HPLC法测定川黄芩中黄芩苷的含量

1、HPLC 法测定川黄芩中黄芩苷的含量摘要】目的 探讨高效液相色谱法测定川黄芩中的黄芩苷含量的方法学特点。方 法 取川黄芩样品粉末（共 5 批），比较 70% 乙醇、稀乙醇、甲醇、 50% 甲醇对其 黄芩苷的提取效率。取黄芩苷对照品溶液10ul,连续5次注入液相色谱仪，研究 黄芩苷进样量与峰面积的线性关系，并进行精密度试验、重复性试验、加样回收 实验、耐用性实验，最后进行样品测定。结果测定波长选定为277nm,选用甲醇 -水-磷酸（47：53：0.2）作为测定流动相， 70%乙醇为本品的提取溶剂，以回流 提取3小时为提取方法。黄芩苷在进样量为30.311212.4曲之间时，与峰面积 线性关系良好

2、。结果表明，该法精密度、重现性、准确度及耐用性均较好。结论 高效液相色谱法定量测定川黄芩中的黄芩苷，方法简单、准确度高。【关键词】川黄芩 黄芩苷 含量测定【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752 （2012）01- 0109-02川黄芩系常用药材，为唇形科黄芩属植物滇黄芩 Scutellaria amoenaC.H.Wright，连翘叶黄芩 Scutellaria hypericifolia Levl.或韧黄芩展毛变种 Scutellaria tenax W. W.Smith var.patentipilosa（Hand.-Mazz.）C. Y.Wu 的干燥根。

3、主产于四川西 南部、西部、西北部，云南及贵州等省1。川黄芩主要含黄芩苷和黄芩素、汉黄芩素、滇黄芩素和汉黄芩苷等 3、 4。 黄芩苷为川黄芩中含量较高的成分。已有文献报道黄芩苷可采用高效液相法进行 含量测定2。本研究在充分参考上述文献的基础上，采用高效液相谱法测定川黄 芩中黄芩苷的含量。研究内容如下：一、仪器与试药仪器：w a t e r s515泵、2478检测器。试剂：甲醇为色谱纯，水为超纯水， 其余试剂均为分析纯。对照品：黄芩苷为中国生物制品检定所提供（批号110715-200815。使用前用五 氧化二磷减压干燥 12 小时以上）。样品： 川黄芩（共5批）所用样品粉末均过三号筛。色谱柱：1

4、、Phe nome nex C18 250 x4.5mm 5ym ； 2、Han bo nLichrospher C18250 x4.5mm 5ym； 3、Waters Symmetry C18250 x4.5mm 5ym ； 4、Waters Symmetry C18 150 x4.5mm 5ym。二、色谱条件的选择1、测定波长的选择：以甲醇作溶剂制备的黄芩苷对照品溶液，在200n m 400n m波长下扫描其光谱图，结果在277n m处有最大吸收，与参考文献一致， 故测定波长选定为 277nm。2、流动相的选择：以甲醇-水-磷酸（47： 53： 0.2）为流动相对本品供试品溶 液进行系统适

5、应性考察，结果在该流动相下，黄芩苷峰形，理论板数，分离度符 合要求。因此选用甲醇-水-磷酸（47： 53： 0.2）作为测定流动相。三、样品的前处理研究1、提取溶剂的考察取本品粉末约0.15g，共4分，精密称定，分别精密加入70%乙醇、稀乙醇、 甲醇、50%甲醇50m l，称定重量，回流提取60分钟，放冷，在称定重量，用各 自溶剂补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45ym ）滤过，取续滤液，即得。进样量10卩I,按上述选定的色谱条件进行实验，结果见表2。表 2 提取溶剂的考察结果表明：采用 70%乙醇做溶剂时黄芩苷提取效率最高，因此选定 70%乙醇 为本品的提取溶剂。2、提取方法及时间考察

6、:取本品粉末约0.15g，共6份，精密称定，精密加入70%乙醇50m I，密塞， 称定重量，分别超声处理 20 分钟、30 分钟、60 分钟，分别回流提取 30 分钟、 60 分钟、3 小时，放冷，再称定重量，用补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜 （0.45ym ）滤过，取续滤液，即得。进样量10山，按上述选定的色谱条件进行实 验，结果见表 3。表 3 提取方法及时间考察结果表明：采用回流提取的方法较超声处理提取率高，而回流提取 3 小时黄 芩苷提取效率最高，因此选定回流提取 3 小时为本品的提取的方法。根据上述研 究结果，初步拟定本品供试品溶液的制备方法如下：取本品粉末约0.15g精密称定，精

7、密加入70%乙醇50m I，称定重量。 回流提取 3 小时，放冷，用 70%乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜 （0.45ym ）滤过，取续滤液，即得。四、方法学验证1、线性范围的考察精密称取黄芩苷对照品（中国生物制品检定所供 批号：110715-200815，含量 为95.2%。五氧化磷减压干燥12小时）15.92m g，置50m I量瓶中，加甲醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（0.303m g/m I）；精密取上述贮备液2m I,置 10m I量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（60.62卩g/m I）。分别精密吸取对照品溶液0.5卩I、5卩I、10山、15山、2

8、0山，注入色谱仪，记 录色谱图，测定其峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，黄芩苷量（曲）为横坐标, 进行回归，得回归方程。结果见表 4。表 4 黄芩苷线性关系考察结果由标准曲线得回归方程：Y=-77643.393X+3529.923。R=0.9996结果表明：黄芩 苷在进样量为30.311212.4曲之间时，与峰面积线性关系良好。2、精密度试验：精密取黄芩苷对照品溶液10u I,连续5次注入液相色谱仪，记录峰面积。结 果见表 5。表 5 进样精密度试验结果上述结果表明，本方法进样精密良好。3、重复性试验精密称取本品（1号样品）0.15g，共6份，照初步拟定的方法进行实验，记 录色谱图，并计算含量，

9、结果见表 6。表 6 样品重复性试验结果4、加样回收实验精密取黄芩苷对照品贮备液（0.303m g/m I） 5.0m I，共6份，分别置150m I 具塞锥形瓶中，水浴蒸干。取已知含量的样品（1 号样品，含量为 123.5m g/g） 粉末约0.01g，共6份，精密称定，置上述锥形瓶中，精密加入70%乙醇50m I, 照拟定的方法进行供试品溶液制备和测定，记录色谱图，并按下列公式计算回收 率，结果见表 7。表 7黄芩苷加样回收实验结果五、耐用性实验1、稳定性实验 取供试品和对照品溶液，按上述色谱条件测定，在不同时间注入液相色谱仪 考察其峰面积的变化情况，结果见表 8。表 8 稳定性考察结果以

10、上结果表明，对照品溶液和供试品溶液在24 小时内稳定。2 、不同色谱柱的考察精密称取本品粉末（样品1）约0.15g，照初步拟定的方法进行实验，采用不同 色谱柱（1、Han bon Lichrospher C18 250 x4.5mm 5ym （Ser No 07040909）； 2、 Phenomenex C18 250 x4.5mm 5ym ； 3、Hanbon Lichrospher C18 250 x4.5mm 5ym （Ser No 07040907）对本品进行测定并计算含量，结果见表9。表 9不同色谱柱考察结果六、样品的测定 取样品按标准正文的方法进行测定，结果见表 10。表 10样品中黄芩苷含量测定结果七、讨论 本文采用高效液相色谱法对川黄芩中所含黄芩苷进行含量测定，方法简单、准确度高。参考文献四川省卫生厅：四川省中药