地中海贫血基因检测的临床应用课件

1、地中海贫血基因检测的临床应用地中海贫血基因检测的临床应用地中海贫血基因检测的临床应用地中海贫血基因检测的临床应用地中海贫血基因检测的临床应用地中地中海型贫血简介地中海贫血（Thalassemia）又称海洋性贫血。为一组遗传性溶血性贫血。其共同特点是由于人体珠蛋白基因突变或者缺失而导致的某种珠蛋白链合成障碍，造成，-珠蛋白肽链合成速率的不平衡而导致的溶血性贫血。地中海贫血可主要分为两大类，分别有甲型（）和乙型（）。另外亦有轻型、中型及重型地中海贫血之划分。2地中海型贫血简介地中海贫血（Thalassemia）又称海洋 全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%） 中国南方高发地区人群

2、携带率最高可达到24%地中海贫血的地域分布-地贫分布-地贫分布3 全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）地中国南方地贫基因携带率 地区携带率(%) 地贫地贫 合计 广东 8.532.54 11.07 广西 14.956.78 21.73 四川 1.922.18 4.1 台湾 4.201.10 5.3 香港 5.023.41 8.43Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5. 在我国，地中海贫血主要在南方广东、广西、海南、四川、重庆等省市发病率较高，以广

3、西、广东最为严重。44中国南方地贫基因携带率 地区携带率(%) 地贫地贫1.血红蛋白由一个珠蛋白和四个血红素（又称亚铁原卟啉）组成，珠蛋白的一条肽链及一个血红素结合成为血红蛋白的一个亚单位，每个血红素又由四个吡咯类亚基组成一个环，环中心为一个亚铁离子。2.组成珠蛋白的四条肽链成年人可由2条链和2条链构成，称HbA。胎儿由2条链2条链构成，称HbF。出生后不久由HbA取代。3.血红蛋白四个亚单位之间及亚单位内部以盐键相互结合。每个血红素基团中间的亚铁则可以及氧结合使之成为氧合血红蛋白。及氧结合或解离将影响盐键的形成或断裂，使Hb的四级结构发生改变，其及氧的亲和力亦随之改变.血红蛋白构造51.血红

4、蛋白由一个珠蛋白和四个血红素（又称亚铁原卟啉）组成，血红素英文缩写血红蛋白所含比例胎儿血红素HbF2成人血红素HbA95成人血红素二HbA236血红素英文缩写血红蛋白所含比例胎儿血红素HbF2成根据珠蛋白肽链基因（简称基因或基因）缺失、缺陷或基因突变和珠蛋白肽链合成障碍的不同，可将地贫分为型、型、型和型四种，其中以型和型地贫较为常见。地中海贫血定义及分类7根据珠蛋白肽链基因（简称基因或基因）缺失、缺陷或基因突变人类血红蛋白的合成和演变胚胎期胎儿期成人gower 1- 22gower 2- 22Portland- 22HbF- 22HbA- 22HbA- 22HbA2- 22 HbF- 228人

5、类血红蛋白的合成和演变胚胎期胎儿期成人gower 1- 地贫血红蛋白的组成正常成人血红蛋白（Hb）有三种：HbA(22)(96.5-97.5% )、HbA2(22)(2.53.5%)、HbF(22)(0-1.0%)。9地贫血红蛋白的组成正常成人血红蛋白（Hb）有三种：HbA(染色体 第11号染色体 珠蛋白基因 第16号染色体 珠蛋白基因来源：T10染色体 第11号染色体 第16号地中海贫血及基因型a2a1a2a1a2a2a1a2a1a2a1a2a1a2a1a2a1血红蛋白正常轻型：2个基因缺失或突变中间型（HbH 疾病）：3个 基因缺失或突变Hb Barts：3个 基因缺失或突变静止型：1个

6、缺失或突变 11地中海贫血及基因型a2a1a2a1a2a2a1a2a1a2 重型地贫：又叫HbBarts水肿综合征，4个基因都缺失了(-SEA /-SEA) ，在孕后期或出生后即死亡。12 重型地贫：又叫12中间型地贫：缺失3个基因( -/-SEA)或缺2个基因另有一个基因突变( T/-SEA) ，又叫HbH病，电泳大多可见HbH区带。Hb大多在 T60-100g/L左右。13中间型地贫：缺失3个13轻型地贫：缺失2个基因( /-SEA)(-/ -)或2个基因突变( T / T ) T T T或缺1个基因另有一个基因突变(-/ -) ，又叫地贫1。轻度贫血或不贫血。 1414静止型地贫：缺失1

7、个基因(/-) 或1个基因突变(/T )又叫地贫2，不会贫血。 T15静止型地贫：缺失1个15地贫：以临床贫血程度分级重型地贫：Hb在60g/L以下。中间型地贫：Hb60-100g/L之间。轻型地贫：贫血但在100g/L以上。静止型地贫：不贫血。正常16地贫：以临床贫血程度分级重型地贫：Hb在60g/L以下。地中海贫血的临床特征临床特点静止型（地贫2）轻型或标准型（地贫1）中间型（HbH病/CS 型HbH病）重型HbBarts胎儿水肿综合征）发病年龄3个月儿童，成人儿童，成人胎儿贫血程度无无或轻度中度重度重度黄疸无无轻度中度无或轻度肝脾肿大无无或轻度轻度中度重度血片RBC：形态异常正常轻度中度

8、重度重度血红蛋白电泳正常正常HbH带或伴HbBartsHbConstantSpring大量HbBarts伴HbPortland少量HbHHbF正常正常正常或轻度减少无HbH包涵体无无或可有强阳性阳性/110.70.950.30.6基因诊断缺失1个或突变/-，T/缺失2个或突变/-或/T-缺失3个或突变-/-，T/-缺失4个-/-17地中海贫血的临床特征临床特点静止型轻型或标准型（地贫1）-地贫血红蛋白比较表型Hb AHb BartsHb H正常人97-98%00静止型携带者96-98%0-2%(At birth)0轻型地贫症状85-95%2-8%(At birth)2%Hb H 疾病下降G)1

9、3HBBCD43CD43 GT2HBAQS125Codon 125(T-C)14HBB-29-29AG3HBACS142Codon 142(T-C)15HBBInt起始密码子ATGAGG4HBA-SEASEA缺失16HBBCD14-15CD14-15(+G)5HBA-3.73.7缺失17HBBCD27-28CD27-28(+C)6HBA-4.24.2缺失18HBB-32-32CA7HBBCD41-42CD41-42 (-TCTT)19HBB-30-30TC8HBBIVS-2-654IVS-2-654 CT20HBBIVS-1-1IVS-1-1 GT9HBBCD17CD17 AT21HBBIVS

10、-1-5IVS-1-5 GC10HBB-28-28AG22HBBCD31CD31(-C)11HBBCD26CD26 GA23HBBCapCAP +40-+43(-AAAC)12HBBCD71-72CD71-72(+A)人DNA样本的地中海贫血基因型（包含3种突变、3种缺失及17种突变）中国常见的突变基因型的检测，可用于人地中海贫血的辅助诊断及适用于大样本量的携带者筛查和产前基因诊断。31序号基因缩写突变位点描述序号基因缩写突变位点描述1HBAWS 目前，国内地贫分子诊断方法主要有Gap-PCR、反向斑点杂交(RDB)、导流杂交、测序等。其中Gap-PCR只能检测出地贫中的缺失型，反向斑点杂交需

11、要两次检测才能完整的检出、-地贫；导流杂交技术不能做到基因位点的准确分型；而测序方法需要昂贵的仪器，复杂序列分析，人工经验要求高，不利于大规模筛查。国内现有地中海贫血基因检测技术及现状32 目前，国内地贫分子诊断方法主要有Gap-PCR-地中海贫血-地中海贫血亚能生物技术(深圳)有限公司-地中海贫血基因检测试剂盒(gap-PCR法) (国食药监械(准)字2012第3401088号 -地中海贫血基因检测试剂盒(反向点杂交法) (国食药监械(准)字2013第3400676号中山大学达安基因股份有限公司-地中海贫血基因检测试剂盒(gap-PCR法) (国食药监械(准)字2011第3401628号-地中海贫血基因分型检测试剂盒(PCR-反向点杂交法) (国食药监械(准)字2012第3401665号珠海经济特区海泰生物制药有限公司东南亚型-地中海贫血Zeta链蛋白检测试剂盒(酶联免疫法) (国食药监械(准)字2011第3400228号深圳益生堂生物企业有限公司地中海贫血基因检测试剂盒(PCR探针法) (国食药监械(准)字2012第3400354号厦门致善生物科技有限公司-地中海贫血基因检测试剂盒(荧光PCR熔解曲线法) (国食药监械(准)字2013第3401294号潮州凯普生物化学有限公司-和-地中海贫血基因检测试剂盒(PCR+