细胞实验专题方案

1、生科3班1组自主实验方案外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备，染色体组型分析一、实验目的1、理解动物细胞培养、传代培养日勺措施以及培养过程中日勺无菌操作。掌握人体外 周血淋巴细胞培养与染色体标本制备。2、掌握细胞染色体勺制备措施，掌握人类染色体G一带勺显示措施及人类染色体G一带在染色体辨认中勺意义。3、熟悉人类染色体勺镜下检查和核型分析措施。初步掌握人类染色体G带勺特性及其辨认。二实验原理所谓外周血培养即是将外周血接种在合适勺培培养物中加入适量勺秋水仙素，使纺锤体 微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量勺分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是 0.075mol/L日勺KC1）解决，使其中勺红细胞及分

2、裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气 干法制片，可获得较好勺染色体。人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力， 但经PHA （植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂日勺转化细胞。染色体显带是将染色体标本通过一定程序解决，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴 显现明暗或深浅相间日勺横行带纹一一染色体带，这种技术，称为染色体显带技术。通过显带， 人们可以精确地辨认每一条染色体及染色体上日勺各个区段，并可发现染色体上较细微日勺构造 变化。在所有勺显带技术中，G显带（G banding）是最常用日勺显带技术，它是将染色体标本 用碱、胰蛋白酶或其他盐溶液解决后，再用Giemsa染

3、液染色，在一般显微镜下，可见深浅 相间日勺带纹，称G带（G band）。G显带措施简便，带纹清晰，染色体标本可以长期保存， 因此被广泛用于染色体病勺诊断和研究。正常人类染色体日勺数目为46条（23对），1960年日勺Denver会议和1963年日勺London会 议制定了统一日勺人类染色体命名体制：按照染色体日勺相对长度、臂比和着丝粒指数，将常染 色体（22对）按大小用阿拉伯数字标记，顺次排列为122号，性染色体用X和Y标记； 并按染色体大小和着丝粒位置，把人类染色体分为七个组，用大写字母AG表达。染色体经显带解决后，每条染色体都显示出其特定日勺带纹特性（见下表）。根据这些特性，可以精确地辨认

4、每条染色体，检出染色体数目或构造畸变。表1人染色体组型及其特性组别染色体序号形态，大小着丝点位置次缢痕随体鉴别限 度A13最大M;中部着丝粒（1，3）常用1号无可鉴别B45次大SM;亚中部着丝 粒无不易C612+X中档SM;亚中部着丝 粒常用9号无难鉴别D1315中档SI;近端着丝粒偶见13号有难鉴别E1618较小16m.17m、18m;中部着丝粒常用16号无可鉴别F1920小M;中部着丝粒无不易G2122+Y最小St;近端着丝粒有有y无难鉴别三、实验试剂与器材试剂：培养基：RPMI1640，具有双抗（青、链霉素）和小牛血清；小牛血清；植物血球凝集素 （PHA）；秋水仙素：50ug/ml；磷酸缓冲液：1/15mol/L,ph=6.8；低渗溶液：0.075mol/L氯化钾；Carnoy固定液：甲醇：冰乙酸（3： 1）；胰蛋白酶溶液；Giemsa （姬萨姆）染液； 75%勺酒精、器材:光学显微镜，离心机，恒温水浴箱，恒温箱，离心管，量简，烧杯，培养瓶，载玻片， 玻片架，注射器，碘酒和酒精棉球，酒精灯，