实验室常用溶液配制doc-丁香通-我的实验室采购专家

1、常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋

2、白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。 3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.

3、2，再加水定容到100ml。 0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。 1mol/LHEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。 1mol/LHCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。 25mg/mlIPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl26H2

4、O于足量的水中，定容到100ml。 100mmol/LPMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。 20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20。 10mg/mlRnase（无DNase）（DNasefreeRNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的T

5、risHCl调pH至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。 10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。 10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力

6、搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20。 100Denhardt试剂（Denhardtsregent） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分V） 水 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。 10标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘

7、端、平端连接） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP: 200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺（可选）:50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）:0.5ml10mg/mL贮液 ,水:2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20。 100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80可贮存至少6

8、个月。 10mmol/LdNTP混合液 成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量 10mmol/LdATP 10mmol/LdCTP 10mmol/LdGTP 10mmol/LdTTP 水2ul100mmol/LdATP贮液 2ul100mmol/LdCTP贮液 2ul100mmol/LdGTP贮液 2ul100mmol/LdTTP贮液 12ul 20PEG8000/2.5MNaCl 成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量 质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L氯化钠 水20g 50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积1

9、00ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20SSC 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 300mmol/L柠檬酸三钠（二水） 3mol/L氯化钠 水88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。 DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水 加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1。在37温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 甲酰胺（deionizedformamide） 直接购买或加Do

10、wexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。 磷酸缓冲液（phosphatebuffer） 按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。 1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值

11、877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 7206.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE（用于悬浮和贮存DNA） 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量 10mmol/LTrisHCl 1mmol/LEDTA 水1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 98.8ml Tris缓冲液（Tris-HCl

12、buffer） 将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。 浓盐酸的体积（ml）pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 769.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50Tris-乙酸（TAE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 2mol/LTris碱 1mol/L乙酸 100mmol/LEDTA 水242g 57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L） 200ml的0.5mol/LEDTA

13、（pH8.0） 补足1L 5Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量 445mmol/LTris碱 445mmol/L硼酸盐 10mmol/LEDTA 水54g 27.5g硼酸 20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0） 补足1L 染料 1溴酚蓝（bromophenolblue） 加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF（xylenecyanoleFF） 溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide） 小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水

14、，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。 凝胶上样液（gelloadingsolutions） 6碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.3N氢氧化钠 6mmol/LEDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青FF 水300ul10N氢氧化钠 120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 15聚蔗糖（400型） 水1.5ml1溴酚蓝 1.

15、5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水2.5ml1溴酚蓝 2.5ml1二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 50甘油 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（

16、室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5mmol/LEDTA 40聚蔗糖 水1.5ml1溴酚蓝 1.5ml1二甲苯青FF 100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF 200mmol/LEDTA 0.1SDS 50甘油 水20mg 20mg 4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0) 100ul10SDS 5ml 补足到10ml 三.常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨

17、10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1mol/L氯化钾2.5ml 用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖

18、（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g 酵母提取物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。 2YT培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨16g 酵母提取物10g 氯化钠4ml 如果需要用1NNaOH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板

19、需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物10g 葡萄糖20g 用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。 四.常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg

20、/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（

21、25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml

22、） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。几种溶液的配制方法1、PBS:取ZLI-90661 PBBS溶于于10000mll的蒸馏馏水中，混混匀，测测pH值应应在7.27.44之间，若若偏离此此范围，请请用0.1N的的HCLL或NaOOH调整整。2、TBSS：2.1 TTriss缓冲液液配方：（0.5 MM ppH7.6）Tris（三三羟甲基基氨基甲甲烷）60.577g1N HCCL约420mml双蒸水加至10000mllTris缓缓

23、冲液配配制方法法： 先先以少量量双蒸水水（30005000ml）溶溶解Trris，加加入HCCl后，用用HCll（1N）或或NaOOH（1N）将pHH调至7.6， 最后双双蒸水加加至10000mml。此此液为储储备液，4冰箱中保存。2.2 TTBS配配方：Tris-HCII缓冲液液（0.5M pHH7.66）100mllNaCI8.599g (0.115mool/LL)双蒸水加至10000mllTBS配制制方法： 先先以少量量双蒸水水溶解NNaCll，再加加入Trris-HCll缓冲液液，最后后加双蒸蒸水至110000ml，充充分摇匀匀。3、枸橼酸酸盐缓冲冲液（CCitrratee buuff

24、eer）：3.1 储储存液：A. 0.1M枸枸橼酸溶溶液：称称取211.011g枸橼橼酸（CC6H8O7H20）溶于于10000mll蒸馏水水中。B. 0.1M枸枸橼酸钠钠溶液：称取229.441g枸枸橼酸钠钠（C6H5Na3O72HH20）溶于于10000mll蒸馏水水中。3.2 工工作液：取9ml A液和和41mml BB液加入入4500ml蒸蒸馏水中中，溶液液pH值应应为6.00.14、胰酶（Trypsin）：4.1 ZZLI-90111胰蛋蛋白酶消消化液：常用浓度为为0.125%，即使使用前将将一滴试试剂1胰胰酶溶液液和三滴滴试剂22胰酶稀稀释液均均匀混合合（1:3稀释释），则则可直接

25、接滴加使使用。胰胰酶的最最终浓度度可以根根据使用用者的要要求进行行调整，浓浓度范围围可以从从0.005%（1:110稀释释）至00.255%（1:11稀释）。4.2 ZZLI-90110胰蛋蛋白酶：取0.055g或0.11g胰蛋蛋白酶加加入到1100mml 00.055%或0.11% ppH7.8的无无水氯化化钙水溶溶液中，溶溶解即可可。5、胃酶（Pepsin）：4%胃蛋白白酶，用用0.11moll/L HCLL配制。（我公司备备有ZLLI-990133胃蛋白白酶消化化工作液液，不需需稀释直直接滴加加使用，欢欢迎选购购）6、DABB：6.1 ZZLI-90332/990333 DAAB Kit

26、t：使用前只需需将试剂剂盒提供供的A、BB、C三三种试剂剂各一滴滴加至11ml双蒸蒸水中，即即可获得得1mll DAAB工作作液，简简单易用用。6.1 ZZLI-90330 DAAB：6mgDAAB溶于于10mmlTBBS（0.005M pHH7.66），再再加入00.1mml浓度度为3的H2O2，过滤滤掉沉淀淀物，即即可。7、AECC：4mg AAEC溶溶于1mml二甲甲基甲酰酰胺中，加加入144ml浓浓度为00.1MM的醋酸酸缓冲液液（pHH5.22），然然后加入入0.115mll 3%H2O2，过滤滤掉沉淀淀物。8、RIPPA：1PBSS，1%NP 40，00.5 soddiumm de

27、eoxyychoolatte，0.11% SSDS（此此液体可可长期保保存）。以以下抑制制剂以储储存液方方式保存存，临用用前加入入RIPPA中。8.1 110mgg/mll PMMSF异异丙醇溶溶液（用用量为110l/ml）8.2 AAprootinnin（Siggma产产品，用用量为330l/ml）8.3 110000mM soddiumm orrthoovannadaate冷冷冻液（用量为110l/ml）9、Bloottoo A：常规使用11PBSS，5% miilk，0.055% Tweeen 20。10、Bllottto BB：与Phossphootyrrosiine抗抗体共用用，1P

28、BSS，1% miilk，0.055% Tweeen 20。部部分实验验中miilk可可完全去去除，但但可能引引起背景景增高。实验室常用用贮存液液的配制制参数一、核酸及及蛋白质质常用数数据化合物 分子子量 mmax(pH77.0) 1摩尔尔溶液（ppH7.0）中中maax时的的最大吸吸收值 ODD2800/ODD2600 ATP 5507 2259 1154000 0.15CTP 4483 2271 990000 0.97GTP 5523 2253 1137000 0.66UTP 4484 2262 1100000 0.38dATP 4494 2259 1152000 0.15dCTP 446

29、7 2271 993000 0.98dGTP 5507 2253 1137000 0.66dTTP 4482 2267 996000 0.712常用核核酸的长长度与分分子量核酸核苷酸数分子量DNA485022（双链链环状）3.01107pBR32224363（双双链）2.8110628SrRRNA48001.6110623SrRRNA37001.2110618SrRRNA19006.1110519SrRRNA17005.511055SrRNNA1203.61104tRNA（大大肠杆菌菌）752.511043常用核核酸蛋白白换算数数据（1）重量量换算1g=110-66g 1ppg=110-112

30、g1ng=110-99g 1ffg=110-115g（2）分光光光度换换算：1A2600双链DDNA=50g/mml1A2600单链DDNA=30g/mml1A2600单链RRNA=40g/mml（3）DNNA摩尔尔换算：1g 1100bbp DDNA=1.552pmmol=3.003pmmol末末端1g ppBR3322 DNAA=0.36ppmoll1pmoll 10000bbp DDNA=0.666gg1pmoll pBBR3222=22.8g1kb双链链DNAA（钠盐盐）=66.61055道尔顿顿1kb单链链DNAA（钠盐盐）=33.31055道尔顿顿1kb单链链RNAA（钠盐盐）=3

31、3.41055道尔顿顿（4）蛋白白摩尔换换算：100pmmol分分子量1100，0000蛋蛋白质=10g100pmmol分分子量550，0000蛋蛋白质=5gg100pmmol分分子量110，0000蛋蛋白质=1gg氨基酸的平平均分子子量=1126.7道尔尔顿（5）蛋白白质/DDNA换换算：1kb DDNA=3333 个氨氨基酸编编码容量量=3.71104MMW蛋白白质10，0000MWW蛋白质质=2770bpp DNNA30，0000MWW蛋白质质=8110bpp DNNA50，0000MWW蛋白质质=1.35kkb100，0000MMW蛋白白质=22.7kkb DDNA4常用蛋蛋白质分分子

32、量标标准参照照物（1）高分分子量标标准参照照（2）中分分子量标标准参照照（3）低分分子量标标准参照照肌球蛋白分子量磷酸化酶BB97，4000碳酸酐酶31，000肌球蛋白212，0000牛血清白蛋蛋白66，2000大豆脻蛋白白酶21，5000-半乳糖糖甘酶BB116，0000谷氨酶脱氢氢酶55，0000抑制剂磷酸化酶BB97，4000卵白蛋白42，7000马心肌球蛋蛋白16，9000牛血清白蛋蛋白66，2000醛缩酶40，0000溶菌酶14，4000过氧化氢酶酶57，0000碳酸酐酶31，0000肌球蛋白（FF1）8，1000醛缩酶40，0000大豆脻蛋白白酶21，5000肌球蛋白（FF2）6，

33、2000抑制剂肌球蛋白（FF3）2，5000溶菌酶14，40005常用DDNA分分子量标标准参照照物DNA/HinndDNA/EcooR/Hinnd+EcooRpBR3222/HHae23130021226621227758712394167421514840510465575804497350489436156434268458802322484335304346420273530202726757564190423451125158421321137519218974184118311247564125续上表pBR3222/HHinff1744/Hiinf1744/Haae 1744/Ta

34、ap16317261401353291451771311810781175506553100872404396500826033273444176631023129841348281141221311422718722024940234541542002419433751511182072二、常用缓缓冲液1分子克克隆常用用缓冲液液2磷酸缓缓冲液（1）255下00.1mmol/L磷酸酸钾缓冲冲液的配配制pH1mol/L KK2HPOO4(mll)1mol/L KKH2PO4(mll)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.8

35、49.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2（2）255下00.1mmol/L磷酸酸钠缓冲冲液的配配制pH1mol/L NNa2HPOO4(ml)1mol/L NNaH22PO4(mll)5.87.992.16.012.088.06.217.882.26.425.574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8:用蒸馏馏水将混混合的两两种1mmol/L贮存存液稀

36、释释至10000mml，根根据Heendeersoon-HHassselbbalcch方程程计算其其pH值值：pH=pKK+11g(质子受受体/质子子供体)在此，pKK=66.866(255)。3电泳缓缓冲液测序凝胶加加样缓冲冲液98%去离离子甲酰酰胺10moll/L EDTTA(ppH8.0)0.0255%二甲甲苯青FFF0.0255%溴酚酚蓝甲酰胺：许许多批号号的试剂剂级甲酰酰胺，其其纯度符符合使用用要求，无无须再进进行处理理。不过过，一旦旦略呈黄黄色，则则应用在在磁力搅搅拌器上上将甲酰酰胺与DDoweex XXG8混混合床树树脂共同同搅拌11小时进进行去离离子处理理，并用用Whaatma

37、an 11号滤纸纸过滤22次，去去离子甲甲酰胺分分装成小小份，充充氮存于于-700。常用的电泳泳缓冲液液缓冲液使用液浓贮存液（每每升）Tris-乙酸（TTAE）1：0.04mmol/L TTriss-乙酸酸50：2242gg Trris碱碱0.0011moll/L EDTTA57.1mml冰乙乙酸100mll 0.5mool/LL EDDTA(pH88.0)Tris-磷酸（TTPE）1:0.09mmol/L TTriss-磷酸酸10:110g Triis碱0.0022moll/L EDTTA15.5mml855%磷酸酸（1.6799g/mml）40ml 0.55moll/L EDTTA(ppH

38、8.0)Tris-硼酸（TTBE）a0.500.0445mool/LL Trris-硼酸5：544g TTriss碱0.0011moll/L EDTTA27.5硼硼酸20ml 0.55moll/L EDTTA(ppH8.0)碱性缓冲液液b1:500mmool/LL NaaOH1:5mml 110mool/LL NaaOH1mmoll/L EDTTA2ml 00.5mmmoll/L EDTTA(ppH8.0)Tris-甘氨酸酸c1:255mmool/LL Trris5:155.1gg Trris250mmmol/L 甘甘氨酸94g 苷苷氨酸（电电泳级）（ppH8.3）0.1% SDSS50ml

39、10% SDDS(电电泳级)说明：TBE溶溶液长时时间存放放后会形形成沉淀淀物，为为避免这这一问题题，可在在室温下下用玻璃璃瓶保存存5溶溶液，出出现沉淀淀后则予予以废弃弃。以片都以11TBBE作为为使用液液（即11：5稀稀释浓贮贮液）进进行琼脂脂糖凝胶胶电泳。但但0.55的使使用液已已具备足足够的缓缓冲容量量。目前前几乎所所有的琼琼脂糖胶胶电泳都都以1：10稀稀释的贮贮存液作作为使用用液。进行聚丙烯烯酰胺凝凝胶垂直直槽的缓缓冲液槽槽较小， 故通过过缓冲液液的电流流量通常常较大，需需要使用用1TTBE以以提供足足够的缓缓冲容量量。碱性电泳泳缓冲液液应现用用现配。Triss-甘氨氨酸缓冲冲液用SS

40、DS聚聚丙烯酰酰胺凝胶胶电泳。2SDSS凝胶加加样缓冲冲液：100mmmol/L TTrissHCCl(66.8)200mmmol/L二硫硫苏糖醇醇（DTTT）4%SDSS（电泳泳级）0.2%溴溴酚蓝20%甘油油不含DTTT的2SDSS凝胶加加样缓冲冲液可保保存于室室温，应应在临用用前取11moll/L贮贮存液现现加于上上述缓冲冲液中。4凝胶加加样缓冲冲液缓冲液类型型6缓冲液液贮存温度0.25%溴酚蓝蓝40.25%二甲苯苯青FFF40%（WW/V）蔗蔗糖水溶溶液0.25溴溴酚蓝室温0.25%二甲苯苯青FFF15%聚蔗蔗糖(FFicooll4400)0.25%溴酚蓝蓝40.25%二甲苯苯青FFF

41、30%甘油油水溶液液0.25%溴酚蓝蓝440%(WW/V)蔗糖水水溶液碱性加样缓缓冲液:300mmmol/L NNaOHH6mmoll/L EDTTA18%聚蔗蔗糖(FFicooll4400)40.15%溴甲酚酚绿0.25%二甲苯苯青FFF使用以上凝凝胶加样样缓冲液液的目的的有三：增大样样品密度度；以确确保DNNA均匀匀进入样样品孔内内；使样样品呈现现颜色，从从而使加加样操作作更为便便利，含含有在电电块中能能以可预预知速率率向阳极极泳动的的染料。溴溴酚蓝在在琼脂糖糖中移动动的速率率约为二二甲苯青青FF的的2.22倍，而而与琼脂脂糖浓度度无关。以以0.55TBBF作电电泳液时时，溴酚酚蓝在琼琼脂

42、糖中中的泳动动速率约约与长3300bbp的双双链线状状DNAA相同，而而二甲苯苯青FFF的泳动动则与长长4kbb的双链链线状DDNA相相同。在在琼脂糖糖浓度为为0.55%11.4%的范围围内，这这些对应应关系受受凝胶浓浓度变化化的影响响并不显显著。选用哪一种种加样染染料纯属属个人喜喜恶。但但是，对对于碱性性凝胶应应当使用用溴甲酚酚绿作为为示踪染染料，因因为在碱碱性pHH条件下下其显色色较溴酚酚更蓝为为鲜明。5各种ppH值的的Triis缓冲冲液的配配制各种pH值值的Trris缓缓冲液的的配制 所需pH值值（255）0.1mool/LL HCCl的体体积7145772447734347442075

43、40376385773667834579320802928.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88.58.97.0某一特定ppH值的的0.005mool/LL Trris缓缓冲液的的配制：将500ml 0.11moll/L Triis碱溶溶液与上上表所示示相应体体积（单单位：mml）的的0.11ml/L HHCl混混合，加加水将体体积调至至1000ml（2）温度度对500mmool/LL TrrisHCll液pHH值的影影响425378175728276738377748478758579768680778781788882798

44、98380908481918582928683938784948885（6）常用用缓冲液液的pKKa值缓冲液分子量pKa值缓冲范围Trisaa12.18.087.177.9HEPESSb283.337.477.288.2MPOScc209.337.156.677.8PIPESSd304.336.766.277.3MESe195.226.095.466.8a：三羟甲甲基氨基基甲烷；b：NN-2-羟乙基基哌嗪-N-2-乙乙磷酸；c：33-（NN-吗啉啉代）丙丙磺酸；d：NN，N-双（22-乙磺磺酸）哌哌嗪；ee：2-（N-吗啉代代）乙磺磺酸。7温度对对常用缓缓冲液ppH的影影响缓冲体系pKa(22

45、0)pKa/10Mes6.15-0.1110Ada6.60-0.1110PiPess6.80-0.0885Aces6.90-0.2000Bes7.15-0.1660Mops7.20-0.0113Tes7.50-0.2000Hepess7.55-0.0114Triciine8.15-0.2110Tris8.30-0.3110Bicinne8.35-0.1880Glycyylgllyciine8.40-0.2880三、常用酶酶的配制制1溶菌酶酶用水配制成成50mmg/mml的溶溶菌酶溶溶液，分分装成小小份并保保存于-20。每一一小份一一经使用用后便予予丢弃。2蛋白水水解酶类类贮存液贮存温度反应浓度

46、反应缓冲液液温度预处理0.01mmol/L TTriss(pHH7.88)链霉蛋白酶酶a20mg/ml-20（溶溶于水）1mg/mml0.01mmol/L EEDTAA37自消化b0.5% SDSS0.01mmol/L TTriss(pHH7.88)蛋白酶Kcc20mg/ml-20（溶溶于水）50g/ml0.0055moll/L EDTTA37566无须预处理理0.5% SDSSa：链霉蛋蛋白酶是是从链球球菌（SStreeptoomycces griiseuus）中中分离到到的一种种丝氨酸酸酶和酸酸性蛋白白酶的混混合物。b：自消化化可消除除DNAA酶和RRNA酶酶的污染染，经自自消化的的链酶蛋

47、蛋白酶的的配制方方法如下下：把该该酶的粉粉末溶解解于100mmool./L TTrissHCCl(ppH7.5)、110mmmol/L NNaCll中，配配成200mg/ml浓浓度，于于37温育11h。经经消化的的链霉蛋蛋白酶分分装成小小份放在在密封试试管中，保保存-220。c：蛋白酶酶K是一一种枯草草蛋白酶酶类的高高活性蛋蛋白酶，从从林伯氏氏白色念念球菌（TTrittiraachiium albbum Limmberr）中纯纯化得到到。该酶酶有两个个Ca22+结合合位点，它它们离酶酶的活性性中心有有一定距距离，与与催化机机理并无无直接关关系。然然而，如如果从该该酶中除除去Caa2+，由由于出

48、现现远程的的结构变变化，催催化活性性将丧失失80%左右，但但其剩余余活性通通常已足足以降解解在一般般情况下下污染酸酸制品的的蛋白质质。所以以，蛋白白酶K消消化过程程中通常常加入EEDTAA（以抑抑制依赖赖于Mgg2+的的核酸酶酶的作用用）。但但是，如如果要消消化对蛋蛋白酶KK具有较较强耐性性的蛋白白，如角角蛋白一一类，则则可能需需要使用用含有11mmool/LL Caa2+而而不含EEDTAA的缓冲冲液。在在消化完完毕后、纯纯化核酸酸前要加加入EGGT（ppH8.0）至至终浓度度为2mmmoll/L,以鳌合合Ca22+。3无DNNA酶的的RNAA酶将胰RNAA酶（RRNA酶酶A）溶溶于100m

49、mool/LL TrrisHCll(pHH7.55)、115mmmol/L NNaCll中，配配成100mg/ml的的浓度，于于1000加热热15mmin，缓缓慢冷却却至室温温，分装装成小份份保存于于-200。四、常用抗抗生素溶溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒粒松弛型质粒粒氨苄青霉素素50mg/ml(溶于水水)-2020g/ml60g/ml羧苄青霉素素50mg/ml(溶于水水)-2020g/ml60g/ml氯霉素34mg/ml(溶于乙乙醇)-2025g/ml170gg/mll卡那霉素10mg/ml(溶于水水)-2010g/ml50g/ml链霉素10mg/ml(溶于水水)-201

50、0g/ml50g/ml四环素b5mg/mml(溶溶于乙醇醇)-2010g/ml50g/mla：以水为为溶剂的的抗生素素贮存液液通过00.222m滤滤器过滤滤除菌。以以乙醇为为溶剂的的抗生素素溶液无无须除菌菌处理。所所有抗生生素溶液液均应放放于不透透光的容容器保存存。b：镁离子子是四环环素的拮拮抗剂，四四环素抗抗性菌的的筛选应应使用不不含镁盐盐的培养养基（如如LB培培养基）。五、常用贮贮存液的的配制130%丙烯酰酰胺溶液液【配制方法法】将29g丙丙烯酰胺胺和1gg N，NN-亚亚甲双丙丙烯酰胺胺溶于总总体积为为60mml的水水中。加加热至337溶溶解之，补补加水至至终体积积为1000mll。用N

51、Nalggenee滤器（00.455m孔孔径）过过滤除菌菌，查证证该溶液液的pHH值应不不大于77.0，置置棕色瓶瓶中保存存于室温温。【注意】丙烯酰胺具具有很强强的神经经毒性并并可以通通过皮肤肤吸收，其其作用具具累积性性。称量量丙烯酰酰胺和亚亚甲双丙丙烯酰胺胺时应戴戴手套和和面具。可可认为聚聚丙烯酰酰胺无毒毒，但也也应谨慎慎操作，因因为它还还可能会会含有少少量未聚聚合材料料。一些价格较较低的丙丙烯酰胺胺和双丙丙烯酰胺胺通常含含有一些些金属离离子，在在丙烯酰酰胺贮存存液中加加入大约约0.22体积的的单床混混合树脂脂（MBB-1 Malllinnckrrodtt），搅搅拌过夜夜，然后后用Whhat

52、mman 1号滤滤纸过滤滤以纯化化之。在贮存期间间，丙烯烯酰胺和和双丙烯烯酰胺会会缓慢转转化成丙丙烯酰和和双丙烯烯酸。240%丙烯酰酰胺【配制方法法】把380gg丙烯酰酰胺（DDNA测测序级）和和20gg N，NN-亚亚甲双丙丙烯酰胺胺溶于总总体积为为6000ml的的蒸馏水水中。继继续按上上述配制制30%丙烯酰酰胺溶液液的方法法处理，但但加热溶溶解后应应以蒸馏馏水补足足至终体体积为11L。【注意】见上述配制制30%丙烯酰酰胺的说说明，440%丙丙烯酰胺胺溶液用用于DNNA序列列测定。3放线菌菌素D溶溶液【配制方法法】把20mgg放线菌菌素D溶溶解于44ml 1000%乙醇醇中，11：100稀释

53、贮贮存液，用用1000%乙醇醇作空白白对照读读取ODD4400值。放放线菌素素D（分分子量为为12555）纯纯品在水水溶液中中的摩尔尔消化系系数为221，9900，故故而1mmg/mml的放放线菌素素D溶液液在4440nmm处的吸吸光值为为0.1182，放放线菌素素D的贮贮存液应应放在包包有箔片片的试管管中，保保存于-20。【注意】放线菌素DD是致畸畸剂和致致癌剂，配配制该溶溶液时必必须戴手手套并在在通风橱橱内操作作，而不不能在开开放在实实验桌面面上进行行，谨防防吸入药药粉或让让其接触触到眼睛睛或皮肤肤。药厂提供的的作治疗疗用途的的放线菌菌素D制制品常含含有糖或或盐等添添加剂。只只要通过过测量

54、贮贮存液在在4400nm波波长处的的光吸收收确定放放线菌素素D的浓浓度，这这类制品品便可用用于抑制制自身引引导作用用。40.11moll/L腺腺苷三磷磷酸（AATP）溶溶液【配制方法法】在0.8mml水中中溶解660mgg ATTP,用用0.11moll/L NaOOH调至至pH值值至7.0，用用蒸馏水水定容11ml，分分装成小小份保存存于-770510mmol/L乙酸酸酰溶液液【配制方法法】把770gg乙酸酰酰溶解于于8000ml水水中，加加水定容容至1LL后过滤滤除菌。610%过硫酸酸铵溶液液【配制方法法】把1g过硫硫酸铵溶溶解于终终量为110mll的水溶溶液中，该该溶液可可在4保存数数周

55、。7BCIIP溶液液【配制方法法】把0.5gg的5-溴-44-氯-3-吲吲哚磷酸酸二钠盐盐（BCCIP）溶溶解于110mll 1000%的的二甲基基甲酰胺胺中，保保存于4482BBES缓缓冲盐溶溶液【配制方法法】用总体积990mll的蒸馏馏水溶解解1.007g盐盐溶液BBESN，NN-双（22-羟乙乙基）-2-氨氨基乙磺磺酸、11.6gg NaaCl和和0.0027gg Naa2HPPO4，室室温下用用HCll调节 该溶液液的pHH值至66.966、然后后加入蒸蒸馏水定定容至1100mml，用用0.222mm滤器过过滤除菌菌，分装装成小份份，保存存于-220。91mool/LL CaaCl22

56、溶液【配制方法法】在200mml蒸馏馏水中溶溶解544g CCaCll266H2OO，用00.222m滤滤器过滤滤除菌，分分装成110mll小份贮贮存于-20。【注意】制备感受态态细胞时时，取出出一小份份解冻并并用蒸馏馏水稀释释至1000mll，用NNalggenee滤器（00.455m孔孔径）过过滤除菌菌，然后后骤冷至至0。102.5mool/LL CaaCl22溶液【配制方法法】在20mll蒸馏水水中溶解解13.5g CaCCl26H22O，用用0.222mm滤器过过滤除菌菌，分装装成1mml小份份贮存于于-200。111mmol/L二硫硫苏糖醇醇（DTTT）溶溶液【配制方法法】用20ml

57、l 0.01mmol/L乙酸酸钠溶液液（pHH5.22）溶解解3.009g DTTT，过滤滤除菌后后分装成成1mll小份贮贮存于-20。【注意】DTT或含含有DTTT的溶溶液不能能进行高高压处理理。12脱氧氧核苷三三磷酸（ddNTPP）溶液液【配制方法法】把每一种ddNTPP溶解于于水至浓浓度各为为1000mmool/LL左右，用用微量移移液器吸吸取0.05mmol/L TTriss碱分别别调节 每一ddNTPP溶液的的pH值值7.00（用ppH试纸纸检测），把把中和后后的每种种dNTTP溶液液各取一一份作适适当稀释释，在下下表中给给出的波波长下读读取光密密度计算算出每种种dNTTP的实实际浓

58、度度，然后后用水稀稀释成终终浓度为为50mmmoll/L的的dNTTP，分分装成小小份贮存存于-770。碱基波长（nmm）消化系数（）LL/（mmolcm）A2591.541044G2531.371044C2719.101033T2607.401033比色杯光径径为1ccm时,吸光度度=MM130.5mool/LL EDDTA(pH88.0)溶液【配制方法法】在800mml水中中加入1186.1g二二水乙二二胺四乙乙酸二钠钠（EDDTA-Na2H22O），在在磁力搅搅拌器上上剧烈搅搅拌，用用NaOOH调节节 溶液液的pHH值至88.0（约约需200g NNaOHH颗粒）然然后定容容至1LL，分

59、装装后高压压灭菌备备用。【注意】EDTA二二钠盐需需加入NNaOHH将溶液液的pHH值调至至接近88.0，才才能完全全溶解。14溴化化乙锭（110mgg/mll溶液）【配制方法法】在100mml水中中加入11g溴化化乙锭，磁磁力搅拌拌数小时时以确保保其完全全溶解，然然后用铝铝箔包裹裹容器或或转移至至棕色瓶瓶中，保保存于室室温。【注意】小心：溴化化乙锭是是强诱变变剂并有有中度毒毒性，使使用含有有这种染染料的溶溶液时务务必戴上上手套，称称量染料料时要戴戴面罩。152HEPPES缓缓冲盐溶溶液【配制方法法】用总量为990mll的蒸馏馏水溶解解1.66g NNaCll、0.0744g KKCl、00.

60、0227g Na22PO442HH2O、00.2gg葡聚糖糖和1ggHEPPES，用用0.55moll/L NaOOH调节节 pHH值至77.055，再用用蒸馏水水定容至至1000ml。用用0.222mm滤器过过滤除菌菌，分装装成5mml小份份，贮存存于-220。16IPPTG溶溶液【配制方法法】IPTG为为异丙基基硫代-DD-半乳乳糖苷（分分子量为为2388.3），在在8mll蒸馏水水中溶解解2g IPTTG后，用用蒸馏水水定容至至10mml，用用0.222mm滤器过过滤除菌菌，分装装成1mml小份份贮存于于-200。171mmol/L乙酸酸镁溶液液【配制方法法】在800mml水中中溶解22