(人教版)DNA的粗提取与鉴定教学课件1

1、专题5 DNA和蛋白质技术课题1 DNA的粗提取与鉴定专题5 DNA和蛋白质技术 实验设计（一）实验材料的选取1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料）2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料）2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大 实验设计（一

2、）实验材料的选取1、材料：鱼卵、猪肝、菜花（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞的破碎：2、植物细胞的破碎： 以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞的破碎：2、植加入洗涤剂和食盐的作用分别是？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺

3、鉴定不显示蓝色等加入洗涤剂和食盐的作用分别是？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解（三）去除滤液中的杂质方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。（三）去除滤液中的杂质方案一：在滤液中加入NaCl，使NaC方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉中木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。方案三：将滤液放在60-75的恒温水浴中保温10-15，注意严格控制温度范围。方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉-浓度可使DNA

4、溶解； -浓度可使DNA析出。基础知识一、DNA的溶解性0溶解度NaCl浓度0.14mol/L2mol/L 2mol/L0.14mol/L-浓度可使DNA溶解；基础知识一、D二、酒精是一种常用有机溶剂，但-却不能溶于酒精；三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对-没有影响四、大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而-在80以上才会变性DNADNADNA二、酒精是一种常用有机溶剂，但-却不能溶于酒精；D五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响五、洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA（四） DNA的析出与鉴定1、DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相

5、等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。（四） DNA的析出与鉴定1、DNA的析出：2、DNA的鉴定：取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。2、DNA的鉴定：六、DNA的鉴定DNA与-（沸水浴加热）会被染成-，因此，二苯

6、胺可以作为鉴定DNA的试剂。-二苯胺蓝色甲基绿（绿色）六、DNA的鉴定DNA与-（沸水浴加热）会被染成操作提示2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。操作提示2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧D方法步骤 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1蒸馏水 3.溶解细胞核内的DNA 2 m1L的NaCI溶液40mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的

7、黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl溶液 8.提取含有杂质较少的DNA 冷却的95的酒精50 mL A:(1)向试管中加入0.015 molL的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺试剂 方法步骤 加入物质 目的 1.制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂 溶解DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出 使含DNA的黏稠物

8、被留在纱布上 使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含DNA的滤液中的杂质 提取DNA A出现蓝色 B无变化 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂 2、实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?1、在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。A.稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA答：B答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出2、实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 3、DNA遇二苯胺(沸水浴)

9、会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色4、提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液?答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。答：D3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) 4、提取鸡血1.怀古思今，激发科技报国热情，科技创新助推中华民族伟大复兴的梦想早日实现2、欧共体形成、日本成为经济大国、不结盟运动兴起和中国的振兴，这些共同构成了世界的多极化趋势。3、多极化趋势还只是一种趋势和方向，不是一种成熟的国际关系格局。4、两极格局虽然受到多极化的冲击，在当时仍是国际关系格局的总体的、基本的特征，因而多极化趋势是两极格局下的多极化趋势。5、苏联解体后，两极格局虽然瓦解，但多极化的世界格局并没有最终形成，直到今天，仍处于向.6.这首题画诗写景兼抒情，并未刻