桦褐孔菌石油醚提取物的抗肿瘤作用研究

1、桦褐孔菌石油醚提取物的抗肿瘤作用研究【摘要】目的讨论桦褐孔菌石油醚提取物InntusbliquusPetrleuetherExtrats,IPE抗肿瘤作用。方法体外实验采用TT法测定了IPE对Hela肿瘤细胞的抑制率。体内实验，将接种S180肿瘤细胞后的小鼠随机分为5组，每组10只，给予IPE10d，停药后24h处死动物，称体重，摘出肿瘤，测定肿瘤抑制率、脾指数、胸腺指数、淋巴细胞转化率、NK细胞活性。结果在体外，IPE对Hela肿瘤细胞具有毒性作用；体内实验说明中大剂量IPE对荷瘤小鼠肿瘤生长具有抑制作用，可增加脾指数及胸腺指数，对体外淋巴细胞转化功能和NK细胞活性亦有增强作用。结论桦褐孔菌

2、石油醚提取物具有明显的抗肿瘤活性。【关键词】桦褐孔菌石油醚提取物抗肿瘤TheExperientalStudynAntiturEffetfPetrleuEtherExtratsfInntusbliquusAbstrat：bjetiveTstudytheantitureffetfpetrleuetherextratsfInntusbliquus(IPE).ethdsInvitrtest,theturinhibitryeffetstHelaellserestudiedbyTTethd.Inviv,theieereinulatedithS180turellsanddividedint5grupsran

3、dly(n=10),hihereadinisteredIPE10dntinuusly.TheieerekilledandEighed24hafterthelastadinistratin,andtheinhibitinratiftheturEIghtinthespleenindex,thyusindex,transfratinfuntinflyphyteandNKellativitieserealulated.ResultsThevitrtestshedIPEhadsignifiantautetxiityttheHelaturells.TheIPEuldinreasethelevelsfinh

4、ibitinratiftureightandthespleenindexandthyusindexinieandinreasethetransfratinfuntinflyphyteandNKellativitiesinvitr.nlusinTheIPEhasbviusantitureffet.Keyrds：PetrleuetherExtratsfInntusbliquus(IPE)；Antitur桦褐孔菌Inntusbliquus是一种大型真菌，主要分布于北纬4550的地区，如俄罗斯西西伯利亚、远东地区、中国黑龙江、吉林省长白山地区等。作为一种民间草药，桦褐孔菌在俄罗斯等国家已有很长的使用历

5、史。近年的研究也说明，它在抗肿瘤、抗HIV、治疗糖尿病等方面都具有一定的潜力15。成分研究说明，桦褐孔菌低极性提取物中含有大量的三萜类化合物，主要为羊毛甾醇、桦褐孔菌醇及其衍生物。本文通过体内和体外实验对桦褐孔菌中石油醚提取物抗肿瘤方面的作用及机理进展了研究。1材料与方法1.1药品的制备桦褐孔菌子实体购自大连王力灵芝行，由江苏省药用植物生物技术重点实验室郑维发教授鉴定，样品保存于江苏省药用植物生物技术重点实验室。将桦褐孔菌子实体称重、粉碎后用石油醚加热萃取屡次，过滤。滤液经浓缩枯燥后得到桦褐孔菌石油醚提取物，记为IPE。1.2动物与试剂1.2.1动物及瘤株昆明种IR小鼠，体重为202g，徐州医

6、学院实验动物中心提供，合格证号：苏动202202。自由摄食饮水，室温252。S180肉瘤细胞、Hela人宫颈癌细胞、K293人胚肾细胞，由中国科学院遗传与发育研究所提供。1.2.2试剂TT，美国Siga公司产品；DS，美国Siga公司产品；注射用环磷酰胺，江苏恒瑞药业股份产品，消费批号040221；生理盐水，徐州远恒药业产品，消费批号04121311；RPI1640培养基、RPI1640完全培养基，美国GIB公司产品；PBS溶液实验室自制。1.3方法1.3.1IPE对肿瘤细胞的抑制实验6分别取对数生长期的Hela细胞及K293细胞1105/l接种于96孔培养板中，150l/孔，然后参加50l不

7、同浓度的IPE，总体积200l/孔，药品的终浓度为0，50，100，200，300，500g/l，每组均设6个样本孔。在37，5%2、饱湿条件下培养72h，以TT比色法测吸光度并计算药物对肿瘤细胞的抑制率和对K293细胞的生长促进率。1.3.2IPE对小鼠S180肉瘤的抑制作用实验7取传代后7d的S180肉瘤细胞悬液2106，每鼠右后腋窝皮下接种0.2l。次日随机分组，每组10只，于接种后24h给药。分别为IPE高剂量组(240g/kg)，中剂量组(120g/kg)，低剂量组(60g/kg)，环磷酰胺阳性对照组(20g/kg)，生理盐水对照组以及正常对照组，均以0.2l/10g灌胃给药，1次/

8、d，连续10d。末次给药后24h，处死小鼠剥取瘤块，别离、摘取脾脏和胸腺，计算抑瘤率，脾指数和胸腺指数。1.3.3淋巴细胞增殖实验8荷瘤小鼠按1.3.2条件给药10d，于停药24h后将小鼠放血致死，取脾，按文献制备脾细胞悬液。将脾细胞浓度调整为4106/l，向96孔板参加脾细胞悬液100l/孔，然后参加1g/l的nA100l/孔，对照孔加RPI1640液，设5个复孔，置37，饱和湿度、5%2孵箱中培养72h，以TT法测D值，以D值大小反映淋巴细胞增殖反响。转贴于论文联盟.ll.1.3.4IPE促进NK细胞活性实验9同1.3.3处理动物和制备脾细胞，取不同药物浓度处理的脾细胞作效应细胞，调整细胞

9、浓度至1106/l，参加96孔培养板中，另取Hela细胞作为靶细胞，效应细胞:靶细胞=50:1，每份标本设3个复孔，同时设靶细胞对照组和效应细胞对照组，置37，5%2孵箱中培养4h，并以TT法于酶标仪570n波长处测光密度D值，并计算NK细胞活性。1.4数据处理所有数据均用SPSS11.5软件进展处理，以t-检验计算组间的差异。2结果2.1IPE对肿瘤细胞的抑制实验结果见表1。表1桦褐孔菌石油醚提取物对Hela细胞和K293细胞的增殖抑制略从实验结果可知，IPE各剂量组对肿瘤的抑制率均大，且根本呈现出剂量依赖关系，细胞毒作用明显。同时多个剂量组IPE对K293的生长都呈现较高的生长促进率，说明

10、了IPE对正常细胞的增殖无抑制作用。2.2IPE对小鼠S180肉瘤抑制率的影响结果见表2。表2桦褐孔菌石油醚提取物对小鼠S180肉瘤的肿瘤抑制率的影响略结果说明，与空白对照组相比拟，IPE的中大剂量组对荷瘤小鼠的肿瘤均具一定程度的抑制作用。结果还说明，IPE具有明显增加荷瘤小鼠脾指数和胸腺指数的作用，呈剂量依赖关系，且与阳性对照组间存在显著性差异。2.3淋巴细胞增殖实验结果见表3。表3桦褐孔菌石油醚提取物对小鼠淋巴细胞转化的促进作用略结果说明在nA的诱导下荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖普遍低于正常小鼠，而中大剂量IPE能有效进步实验D值，且与阳性对照组存在显著性差异P0.01，这说明IPE能有效地促进

11、淋巴细胞的增殖，可以进步荷瘤小鼠的免疫程度。2.4IPE促进NK细胞活性实验结果见图1。结果显示IPE能有效促进NK细胞对靶细胞的杀伤活性，呈现出明显的剂量依赖关系，而且中大剂量组明显高于环磷酰胺阳性对照组和正常对照组的NK细胞活性。3讨论从天然产物特别是大型真菌中挑选抗肿瘤活性物质是抗肿瘤新药物研发的一个重要方向。一般认为大型真菌是通过调节机体的免疫力，从而起到抗肿瘤的疗效的，但研究的重点多集中在真菌的水提物组分上。本研究通过体内外抗肿瘤实验和免疫药理学实验对桦褐孔菌多糖的抗肿瘤作用及机制进展了研究。体外对Hela肿瘤细胞的增殖实验说明当给药浓度为50g/l时，IPE就具有直接杀死肿瘤细胞的

12、细胞毒作用，并且呈现剂量依赖关系；同时实验还说明，IPE对正常细胞的增殖无抑制作用，大浓度时甚至能明显促进细胞生长。体内抗肿瘤实验的结果说明，120g/kg以上剂量的IPE灌胃给药时，对小鼠S180肉瘤均有一定的抑制作用。肿瘤的发生开展与机体的免疫调节功能亲密相关，其中由T细胞介导的细胞免疫起着更重要的作用，T细胞的激活是发挥细胞免疫效应的重要条件。NK细胞缺乏免疫记忆和H约束性，能溶解广谱的肿瘤细胞、包括同基因的、同种异基因的，以及异种的靶细胞，是一类在早期肿瘤免疫机制中起重要作用的效应细胞，对机体抗肿瘤起着重要作用。本研究在证实IPE具有良好抗肿瘤效果的根底上，讨论了IPE对小鼠S180肉

13、瘤的免疫调节作用及可能机理。实验说明IPE对两个主要免疫学器官脾脏和胸腺均有增重作用，并呈剂量依赖性。与阳性对照组相比，中大剂量组IPE可促进nA诱导的体外小鼠淋巴细胞转化。同时，各剂量组IPE对荷瘤小鼠体内NK细胞活性均有明显促进作用。以上结果显示，IPE的抗肿瘤作用可能是通过其细胞毒作用及调节机体的免疫力，刺激T细胞、NK细胞等功能来实现的。【参考文献】1黄年来.俄罗斯神秘的民间药用真菌桦褐孔菌J.中国食用菌,2001,21(4):7.2NazareizT,LedhshiZ,KnpaJ,etal.Studiesnantineplastiprpertiesfpriablique.II.stu

14、diesntheeffetfpriabliquanthegrthftransplantertursinanialsJ.Ntry,1961,11:401.3T.izun,.Zhuang,K.Abe,H.kat,T.Kih,S.Uai,S.LelerandL.Eijer,AntiturandhypglyeiativitiesfplysaharidesfrtheslertiaandyeliafInntusbliquus(Per.:Fr.)Pil,(Aphyllphryetideae)J.InternatinalJurnalfediinalushrs,1999,1:301.4ValentinaG.Babitskaya,NinaA.Bisk,NadezdaYu.itrplskaya,etal.elaninplexfrediinalushrInntusbliquus(Pers.:Fr.)Pilat(haga)(Aphyllphryetideae)J.InternatinalJurnalfediinalushrs,2002,4.139.5Yngui,Dng-SekKi,Kyung-hanPark.AntixidanteffetfInntusbliqu