高效液相色谱法测定姜连止泻片中盐酸小檗碱的含量

1、高效液相色谱法测定姜连止泻片中盐酸小檗碱的含量【摘要】目的建立姜连止泻片中盐酸小檗碱的高效液相色谱HPL含量测定方法。方法采用HPL法，色谱柱:atersSyetryShieldTRP18柱1503.9，5，流动相:乙腈-0.05lL-1磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至2.02278，检测波长:270n，流速:1.0lin-1，柱温：30。结果盐酸小檗碱在0.120.59g范围内呈现良好的线性关系r=0.9997，加样回收率为98.30，RSD为1.19n=6。结论该方法快速、简便、准确、重复性较好，结果可靠，可用于控制姜连止泻片制剂的质量。【关键词】姜连止泻片盐酸小檗碱高效液相色谱法Abst

2、rat：bjetiveTestablishanaurateethdfrthedeterinatinfberberinehydrhlrideinJianglianzhixieTablets.ethdsatersSyetryShieldTRP18lun(1503.9，5)inanvenat30asneed，ithabilephasensistingfaetnitrile-0.05lL-1ptassiudihydrgenphsphate(phsphateregulatinpHvaluet2.0)(22:78)andaUVdetetrat270n,theflrateas1.0lin-1.Results

3、Thelinearrangefberberinehydrhlrideasithin0.120.59g.Theaveragereveryas98.30%andRSDas1.19%(n=6).nlusinTheethdissipleandaurate,andanbeusedfrthequalityntrlfJianglianzhixietablets.Keyrds：JianglianzhixieTablets;Berberinehydrhlride;HPL姜连止泻片是由炮姜、黄连、益智仁、诃子肉、麦芽炒、白术炒、补骨脂盐等组成的纯中药制剂，具有补肾健脾，清肠止泻之成效，用于治疗慢性腹泻或五更泄泻，

4、肠鸣，腹胀、腹冷隐隐作痛，口淡、纳食减少，伴形寒肢冷，腰膝酸软等。姜连止泻片是北京中医药大学附属东直门医院姜良铎教授多年临床经历方。黄连为本品方中的君药，盐酸小檗碱是该药的主要有效成分，故以盐酸小檗碱为指标进展含量测定，控制成品的质量。参照?中国药典?2022年版部1，我们建立了姜连止泻片中盐酸小檗碱的HPL含量测定方法，该方法快速、简便、准确、重现性较好，结果可靠，可用于姜连止泻片制剂的质量控制。1仪器与试药L-2022高效液相色谱仪日本岛津公司；KQ250型超声波清洗器昆山市超声仪器，ettlerTledAG135十万分之一电子分析天平(瑞士ettler公司。盐酸小檗碱对照品中国药品生物制

5、品检定所提供，批号：110713-200208，供含量测定用)；姜连止泻片自制，批号：20220311、20220313、20220315；乙腈为色谱纯，水为纯洁水，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:atersSyetryShieldTRP18柱1503.9，5，流动相：乙腈0.05lL-1磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至22278，检测波长:270n，流速:1.0lin-1，柱温：30，进样体积：10l。2.2溶液制备2.2.1对照品溶液的制备精细称取盐酸小檗碱对照品3.96g，置10l量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精细汲取1l，置10l量瓶中，加甲醇溶解并定容至

6、刻度，摇匀，即得(每1l含盐酸小檗碱39.6g)。2.2.2供试品溶液的制备取本品适量，粉碎成细粉，称取细粉约0.15g，置50l的容量瓶中，参加盐酸甲醇110045l，超声处理(功率250，频率40kHz)30in，取出，放冷至室温，用盐酸甲醇1100定容至刻度，摇匀，滤过，即得。2.2.3阴性供试品溶液的制备按姜连止泻片制备工艺制得缺黄连的阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。转贴于论文联盟.ll.2.3线性关系考察分别精细汲取盐酸小檗碱对照品溶液0.0396gl-1)3，5，8，10，13，15l。在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪测定，以盐酸小檗碱峰面积为纵坐标Y，

7、盐酸小檗碱对照品的进样量为横坐标X，得回归方程为：Y=3.219106X+8.196104，r=0.9997。以上结果说明，样品进样量在0.120.59g范围内，盐酸小檗碱峰面积与进样量呈现良好的线性关系。2.4专属性实验汲取盐酸小檗碱对照品溶液、姜连止泻片供试品溶液及缺黄连的阴性对照溶液各10l，分别注入色谱仪。按上述方法进展测定，结果说明，盐酸小檗碱对照品与姜连止泻片中盐酸小檗碱的保存时间根本一致，阴性供试品溶液在盐酸小檗碱色谱峰位置处无相应的峰出现，说明本品中盐酸小檗碱来自姜连止泻片中的黄连，制剂中其他成分对盐酸小檗碱的测定不产生干扰。所得盐酸小檗碱对照品、供试样品及阴性供试品色谱图。见

8、图1。2.5精细度实验精细汲取25gl-1盐酸小檗碱对照品溶液10l，重复进样6次，计算得盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.88n=6，精细度良好。2.6稳定性实验精细汲取同一供试品溶液批号:20220311，分别于0，2，4，6，8，12h进样测定，记录峰面积，结果盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.29n=6，说明姜连止泻片供试品溶液在12h内稳定性良好。2.7重复性实验精细称取同一批姜连止泻片批号:202203116份，按“2.2.2项下方法制备供试液，并在上述色谱条件下进展测定。结果样品中盐酸小檗碱平均含量的RSD为1.37n=6，重现性较好。2.8加样回收率实验取本品准确含量的样品(批号：20

9、220311)0.075g，精细称定6份，置50l量瓶中。再分别精细参加盐酸小檗碱对照品溶液(1.5110gl-1)1l，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，进样10l，在上述色谱条件下测定。结果见表1。2.9样品测定在上述色谱条件下，分别精细汲取供试品溶液与对照品溶液各10l，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算3批9个样品中盐酸小檗碱的含量。结果见表2。表1加样回收率实验略3讨论3.1提取时间的考察本实验采用了超声处理的方法，考察了不同提取时间(10，30，60in)对含量测定的影响，结果说明选择超声提取30in盐酸小檗碱已提取完全。表23批姜连止泻片中盐酸小檗碱的每片含量略3.2检测波长确

10、实定经二极管阵列检测器180400n扫描，盐酸小檗碱紫外扫描图见图2。由图2可以看出盐酸小檗碱分别在270.0n和349.2n两个波长处有吸收，但考虑到在测定过程中使用乙腈作为流动相，在低波长处有紫外吸收，而349.2n响应不如270.0n，因此检测波长选择为270.0n。3.3流动相的选择根据文献报道2，3，选用乙腈0.05lL-1磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至22278为流动相对本品进展试验，色谱柱为atersSyetryShieldTRP18柱1503.9，5，所得色谱图的别离度好，保存时间较适宜，故本实验选用的流动相为乙腈0.05lL-1磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH值至2.02278，并将该条件的色谱图记录下来，以被测组分盐酸小檗碱峰计算理论塔板数为6554.7，同时计算盐酸小檗碱与相邻峰的别离度为1.74，根据实验结果，考虑到仪器、色谱柱、流动相的配制和温度等系统因素的影响，规定理论板数按盐酸小檗碱峰