茄根酸性组分对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞核因子kB表达的影响

1、茄根酸性组分对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞核因子kB表达的影响【关键词】茄根摘要:目的:讨论茄根酸性组分的抗炎机理。方法:以淀粉诱导小鼠腹腔巨噬细胞，用LPS为刺激剂，诱导NF-kB的表达，再用NF-kBP65的抗体与其结合，用流式细胞术测定巨噬细胞外表NF-kBP65亚单位表达的荧光强度，反映NF-kB活化程度。结果:LPS刺激12h后，NF-kBP65的表达明显增加，茄根酸性组分能显著抑制NF-kB的表达P0.01。结论:抑制NF-kB的活化，可能是茄根酸性组分发挥抗炎作用的主要机理之一。关键词:茄根;酸性组分;抗炎;核因子kB;机理TheInflueneftheAidipnentsfAu

2、berginertttheurinePeritnealarphagesNFkBAtivatedbyLipplysaharideAbstrat:bjetive:Researhntheanti-inflaatryehanisftheaidipnentsfauberginert.ethds:Induedtheurineperitnealarphagesbythedisslubiltystarh，ativatetheurineperitnealarphagesiththeLipplysaharideLPS，jintheantibdyfNF-kBP65，ensuratetheflureseneinten

3、sityithflytetry.Results:After12hursativatedbyLipplysaharide，thpareiththedel，theaidipnentsfauberginertsignifiantlyreduententfthePGE2.nlusin:TheaidipnentsfauberginertsignifiantlyinhibittheX2ativities.TheeffetfinhibittheX2，aybeaainanti-inflaatryehanisfftheaidipnentsfauberginert.Keyrds:Auberginert;Theai

4、dipnentsAnti-inflaatryNulearfafr-kBehanis茄根为土家族常用药物，具有祛风利湿、清热止血、散瘀消肿等成效。临床用于治疗牙痛、风湿痹痛、冻疮等1。酸性组分是茄根抗炎的主要有效部位，对多种炎症，如关节炎、牙周炎等具有良好的治疗效果。为讨论茄根酸性组分的抗炎机理，我们就茄根酸性组分对核因子kBNF-kB表达的影响进展了研究。istar雄性大鼠按体重随机分为4组。分别为正常血清对照组，阳性对照组消炎痛，药物高、低剂量组。灌胃给药2次/d，连续5d。末次给药后1h，股动脉取血，别离血清，56水浴灭活30in，0.22滤膜除菌，参加DE培养基，配成20%含药血清培养液

5、，-20保存备用。转贴于论文联盟.ll.2.2腹腔巨噬细胞的培养57BL/6小鼠腹腔注射1%的可溶性淀粉，每只ll。3天后断头处死。腹腔注射Hanks液8l/只，无菌条件下洗出腹腔细胞1000r/in离心8in，细胞用Hanks液洗1次，作细胞计数，用含10%新生小牛血清的DE培养基调整细胞浓度至106ell/1。将细胞接种于4孔培养板中，每孔3l，37，5%2。培养箱内培养6h。2.3NF-kB的测定3用Hanks液洗去末贴壁细胞，参加不含新生小牛血清的培养基，饥饿12h。换液，于培养板中参加3l含药血清培养基，分组如下:阴性对照组、模型对照组参加含正常动物血清的培养基，阳性对照组消炎痛、药

6、物高、低剂量组分别参加含药血清培养基;除阴性对照组外，其余各组同时参加刺激剂LPS，使其终浓度为1g/l培养12h:每孔参加细胞消化液0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA11混合2l进展消化，待细胞变圆、悬浮后，取消化液1500r/in离心5in;弃上清液，细胞用PBS洗涤2次。参加150兔抗人NF-kBP6550l置4冰箱内过夜。用PBS洗涤3次，参加1100稀释的FIT标记的羊抗兔IgG50l，4作用2h。用PBS洗涤2次，细胞移入专用管中，用流式细胞仪检测其平均荧光强度。结果见表1，图1。表1对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NF-kB表达的影响略3讨论NF-kBnulearfatr-kB

7、是一个多功能核转录因子，具有广泛的生物学活性，激活后可促进细胞因子、粘附分子、趋化因子等基因转录，在炎症反响中起重要作用。本研究以淀粉诱导的小鼠腹腔巨噬细胞为对象，以LPS为刺激剂，诱导NF-kB的表达，再用NF-kBP65的抗体与其结合，用流式细胞术测定巨噬细胞外表NF-kBP65亚单位表达的荧光强度，反映NF-kB活化程度;通过茄根酸性组分含药血清使荧光强度降低的程度，判断茄根酸性组分对NF-kB的抑制作用。结果说明LPS刺激12h后，NF-kBP65的表达明显增加，与空白对照组比拟有显著性差异;茄根酸性组分与模型组比拟，能显著抑制NF-kB的表达P0.01见表1。提示茄根酸性组分发挥抗炎作用的分子机制可能在于抑制NF-kB的活化，从而控制了细胞因子、炎症相关酶如PLA2、环氧酶、5-脂氧酶、iNS等基因的转录及蛋白质的合成，进一步抑制各类炎症介质的分泌与释放。茄根资源丰富易得，茄根酸性组分临床用量小，疗效显著，毒副作用小，可望开发出NF-kB抑制剂，值得进一步研究和利用。参考文献:1国家中医药管理局?中华本草?编委会.中华本草，第7册，第1版.上海:上海科学技术出版社，1998:30