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文档简介
1、 HBV DNA检测在乙肝治疗中的应用罗氏诊断产品(上海)有限公司王亚雄2006年8月11日 上海为什么进行HBV DNA检测HBV DNA检测带给我们的益处目前HBV DNA的检测方法罗氏COBAS Amplicor系统的优点新一代技术COBAS TaqMan主要内容2021/9/292乙型肝炎:全球性的健康问题目前HBV携带者超过 350 million 2540% HBsAg 阳性人群会死于肝硬化或肝癌全球350 million HBV 携带者, 75% 在亚洲2021/9/293中表面抗原(S+preS2)核蛋白壳HBcAg (HBeAg)DNA聚合酶膜蛋白基因组 DNA小表面抗原HB
2、sAg (S)RNA 引物大表面抗原(S+preS2+preS1)乙肝病毒颗粒示意图2021/9/294慢性乙肝检测指标HBsAg 确定慢性乙肝HBeAg/ anti-HBe 区分感染的不同时期HBV 聚合酶 检测病毒的酶活性HBV DNA 检测病毒载量 (病毒转录活性)HBcAg 检测病毒蛋白 (病毒翻译活性) 2021/9/295HBV 病毒基因2021/9/296慢性乙型肝炎暴露后时间滴度ALTAnti-HBcSymptoms 5 601234 6 71 2 345 8 9 10HBsAgHBeAg月年HBV DNAAnti-HBe2021/9/297慢性乙肝的三种临床表现HBeAg 阳
3、性慢性乙肝 HBeAg, ALT升高, HBV-DNA 107 to 1011 拷贝每毫升 , 病理切片指征明显HBeAg 阴性慢性乙肝 Anti-HBe, ALT升高 , HBV-DNA 104 to 108拷贝每毫升 ,病理切片指征明显HBsAg 阴性携带期 Anti-HBe, ALT正常, HBV-DNA 2ULN, 要考虑治疗治疗期间, ALT、 e抗原和HBV-DNA至少每3个月检测一次 亚太乙肝防治共识2003Journal of Gastroenterology and Hepatology (2003) 18, 2392452021/9/2910抗病毒一般适应症主要指标:HBV
4、 DNA 105 拷贝/mL病毒学应答重要指标包括血清HBV,DNA 检测不到 (PCR 法)或低于检测下限,或较基线下降2log10中华医学会肝病学分会/中华医学会感染病分会慢性乙肝防治指南/GB/14740/21474/56295/index.html2021/9/2911为什么进行HBV DNA检测HBV DNA检测带给我们的益处目前HBV DNA的检测方法罗氏COBAS Amplicor系统的优势新一代技术COBAS TaqMan主要内容2021/9/2912HBV DNA检测带给我们的益处 监测抗病毒治疗效果早期确定病毒学应答预测治疗后反应 (HBsAg 消失)预测耐药突变预测肝移植
5、后复发检测HBsAg 携带者的病毒的活动情况2021/9/2913指标正常/ HBeAg 阳性 (n.31) anti-HBe 阳性 (n. 15)转阴ALT 12 7HBeAg 12 NDdot-blot hybridization. 12 7IgM anti-HBc ND 5Amplicor HBV Monitor 5 2HBsAg 3 2经治疗生化指标正常病人中病毒清除率2021/9/2914治疗中/后,应答者与不应答者HBV DNA水平的比较baseline1-3wks4-7wks8-11wks12-15wks16-24wks0-5mths6-11mths12-18mths1x1021
6、x1041x1061x1081x1010HBV DNA levelscopies/mlmeanSEMp=0.07p=0.2p0.01p0.001p0.001p0.001p0.001p0.001p0.001-不应答者-应答者-治疗中治疗后2021/9/2915监测抗病毒治疗,预测耐药Puchhammer-Stockl E. at al. J Infect Dis 181:2063, 20002021/9/2916HBV DNA 载量显示携带者处于活动或非活动状态HBV DNA copies/mlManesis K. et al.Gastroenterology 122 (7): 2092-3,
7、2002.1.E+021.E+031.E+041.E+051.E+061.E+071.E+081.E+09非活动状态活动状态2021/9/2917HBV DNA载量在肝移植中的应用 在肝移植中 (Liver Transplantation)为防治肝移植后的复发所采取的预防性治疗需要达到HBV DNA 95% 检出率线性范围 300- 200,000 copies/mL同等定量亚型 A-F 血清或血浆100 ul 样本6 小时检测时间, 30 分钟手工准备内部定量标准防污染系统2021/9/2936COBAS Amplicor VS bDNA2021/9/2937COBAS Amplicor v
8、s bDNA2021/9/2938COBAS Amplicor vs bDNACobas AmplicorbDNA标本准备乙醇沉淀磁珠吸附扩增靶序列光信号线性范围300200,0002000-100,000,000 特异性100%99.2%(96-98%)亚型AFAF污染控制有无定量方案内部标准品外部标准曲线Control数量3个12个报告时间8小时24小时2021/9/2939COBAS Amplicor HBV 灵敏度vs 其它测试?- 预测反跳?- 预测突变?- 预测肝移植复发风险?其他测试的灵敏度COBAS Amplicor HBV 灵敏度1101001,00010,000100,00
9、01,000,00010,000,000100,000,000048122024Weeks of therapyHBVDNA copies/mL2021/9/2940为什么进行HBV DNA检测HBV DNA检测带给我们的益处目前HBV DNA的检测方法罗氏COBAS Amplicor系统的优势新一代技术COBAS TaqMan主要内容2021/9/2941COBAS TaqMan 实时荧光检测系统2021/9/2942COBAS TaqMan特点及益处动态 PCR整合定量标准,不需外标准曲线检测管封闭,无需开盖四色荧光通道 (计划升级到六色)检测管: k-tube or k-plate宽广的
10、动力学范围连续检测检测时间从6小时减少到23小时增加通量提供内质控减少污染风险允许多重PCR靶标检测可用于其他检测模式 (杂交探针)处理过程简单可与AmpliPrep联用,实现自动化益 处特 点2021/9/2943COBAS TaqMan定量原理0510152025300102030405060相对荧光强度None1ThresholdCycle Threshold (Ct)for 108 C/PCRHBV DNALog C/PCR2876543循环数2021/9/2944COBAS TaqMan HBV检测线性范围2021/9/2945COBAS TaqMan HBV检测各亚型表现2021/9/2946COBAS TaqMan HBV Test vs CA HBMCOBAS TaqMan HBV TestCOBAS AMPLICOR HBV Monitor TestReporting UnitIU/mL(5.82 copies/IU)Copies/mLLinearity6 1.10E8300 2.00E5Sample Volume500 uL100 uLTargetPre
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