紫杉醇与顺铂联合应用对人胃癌SGC7901细胞的作用

1、紫杉醇与顺铂结合应用对人胃癌SGC7901细胞的作用紫杉醇与顺铂结合应用对人胃癌sg7901细胞的作用【关键词】pa;ddp;体外研究;胃癌【摘要】目的研究紫杉醇(pa)结合顺铂(ddp)对人胃癌sg7901细胞株的影响。方法采用tt法检测两种药物单用和结合应用对细胞的作用，光镜和电镜观察细胞构造的变化,流式细胞仪检测sg7901细胞周期分布及端粒酶的活性。结果pa可抑制sg7901细胞的生长，且呈剂量及时间依赖性(p0.05);光学显微镜下可见经pa和ddp培养的胃癌细胞核周存在异常物质，电镜下在细胞内可见异常致密物;pa对人胚肺成纤维细胞(hpf)生长起促进作用，且呈剂量依赖性(p0.05

2、);pa与ddp结合应用对sg7901细胞生长的抑制具有协同作用(p0.05);同时抑制端粒酶活性。结论pa对胃癌sg7901细胞有抑制作用,一样剂量对正常细胞无抑制作用。pa与ddp对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用ddp相比,pa与ddp结合应用可减少ddp的用药剂量。【关键词】pa;ddp;体外研究;胃癌【keyrds】palitaxel;isplatin;invitr;gastrianer胃癌的发病率和恶性程度比拟高，胃癌容易发生转移,其中人胃癌sg7901细胞对多种化疗药物敏感。我国胃癌术后5年总生存率仍缺乏40%1。紫杉醇(pa)具有独特的抗癌机制和神奇的抗癌成效，被誉为近30年

3、来天然抗癌药物研究领域最重大的发现2，3。本研究以人胃癌sg7901细胞株为研究对象，观察了pa对胃癌细胞及正常人体细胞的作用，并进一步研究pa与常规化疗药物顺铂(ddp)结合应用对胃癌细胞作用的影响。1材料与方法1.1材料、试剂和仪器1.2细胞培养1.3单用pa对sg7901和hpf细胞的作用将浓度为5104个/lsg7901细胞接种于8块96孔板，每孔200l，每种细胞设3个复孔，37，5%的2培养箱内培养。每日取一块培养板，弃培养液，参加无血清培养液180l，每孔参加tt(5g/l)20l，继续培养4h，终止培养，弃培养液，参加二甲基亚砜150l，振荡5in，以空白孔调零，用全自动酶标仪

4、测定570n光吸收值。浓度为横坐标，细胞抑制率为纵坐标，绘制细胞生长曲线。选用2、4、6、8、16、20g/l6个浓度的pa分别对sg7901细胞和hpf细胞进展培养，pa用相应的培养液配制。对照组用含0.1%无水乙醇的培养液培养。培养24、48、72h后行tt检测，实验重复3次，结果取平均值。计算细胞增殖抑制率(%)=1-实验组平均d值/对照组平均d值100%和半数抑制浓度(i50)4。1.4ddp单用对sg7901细胞的作用1.5pa与ddp结合应用对sg7901的作用根据pa和ddp单独用药结果，得出两种药物的i50值。采用序贯用药方式，首先用i50以下浓度为1、2、4、6、8、16、2

5、0g/l的pa培养液分别培养sg7901细胞24h，弃去培养液。然后换用i50以下浓度为0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100g/l的ddp继续培养24h后终止作用，进展检测，计算i50值，对照组不含pa。pa选取1、2、4、6、8、16、20g/l7个浓度，计算48h的i50值。ddp选取0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100g/l7个浓度，计算48h的i50值，合并指数=结合用药到达半数抑制浓度时甲用药量/甲单用时到达半数抑制浓度的用量+结合用药到达半数抑制浓度时乙用药量/乙单用时到达半数抑制浓度的用量。合并指数0.95时表示两种药物有协同作用，

6、合并指数1.05时两种药物有拮抗作用，0.96合并指数1.04时两种药物有相加作用5。1.6细胞形态学观察1.6.1光镜观察设立pa组、ddp组、pa+ddp组，用pbs配制的0.15%的胰蛋白酶(含有0.02%的edta)消化细胞，制成5104个/l单细胞悬液接种于内铺小玻璃片的24孔培养板内，置于37，5%2培养箱内培养48h后用0.1l/lpbs洗涤2次，室温枯燥，中性树胶封片处理，光镜下观察、拍照。1.6.2透射电镜观察设立pa组、ddp组、pa+ddp组，sg7901细胞在100l培养瓶中贴壁后，参加处理药物，于48h终止反响，用pbs液洗涤，轻轻用细胞刮将细胞刮下，离心后4%戊二醛

7、固定2h以上，0.1l/lpbs(ph7.2)冲洗，继续用20g/g的四氧化锇固定，脱水、包埋、切片和染色按常规处理，透射电镜(e208s,芬兰)观察、拍照。1.7流式细胞仪(f)分析细胞周期分布1.8端粒酶1.9统计学处理采用sas统计软件包进展t检验。2结果2.1pa对sg7901细胞生长的影响设立pa共6个浓度对sg7901细胞的生长均具有抑制作用，且抑制率随药物浓度的升高和作用时间的延长而增加(p0.05)，作用24、48和72h后的i50值分别是1.8、5.1和5.9g/l。在低浓度、24h内对肿瘤细胞生长开场有抑制作用(见图1)。图1pa对sg7901细胞生长抑制曲线2.2pa对h

8、pf细胞生长的影响设立pa共6个浓度，均对hpf细胞生长起促进作用，且hpf细胞存活率随药物浓度的升高而增加(p0.05)，但与作用时间无明显关系(p0.05)(见图2)。图2pa对hpf细胞生长促进曲线2.3ddp对sg7901细胞生长的影响设立ddp共7个浓度，对sg7901细胞的生长均具有明显的抑制作用，抑制率随药物浓度的升高和作用时间的延长而增加(p0.05)(见图3)。作用24、48和72h后的i50值分别是0.21、0.35、0.44g/l。2.4pa和ddp结合用药对sg7901细胞生长的影响pa选取1、2、4、6、8、16、20g/l7个浓度，处理48h后的i50值为2.1g/

9、l(见图4)。ddp选取0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100g/l7个浓度，处理48h后的i50值为0.15g/l(见图5)。合并用药后与单独用药比拟，细胞抑制率明显增加，所使用的药物剂量在减少，2.1g/lpa+0.15g/lddp的细胞抑制率显著增加。pa单独使用途理48h后i50图3ddp对sg7901细胞生长抑制曲线图4pa和ddp结合应用对sg7901细胞生长抑制影响是5.1g/l,ddp单独使用途理48h后i50是0.35g/l;合并用药后,pa使用量处理48h后i50是2.1g/l,ddp使用量处理48h后i50是0.15g/l。合并指数是0.83,提示2

10、.1g/lpa+0.15g/lddp结合用药有协同作用。2.5光镜观察细胞形态学结果光镜下sg7901细胞呈单层排列,细胞大小不一,为多角形,sg7901细胞边界清楚,核大,圆形，结合用药组呈细胞死亡征象，细胞界限不清，细胞变圆，细胞核染色深，细胞质可见大量颗粒(见图5)。2.6电镜观察细胞形态学结果透射电镜下sg7901细胞开场为正常状态,细胞质丰富,核仁多个,边界明晰,外表微绒毛丰富，结合用药组呈细胞死亡征象，细胞界限不清，细胞变圆，细胞核染色深，细胞质可见大量颗粒(见图6)。2.7细胞周期检测结果对照组相比,单用pa和单用ddp对细胞增殖周期没有显著影响。pa和ddp合用对细胞增殖周期中

11、的g2/期有显著影响(p0.05),提示细胞阻滞在s期,使sg7901细胞的有丝分裂受到抑制,使肿瘤细胞数目减少,从而抑制细胞的生长(见表1)。2.8药物对端粒酶活性的影响设立pa组、ddp组、pa+ddp组，药物作用于sg7901细胞0、12、24、36、48、60、72h后，发现随时间的延长，那么各组端粒体酶活性在逐渐下降，但是结合用药与单独用药对端粒酶活性的影响不明显(见图7)。图5sg7901细胞形态学光镜下观察结果(200)图6sg7901细胞形态学电镜观察(10000)表1pa与ddp合用前后sg7901细胞周期图7pa、ddp、pa+ddp分别作用于sg7901细胞后端粒体酶活性

12、变化3讨论胃癌是我国常见的恶性肿瘤,其死亡率居各类恶性肿瘤之首，且多数患者为进展期胃癌。结合化疗为其治疗的重要手段，但疗效差。这主要与化疗方案有亲密关系。同时化疗对机体的毒副作用，比方骨髓抑制、免疫抑制、胃肠道反响等也是显而易见的。许多患者因为耐受不了而放弃治疗，更有一些身体状况不佳的患者因化疗而加速死亡。因此必须寻求新的药物配伍方案。pa已成为当前世界上最热门、最畅销、最紧缺、最昂贵以及临床上广泛使用的广谱抗癌药物。近年来，国内外文献均有报道pa对多种恶性肿瘤的发生、开展有抑制作用。ddp也不例外，也是目前经常使用的抗肿瘤药物。本研究将pa和ddp结合应用以期减少抗癌药物的用量6，7。综上所述，本研究证实pa对胃癌细胞株sg7901具有抑制作用，对人体正常细胞hpf无抑制作用。pa与化疗药物ddp在抑制肿瘤细胞方面具有协同作用，ddp的应用可减少pa的用量。这为胃癌的新综合治疗方案提供了理论根据，但是否能应用于临床尚有待于进一步研究。【参考文献】7davila，jhalad，ghshd,etal.expressinflikinase1isa