禽业培训资料

1、药物残留快检技术交流 -培训资料技术部 技术资料内容提要 ELISA简介鸡肉企业药残检测主要控制项目 开展ELISA快速检测所需仪器综述 试剂盒使用中的关键点 勤邦公司概况技术资料ELISA简介 ELISA是酶联免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。 自70年代初问世以来，此项技术发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 技术资料 相关概念技术资料半抗原: 只有免疫反应性,而无免疫原性的小分子物质。如药物,多糖,类脂等。抗原: 凡是能刺激机体产生免疫应答并能与

2、应答产物特异结合的物质。 载体蛋白: 赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子,即为载体。抗体:可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。 基本原理ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）， 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加 入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与样本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。技术资料 抗体技术资料单克隆抗体制备 反应特点 （1）可逆性 Ag+AbAgAb （2）敏感性 （3）特异性技术资料 ELISA反应中的三种必备试剂 ：（1）固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂”。（2）酶标记的抗原或抗体，称为“结合物”。（3）酶反

3、应的底物。技术资料 勤邦公司试剂盒产品基本原理间接竞争法偶联抗原/样本/标品酶抗抗体酶标记抗抗体抗体技术资料先加后加酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶A液B液酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶酶终止液洗板洗板显色混匀拍干拍干反应过程技术资料样本显色标准品显色情况标准1标准2标准3标准4标准5标准6样本1样本2样本1的颜色大概在标准2与标准3的颜色之间，即可得出其样本中的待测物含量在标准2与标准3之间，再乘以样本的稀释倍数即可得出该样本的最终含量范围。同理，样本2的检测含量在标准5与标准6的浓度之间，再乘上样本的稀释倍数以后即得到该样本的大概含量。技术资料（1）结果判定-目测标准曲线样本

4、显色情况标准1标准2标准3标准4标准5标准6得到OD值后再用专用软件进行数据分析。技术资料（2）结果判定-酶标仪读数鸡肉企业药残检测主要控制项目出口参照较为严格的日本肯定列表；国内主要参照农业部235号公告；实际监控中主要检测项目包括：氯霉素、呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃妥因代谢物、呋喃西林代谢物、氟喹诺酮类、磺胺类、四环素类、喹乙醇代谢物、粘杆菌素、三聚氰胺等；技术资料 国内某大型肉鸡企业检测项目及分级标准技术资料 兽药残留常规检测七项氯霉素氟喹诺酮磺胺喹噁林呋喃唑酮代谢物呋喃它酮代谢物呋喃妥因代谢物呋喃西林代谢物技术资料ELISA检测所需仪器技术资料1.酶标仪2.氮吹仪3.离心机4

5、.移液器5.其他 酶标仪技术资料技术资料联机技术资料MK3光学系统1、石英卤素灯2、斩光轮3、孔径透镜与聚光透镜4、半透明反射镜5、孔径6、干涉滤光片7、光纤束8、聚焦透镜9、上透镜与检测器技术资料MK3光学系统技术资料 氮吹仪氮吹仪作用减压阀使用注意事项技术资料氮吹仪作用氮吹仪主要用于色谱、质谱、酶联免疫检测等分析样品的纯化和制备，广泛应用于乙酸乙酯、乙腈等溶剂的挥发。通过加强周围的空气流动和温度加快液体蒸发。氮吹仪利用氮气的快速流动打破液体上空的气液平衡，从而使液体挥发速度加快；并通过干式加热或水浴加热方式升高温度（目标物的沸点一般比溶剂的要高一些），从而达到了浓缩的目的。氮气是一种不活泼

6、的气体，能起到隔绝氧气的作用，防止氧化。技术资料减压阀使用技术资料注意事项针头悬于液面上方，不可接触液面；气流调试平稳后，再放入样本吹干；定期清洗针头，每次吹干前用甲醇润洗；加热系统温度设在规定范围内；减压阀不但起到减压作用,而且起到稳压作用。 使用减压阀时,严禁乱拧乱动,自行拆卸,否则减压阀的严密性能和降压性能都会受到破坏。技术资料 离心机DT5-2B最高转速Max Speed 5000r/min 最大相对离心力 Max RCF 4360g 定时范围 Time Range 0999min 电源 Power Supply AC220V 50Hz 8A 外形尺寸 Dimension 510410

7、310mm 重量 Wight 30kg 技术资料关于离心离心机是就是利用离心力的原理分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各种组成成份的一种机械。工业用离心机按结构和分离要求，可分为过滤离心机、沉降离心机和分离机三类。一般ELISA前处理操作中用到的是离心沉降与离心分离两种。当粒子在无限连续流体中沉降或分离时，受到两种力的作用，一种是连续流体对它的浮力，另一种是流体对运动粒子的粘滞力。如果这两种力达到平衡，粒子将保持匀速运动，分离将会受限制。技术资料离心力的计算离心的效果主要是由离心分离因数Fr（又称离心力强度或离心力）来定量评价： Fr = 2r/g =11.19* (rpm/1000)2

8、 * r *g Fr表示粒子在离心机中产生的离心加速度与自由下降的加速度之比；Fr越大，越有利于分离。一般实验操作要求的3000g即为离心力。对于不同的离心机通过调整转速可以达到相同离心力。技术资料 移液器技术资料移液器的使用规范 吸头安装：正确的安装方法叫旋转安装法，具体的做法是，把白套筒顶端插入吸头（无论是散装吸头还是盒装吸头都一样），在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转180度。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装，因为那样做会对您手中的移液器造成不必要的损伤。 容量设定：在容量设定时，当从大值调整到小值时，刚好就行；但从小值调整到大值时，就需要调超三分之一

9、圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。 预洗吸头：在安装了新的吸头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放2-3次，这样做是为了让吸头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有极高的重现性。技术资料 吸液：先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸头垂直浸入液面，浸入的深度为：P2、P10小于或等于1毫米，P20、P100、P200小于或等于2毫米，P1000小于或等于3毫米，P5ML、P10ML小于或等于4毫米（浸入过深的话，液压会对吸液的精确度产生一定的影响，当然，具体的浸入深度还应根据盛放液体的容器大小灵活掌握），平稳松开按钮，切记不能过快。

10、 放液：吸一打二、吸二打一 卸去吸头：卸掉的吸头一定不能和新吸头混放，以免产生交叉污染。技术资料移液器的使用规范 其他技术资料试剂盒使用中的关键点 试剂盒使用及检测流程一般企业中均建立规范的快速检测实验室，主要利用试剂盒方法进行样本筛选，一般检测流程如下：技术资料采样样本预处理切割匀浆编号留样样本前处理试剂盒分析结果分析及报告称量提取浓缩净化复溶加样洗板显色终止读数 样本预处理及均质组织样本肉、肝等样本类型：选择肌肉部分，去掉油脂和筋膜，切细，用绞肉机反复绞碎，混合均匀。熟食：油脂或辅料较多的样本需要去除杂质后检测或者只取熟食样本中的肉品部分进行检测。技术资料 振荡提取 将提取溶剂加入到装有样

11、品的具塞容器中，振荡，使容器内的样品与提取溶剂充分接触，以深入到样本组织内部提取待测组分。振荡方式： 振荡器进行上下、往返式振荡；涡旋；手摇式上下振荡技术资料浓缩 由于净化过程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去除全部有机溶剂进行溶剂转换。浓缩方式： 氮气吹干除杂； 压缩空气吹干；注意事项： 1、在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，防止杂质干扰。 2、在吹样本是，针头应在液面上空，避免与样本接触，防止产生交叉污染。 3、样本吹干后应立即取下，避免吹的时间过长，影响最终检测结果。 4、不同的药物，吹干后样本保存情况不同，需要尽快进行下一步操作，复溶后样本不宜保存技术资料

12、净化 经过提取的待测组分，提取物中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质，将待测组分与杂质分离的过程，我们把它称为试剂盒中样本的净化。最常见的净化：液液分配法。 例如：用复溶液溶解干燥残留物之前先加入适量的正己烷，在加入正己烷和复溶液涡动后如果出现乳化现象，可以60水浴加热，至乳化现象消失或减弱后，加大离心转速进行离心。技术资料 酶标分析过程中加样 要求加样的准确性和洗板的一致性。在整个加样的过程中注意实验室温度的恒定，保证反应在试剂盒所示的温度下进行。 常见加样方式：吸一打二；吸二打一； 在实际操作过程中，提倡用“吸二打一”，优势如下：a、加样过程中在板

13、孔内不出现或者很少出现气泡 b、提高加样速度，缩短前后样本反应的时间差。 在加样的过程中还应细心注意避免出现下列现象： A、加样的过程中漏加或者重加；B、加样的过程中忘记更换吸头； C、样本的重加或者漏加 D、忘记记录样本的加样顺序技术资料 常见的洗板方式 A、洗板机洗板；B、多道孔加样器洗板；C、多孔吸头洗板 在洗板的过程中，确保每孔所加洗涤液量的均一，按说明书操作，不可过多，避免溢出板孔，污染其它样本，过少，则达不到洗涤的效果。甩板 快速甩尽板孔内的液体。防止板孔里的液体对流，产生交叉污染。拍板 轻轻的在吸水纸上扣干板孔内的液体。技术资料 显色 因试剂盒的吸光度值会受环境中的温度、湿度、酶

14、标板反应时所接触到的物品的导热度等有关，实验人员在加完显色液后，可根据颜色的深浅适当的延长或者缩短显色时间。 防止出现吸光度值接近或高于酶标仪的最高检测灵敏度（OD值在2.5-3.0之间），这样会间接影响到检测结果，如出现曲线前半部份梯度不明显或颠倒数值等现象，也就造成了一些假阳性或部份检测结果偏低的现象 。技术资料 检测结果分析 试剂盒方法作为一种筛选方法，个别项目对鸡肉样本检测存在一定比例假阳性率，不存在（不允许）假阴性。“假阳性”：是相对于阳性样本而说的概念，指试剂盒方法对确证阴性样本检测所得的结果。 当样本检测结果吸光度值大于零标准吸光度值时是所谓“超阴”情况，若在零标准的120 以内

15、，则可判断为样本阴性，如高于120 ，则检测结果无效，需要分析引起样本超阴的原因。技术资料1)、设置参数 双击已安装好的点此打开设置框输入OD值板条排列顺序打开如下界面分析软件使用手册技术资料 设置文本框格式标准品标准品重复次数、浓度、稀释倍数点此下翻属性样本样本数量、 编号、重复次数、稀释倍数技术资料2)、输入吸光度值此排列须和点板顺序一致用键盘方向键控制输入技术资料3)、结果分析 显示曲线点此查看药物含量点此查看曲线标准品信息技术资料 样本中药物含量标准品编号标准品信息标准品浓度标准品OD值变异系数百分吸光度值实测浓度变异度样本编号样本OD值、变异系数、百分吸光度值实测浓度稀释倍数样本中药

16、物的含量点此打印技术资料4)、打印报告选中该复选框开始打印技术资料 报告形式如下技术资料 试剂盒使用标准操作程序 根据检测需要，编写常规兽药残留检测试剂盒使用标准操作程序，具有更强的针对性，每个步骤更加清晰，有效减少实验中出现的错误。勤邦试剂盒标准操作程序ELISA常见问题解析技术资料 勤邦公司概况技术资料 处于国内食品安全快速检测技术研发领域的领军地位，食品安全免疫检测试剂销售额同行领先。人员构成公司总人数：406科研及技术人员：190，46%营销服务人员：64，16%高级职称8人，中级职称22人综合型研发、生产基地，其中：1500达到GMP要求的万级生产车间；3000研发实验室800SPF

17、级实验动物房1200行政办公区域300培训中心及其他附属设施国内食品安全检测第一品牌拥有客户超过4500家细分行业第一市场份额成为世界食品安全快速检测技术的第一品牌企业规模市场份额企业愿景01关于勤邦-我们的规模酶联免疫试剂盒产品约300种；胶体金试纸条约150种；涵盖畜类、禽类、水产、乳业、饲料、蜂产品等食品行业；众多产品的快速并行的研发能力是勤邦的核心竞争优势！每年新开发和改进的技术超过10项02酶联免疫试剂盒产品克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃唑酮、磺胺七合一、磺胺十五合一氯霉素、喹诺酮类、氟喹诺酮、红霉素、卡那霉素、四环素克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇

18、、磺胺、氟喹诺酮、三聚氰胺、内酰胺类、四环素、庆大霉素、林可霉素胶体金试纸条产品勤邦优势-产品优势02呋喃西林酶联免疫检测试剂盒呋喃妥因酶联免疫检测试剂盒呋喃唑酮酶联免疫检测试剂盒呋喃它酮酶联免疫检测试剂盒氯霉素酶联免疫检测试剂盒磺胺类酶联免疫检测试剂盒莱克多巴胺胶体金检测试纸卡克伦特罗胶体金检测试纸卡沙丁胺醇胶体金检测试纸卡莱克多巴胺酶联免疫检测试剂盒克伦特罗酶联免疫检测试剂盒沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒勤邦公司试剂盒外观设计发明专利实用新型专利外观设计专利国家发明专利、实用新型专利172项产品申请国际PCT发明专利2项；国家发明专利93项；实用新型专利72项；外观专利5项勤邦优势-技术优势02勤邦优势-技术优势产品获得国家检测机构认证 磺胺类试纸条国家食品质量监督检