/D式中：为多糖重量(g)，为测试液中据标准曲线计算得到的单糖浓度(gl-1)，D为多糖的稀释因子，测得f=2.595(n=6)。2.6稳定性实验取样品溶液、标准品溶液及精制多糖溶液各2.0l，照标准曲线制备项下方法，自“加苯酚试剂6.0l起，依法测定

6、吸收度，并分别于0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，60in测定，分析稳定性。结果样品溶液吸收度、标准品溶液吸收度、精制多糖溶液吸收度的RSD(%)分别为0.98，1.02，0.86，可知，样品液至少在1h内测定是稳定可靠的。2.7精细度实验精细称取粗叶悬钩子多糖25g，按照样品溶液制备和样品含量测定项下方法操作，测定吸光度，连续测定6次，平均值0.634，RSD为0.37%，说明精细度良好。2.8重现性实验取粗叶悬钩子多糖6份，按照样品溶液制备方法，分别制备6份质量浓度为0.1g/l的溶液，按照样品溶液制备和样品含量测定项下方法操作，测定吸光度值，平均值0.645，RSD

7、为1.66%，重现性良好。2.9样品含量的测定精细称取粗叶悬钩子粉末25g，用80%乙醇浸泡过夜，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，抽滤，弃去滤液，残渣继续以蒸馏水回流提取2h，抽滤，滤液连同滤纸反复洗至250l容量瓶中，定容，摇匀即得样品溶液。测定时，精细汲取样品液0.20l，加水至1.00l，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量(以粗多糖计)：多糖含量=Df100/。式中：为样品溶液的葡萄糖的浓度(gl-1)，D为样品溶液的稀释因子，f为换算因子，为样品的重量(g)，测得结果为9.473%。结果见表1。表1样品中多糖的含量略2.10回收率实验精细汲取样品液0.2l(6份)再分别精细参加等量的标准溶液，依样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值为99.69%，RSD为0.56%。结果见表2。表2回收率实验略3讨论本实验采用水提醇沉法提取粗叶悬钩子多糖，运用Sevage法除蛋白，纯化后的多糖以苯酚-硫酸比色法测定糖含量，此方法所需仪器通用、药品价格低廉，操作也方便，通过稳定性、精细度、重现性、加样