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文档简介

1、PCR检测外源基因的整合 RT-PCR检测外源基因的表达PCR检测外源基因的整合（1）PCR的基本原理 （2）检测外源基因的整合 （3）PCR检测的优缺点 PCR的基本原理聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）其基本原理是：DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、

2、dNTP就可以完成特定基因的体外复制 。检测外源基因的整合 在转基因个体的检测中，通过设计外源基因两端的特异引物，采用PCR技术就可以使外源基因片段得以大量的扩增，然后通过琼脂糖凝胶电泳检测特异性扩增带的有无，从而判断外源基因是否整合到受体植物的基因组中。PCR检测所用仪器PCR 仪RT-PCR检测外源基因的表达（1）RT-PCR的基本原理 （2）RT-PCR技术的相关试剂RT-PCR的基本原理RT-PCR又名逆转录聚合酶链反应（reverse transcription PCR ）原理是：提取组织或细胞中的RNA，或以转基因个体总RNA或mRNA作为模板链，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cRNA。一方面，以cRNA为模板链进行PCR扩增，而获得目的基因。另一方面，以能否获得特异性的cDNA扩增条带实现基因表达的检测。RT-PCR技术相关试剂 oligo: 多聚体，相当于mRNA引物 AMV（M-MLV）：逆转录酶 dNTP：脱氧核苷酸 RNase：RNA酶抑

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