药物分析第九章第1一3节1课件

1、第九章维生素类药物的分析目的要求 1. 掌握维生素A、E、B及C的化学结构与分析方法间的关系；维生素A的三氯化锑鉴别反应及紫外分光光度法（三点校正）测定含量的原理；维生素E的联吡啶鉴定反应及铈量法测定含量的原理；维生素B1的硫色素鉴别反应及硅钨酸重量法测定含量的原理；维生素C的2，6-二氯靛酚鉴别反应及碘量法测定含量的原理。2.熟悉气相色谱法测定维生素E的方法及条件。3.了解上述药物的其他分析方法。课时安排：4学时维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物质。 人体不能合成维生素。 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、

2、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPP-H 维生素A醇-COCH3 维生素A醋酸酯-COC15H31 维生素A棕榈酸酯R :第一节 维生素 A的分析维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75%新维生素Ab 320.5 24%新维生素Ac 310.5 15%异维生素Aa 323 21%异维生素Ab 324 24% 相对生物效价VitA2VitA3 易发生脱氢、脱水、聚合反应（二） 性质 1 溶解性不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等2 不稳定性共轭多烯侧链易被氧化 或有金属离子存在时氧化环氧化物VitA醛VitA酸（一）三氯化锑反应（Carr-price 反应）条件：无水，无醇。CHC

3、l3鉴别二、蓝色逐渐变紫红（BP（2005）max为326nm一个吸收峰UV法（二）max为350390nm三个吸收峰去水VitA（VitA3）VitA讨论 维生素 A有五个共扼双键，无水乙醇溶液在 326 nm处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成5个双键，故，波长红移，同时在350-390之间出现3个吸收峰。USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑TLC法（三）立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（ VitA2）去水维生素A（ VitA3）UV法（一）三 含量测定2. 波长的选择：（1） 1 VitA的max（328nm）（2） 2 3 分

4、别在1的两侧各选一点对吸收有影响的杂质见书P209 第二法 等吸收度法(皂化法)测定对象： VitA醇测定法（1）基本步骤:第一步 A选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除注意： C 为混合样品的浓度 第二步 求第三步 求效价换算因数由纯品计算而得：第四步：求标示量 方法：（2） 第一法维生素A醋酸酯 判断 是否在326329nm之间在326329nm之间改用第二法是否 求算 并与规定值比较 规定值 差值 判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过 计算 A328（校正） 用A328计算03%15%3%第二法第二法 VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000Vit

5、AIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素A的含量？A300 /A328 ：0.56

6、4A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =适用于维生素A醇（等吸收度法） 第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、6/7A法 （3）第二法水溶性脂溶性 判断max是否在323327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算是否 判断 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定 计算A325(校正)03%3%（二）(二) 三氯化锑比色法 标准曲线法优点

7、简便 快速max 618nm620nm缺点呈色不稳定 （5 10s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性注意事项 P2141 颜色不稳，动作要快。2 用无水氯仿作溶剂测定,要求无水。3 温度恒定。4 非专属性，结果偏高。5 有腐蚀性。 、HPLC P215氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)第二节 维生素B1HClCl-（二） 性质1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2 硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。 3 盐酸液的246nm波长处测定吸收度，吸收系数为421。 UV 共轭双键 max = 246nm4 碱性 嘧啶环 伯氨

8、噻唑环 季铵1、可与酸成盐2、与生物碱沉淀剂沉淀。3、含量测定 非水碱量法二、鉴别试验 P220（一） 硫色素反应，ChP硫色素2H方法 取本品约5 mg，加氢氧化钠与正丁醇2.5ml，强烈振摇。放置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸消失，再加碱又重现。专属性反应。VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应S元素反应Cl-反应（三）其他反应含量测定（一） 非水滴定法 1 原理 两个碱性的，已成盐的伯胺与季胺的基团，在非水溶液中，醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用，根据消耗高氯酸的量进行计算。喹那啶红亚甲蓝 （紫红天蓝）2 方法 取本品0.15g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中加冰醋酸，醋酸汞，喹

9、那啶红亚甲蓝2d，高氯酸滴定。由紫红天蓝，1ml相当于16.86mg。 二 紫外光谱法 维生素B1片的测定，取20片称定。严细。称取细粉适量，相当于25 mg，置100ml量瓶中，取5ml，在定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数421。注意所使用的溶剂。= 421（每片）相当于标示量的%=A = ECL规格g/片g/100mlgChP片剂维生素B1注射液的测定取本品相当于B1 50mg，置200ml量瓶中，加水置刻度，取5ml，用盐酸定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数421。注射剂（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlmlNaOH（三）硫色素荧光法 P222原理1、激发波长

10、365nm发射波长435nm方法与计算2、+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇+ NaOH + 异丁醇SdAb对照液供试液特点3、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析4、讨论 P222第三节 维生素CL抗坏血酸（一）结构 为L-抗坏血酸，在化学结构上和醣类似。有4种光学异构体，L右旋活性最强。具有二稀醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（C4，C5），性质活泼。（二）性质、溶解性易溶于水水溶液呈酸性2 酸性C3OH的酸性较强。pKa = 4.17，C2OH的酸性较弱pKa = 11.57。故表现为一元酸

11、的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。二烯醇结构二酮基结构强还原性二烯醇结构的还原性极强。有活性有活性无活性光学活性L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）*5 水解反应与碱反应506 具糖的性质 结构与糖类相似 有糖类的显色反应7 紫外特征二、鉴别反应（一）与AgNO3反应 (ChP2005)具有强还原性：取本品0.2 g, 加水10 ml溶解，取5 ml，加硝酸银0.5ml，成-（二）、与2，6 - 二氯靛酚反应氧化型玫瑰红色还原型蓝色OH(ChP2005)（玫瑰色）（无色）取本品0.2 g, 加水10 ml溶解，取5 ml，加2，6 - 二氯靛酚2d，成-（三）与其他氧化剂的反应与碱性酒石酸铜

12、反应USP与KMnO4反应（四）糖类的反应 USP或盐酸50吡咯（蓝色）(糠醛)戊糖50(吡咯)（四） UV0.01mol/L HCl、杂质检查（一） 溶液的澄清度与颜色检查 注射液 取本品适量，加水成50mg/ml的溶液，420nm 测，吸收度不得超过0.06。片剂 取片粉适量（相当于1.0g），加水20ml溶解，滤过。成50mg/ml的溶液，440nm 测，吸收度不得超过0.07。在加工过程中有色杂质略有不同，故波长不同。（二） 铁，铜离子的检查 P226指示剂 淀粉指示液四、含量测定（一）碘量法1 原理H+ 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O62、方法（1）酸性环境 醋酸（2）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度4、讨论（3）立即滴定 赶走水中O2减少O2的干扰（4）附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 一缩二亚硫酸CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a（二）2，6 - 二氯靛酚钠滴定法 P2271