红细胞渗透脆性检测仪测试报告

1、红细胞渗透脆性检测仪测试报告1背景资料人体红细胞约占血液总体积的40%，红细胞内含量最多的水分和血红蛋白分别占红细 胞的65%和32%。红细胞在低渗盐溶液中，水分透过细胞膜进入细胞内，使红细胞逐渐胀 大破裂，细胞内血红蛋白溢出即称为低渗性溶血。红细胞对低渗液溶血作用的抵抗能力称为 红细胞的渗透脆性。地中海贫血、缺铁性贫血患者红细胞内血红蛋白生成减少，细胞体积较 小，渗透脆性比正常人明显减小，因此红细胞渗透脆性在临床上常用于地中海贫血、缺铁性 贫血等小细胞性贫血的辅助诊断指标。2试验原理将血液样品与特定渗透压的低渗液混合，将未溶血红细胞作为构成该混合液浊度的主要 颗粒，选用一种未溶红细胞对其有较

2、高的吸光度，从红细胞溶出的游离血红蛋白等可溶性有 色物质对其有较弱吸光度的特定波长光源作为测定光源，利用不透光法对混合液进行比浊分 析，得出AD值（AD值与吸光度成反比），通过对AD值与“金标准”结果的综合分析后 确定临界区间。对于诊断系统的准确性评价，首先应知道受试者的真实情况，即哪些是对照 组，哪些是病例组，划分它们的标准就是“金标准。尽管“金标准”不需要十全十美，但 是它们应比评价的诊断系统更可靠，且与评价的诊断系统无关。因此在本项目测试方案中， 诊断系统为红细胞渗透脆性检测，“金标准”选用基因检测（即常说的PCR）。3试验设计及拟采用的方法（1）预试验：先利用旧的血样做测试，以检测样机

3、的各项性能是否符合测试要求。（2）利用样机对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行测试（每个血样重复N 3 次）。（3）将测得的AD值综合“金标准”的结果进行分析并确定临界区间。（允许有可接受 限度的假阳性存在）临界区间的确定：在确定的实验条件（测试步骤、温度、时间、试剂配制方法、试剂配 制参数等）下，用我们规范的操作方法，对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行大量 检测和统计学分析，观察样机做出的AD值分布规律是否符合“金标准”确诊的结果；正常 血AD值分布在一个特定区间，而地贫血AD值分布在另一个特定区间，理论上可能存在个 别离散点，但不影响判断，这两个区间的交界处即为临界区间。（4）拿

4、回来的血样尽量当天或下一天测试完毕。（5）初步拟至少测定“金标准”确诊的地贫血样与正常血样各200个，最好分多批次 取回（因血样保存期有限，一次取回太多样本如无法完成测试会造成浪费。（6）血样要求：抗凝全血（首选肝素抗凝血，其次EDTA-K2或枸橼酸钠抗凝血）; 尽量新鲜（理论上要求：2-5保存时间不宜超过24小时、室温保存不宜超过8小时）； 肉眼可见溶血的舍弃；每个血样的血量尽量1mlo4实验材料样机、台式电脑、比色皿、未知血样、1号地贫血样、2号地贫血样、3.5g/L NaCl -pbs 缓冲液（pH7.4）、一次性手套、医用橡皮胶手套。5测试步骤：（1）将待检测的采血管放置于样机试管架中

5、；（2）样机自动运行，对血样进行检测并报告结果；（3）对检测结果进行数据分析。6测试数据和曲线（1）未知血样滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为526nm的发光二极管做光源时其对应 光敏二极管的AD值与时间的变化曲线（图1）o未知血样滴入浓度5g/L盐水中，波长526nm5次重复测试的值随时间变化曲线1600155015001450值 1600155015001450值 1400D 1350A 130012501200115011001 36 71 106141 176211 246 281 316351时间（0.2秒）第次2第次4第次图1由图1曲线分析可知未知血样滴入浓度3.5g/L盐水中，

6、用波长为526nm的发光二极管 做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD值慢慢增大，从放进测试架开始T9（=15秒，AD值增大了 110 （由于滴入的血液量存在着一定的差异，所以测量结果显示出来的重复性 不大好）。（2）1号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为526nm的发光二极管做光源时其 对应光敏二极管的AD值与时间的变化曲线（图2）。1号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，波长526nm，5次重复测试的AD值随时间变化曲线1600 1550 1500 1450值 1400D 1350A 1300 1250 1200 1150 11001 36 71 106141 1762112

7、46281316351时间。.2秒）图2由图2曲线分析可知1号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为526nm的发光二 极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD值慢慢增大，从放进测试架开始T9（=16 秒，AD值增大了 52。（3）2号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为526nm的发光二极管做光源时其 对应光敏二极管的AD值与时间的变化曲线（图3）。2号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，波长526nm, 3次重复测试的AD值随时间变化曲线750700650750700650估600值550A 500450400350300广一 次第 2次 第 次1 35 69 1031

8、37171 205 239273 307341时间（0.2秒）图3由图3曲线分析可知2号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为526nm的发光二 极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD值慢慢增大，从放进测试架开始T9（=13 秒，AD值增大了 65。（4）未知血样滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为940nm的发光二极管做光源时其对应 光敏二极管的AD值与时间的变化曲线（图4）。未知血样滴入浓3.5 g/盐水中，波940nm5次重复测试的值随时间变化曲线2100205020001950值 19002100205020001950值 1900:挣嘲1怎啾愀林麒械*参林W袖祢痴。，绑

9、|屹 I1IA 1850：180017501700165011 31 61 91 121151181211241271301 时间（.2秒）第次第2次第3次第4 次第5 次图4由图4曲线分析可知未知血样滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为940nm的发光二极管 做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD值慢慢增大，从放进测试架开始T9(=17秒， AD值增大了 211。1号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为940nm的发光二极管做光源时其 对应光敏二极管的AD值与时间的变化曲线(图5)。1号地贫血液滴入浓3度g/盐水中，波长940nm 4次重复测试的值随时间变化曲线1950 1900

10、 1850 1800 值 1750A 1700 1650 1600 1550 1500第 次第欠-4次时间第 次第欠-4次图5由图5曲线分析可知未知血样滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为940nm的发光二极管 做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD值慢慢增大，从放进测试架开始T9020秒， AD值增大了 100。（6）2号地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为940nm的发光二极管做光源时进 行了三次重复测试，其对应光敏二极管的AD值与时间的变化曲线（图6）。2号地贫血液滴入浓盐水中，波长m2 次重复测试1值随时间变化曲线第1次第1次第2次5O5O5O5O5QPU998OO7766

11、55XI- IX:直 I HDA1 3161911211511821124E7B01时间0.2秒）图6由图6曲线分析可知地贫血液滴入浓度3.5g/L盐水中，用波长为940nm的发光二极管 做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD值慢慢增大，从放进测试架开始T9020秒， AD值增大了 350。7总结未知血样和地贫血样滴入浓度3.5g/L盐水中，用526nm和940nm波长的发光二极管做 光源时其对应光敏二极管的AD值与时间的变化量如表1。表17波长血卜、AD 值化526nm940nm未知血样1102111号地贫血样521002号地贫血样65350通过本次实验可知用波长526nm的发光二极管做光源时测出未