血型鉴定操作规程

1、血型鉴定操作规程（一）ABO血型定型受血者的ABO血型必须在输血前给予确认，这是因为在各类血型系统中，以A、B抗原的抗原性最强。当受血者接受了所缺少的A、B抗原后，可发生立即型的血管内溶血并可危及生命。ABO血型错配是导致输血死亡的主要原因。 1. 原理 根据红细胞上有无A抗原和（或）B抗原，以及血清中有无抗A及抗B抗体，可以将血型分为A型、B型、AB型和O型4种，可利用红细胞凝集试验通过正定型、反定型鉴定ABO血型。 (1) 正定型：用已知抗A抗B定型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和B抗原。(2) 反定型：用已知的A型红细胞和B型红细胞检测血清中有无相应的抗A和抗B抗体。通常正定型和反定

2、型结果一致，才可以正确鉴定ABO血型。2. 材料 试剂：抗A、抗B、抗AB定型试剂；A型、B型、O型试剂红细胞。受检材料：受检者红细胞盐水悬液或全血，受检者血清。 3. 方法和结果解释 (1) 玻片法鉴定红细胞ABO血型 1) 方法：在标记的玻片上分别加1滴抗A、抗B、抗AB试剂，各加l滴受检者的红细胞悬液，用竹签将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，2分钟后观察结果。 2) 结果观察：凝集为阳性结果；细胞悬液均匀为阴性，对结果有怀疑，应用试管法重新进行试验。 (2) 试管法鉴定红细胞ABO血型 1) 正定型：取2只洁净试管，分别滴加1滴抗A试剂和1滴抗B试剂，然后向每个试管各滴加1

3、滴2%5%受检者的红细胞悬液，轻轻混匀，1000g离心1530秒。轻轻重悬细胞扣，检查凝集。判读结果，与血清定型结果比较。 2) 反定型：标记3只洁净的试管Al、B和O细胞，每个试管中加2滴受检者的血清。分别向标记的试管中滴加相应的Al、B和O型试剂红细胞。轻轻混匀试管，1000g离心1530秒。检查上清液有无溶血，轻轻重悬细胞扣，检查有无凝集，判读结果，与细胞定型结果比较。 3) 结果解释：细胞定型试验的凝集及血清定型试验的凝集或溶血都表示阳性结果。重悬细胞扣后，细胞悬液均匀表示阴性结果。O型红细胞作为阴性对照细胞。在记录血型结果前要解决细胞和血清定型试验结果不一致的问题。 (3) 微量板法

4、鉴定红细胞ABO血型：微量板可以是U型板或V型板，可通过离心微量板或是将板放置成一定角度观察结果。 1) 正定型：在U型板的两个干净孔内分别加入l滴抗A、抗B试剂，在含有血型定型试剂的各孔内加1滴2%受检者的红细胞悬液，轻叩板边，混匀孔内物质。约200g离心30-60秒。用手轻叩或借助振荡器重悬细胞扣。判读结果，与血清定型结果比较。 2) 反定型：每孔中加1滴受检者的血清或血浆。在U型板的各孔内分别加1滴2%的Al和B细胞（如试验需A2和O细胞，可将它们分别加入第三、四个孔内）。轻叩板边，混匀孔内物质。约200g离心3060秒。用手轻叩或借助振荡器重悬细胞扣。判读结果，与细胞定型结果比较。 3

5、) 结果解释：细胞定型试验的凝集及血清定型试验的凝集或溶血都表示阳性结果。重悬细胞扣后，细胞悬液均匀表示阴性结果。O型红细胞作为阴性对照细胞。在记录血型结果前要解决细胞和血清定型试验结果不一致的问题。(4) ABO正定型及反定型试验结果和解释：见表5-1、表5-2。表5-1ABO血型细胞定型和血清定型试验结果解释受检者红细胞与定型血清的凝集反应受检者血清与试剂红细胞的凝集反应结果判读抗-A抗-BA细胞B细胞O细胞ABO血型-+-O+-+-A-+-B+-AB表5-2 红细胞抗原抗体反应强度及红细胞凝集程度反应强度 红细胞凝集情况 4+ 一个结实的大凝块，背景清楚 3+ 几个大的凝集块，背景清楚2

6、+ 中等大小的凝块，背景清楚1+ 小凝块，背景较混浊+/- 有少量肉眼可见的凝集，背景红色混浊显微镜下可观察到较多凝集细胞 没有可见的凝集，呈均匀的红细胞悬液Mf 混合外观凝集，少数红细胞形成较大的凝集块，周围是游离红细胞 4. ABO定型试验中的常见问题常规的ABO定型包括正定型，即用抗A和抗B做红细胞定型，以及反定型，即用A及B试剂细胞做血清定型。ABO定型试验产生问题，一般见于正、反定型不一致，有技术和管理上的问题，也有标本红细胞或血清本身的问题。（1）技术和管理错误 标本或试剂搞错；器材不沽；试剂污染或失效；离心过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果记录或判断错误；细

7、胞与血清间比例不适当。（2）血清异常 Wharton胶或血清蛋白引起缗钱状凝集，影响反定型结果。（3）红细胞致敏 受免疫球蛋白致敏的红细胞在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集。（4）异常基因型 ABO亚型的检查中，A和B抗原可能为弱抗原，难以检出。（5）近期输血 试验前曾输入其他ABO血型不一致的血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。（6）嵌合体血型(chimerism) 这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时可以出现 “混合外观凝集”现象。（7）疾病因素导致抗原减弱 某些白血病患者和难治性贫血患者中，ABO血型系统的抗原性可受到抑制，检出困难。（8）红细胞

8、多凝集现象 红细胞因遗传或获得性的表面异常发生多凝集现象。（9）获得性B 由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。（10）血型特异性物质过高 一些卵巢囊肿病例血型物质的浓度很高，可中和抗A和抗B定型试剂，要得到正确的正定型结杲，必须多次洗涤红细胞。（11）近期内进行大量的血浆置换治疗 由于使用大量的非同型血浆进行置换治疗，标本血清中含有所输供体提供的抗A或抗B抗体，造成反定型错误。（12）异常的血浆蛋白质 受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等导致缗钱状形成，造成假凝集现象。（13）不规则抗体的存在 受检者血浆中含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，与试剂红细胞上

9、其他血型抗原系统的抗原起反应。（14）低丙种球蛋白血症 低丙种球蛋白血症（丙种球蛋白量减低）的病例可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集。（15）药物等因素 药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂可引起红细胞凝集或类似凝集。（16） 年龄因素 免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常的结果。（17）防腐剂因素 患者体内可能含有对防腐剂中的成分或对混悬介质的抗体，导致ABO定型差错。（二）Rh血型定型1. 原理 Rh血型系统包括46种抗原，其中免疫原性最强的是RhD抗原。在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被检红细胞和抗D血清凝集者为

10、Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。其他Rh抗原鉴定和D抗原一样，加相应的抗血清即可。其鉴定方法由抗血清的性质而定，如盐水抗体用盐水法，IgG抗体用酶法、抗人球蛋白等方法。2. 试剂 RhD诊断试剂包括IgM和IgG抗D诊断试剂；受检者红细胞悬液；已知Rh阳性和阴性红细胞各一份。3. 方法和结果解释 (1) 玻片法 在一块标记的干净玻片上分别滴加1滴抗D血清，和Rh对照血清，分别滴加2滴混合好的受检者40% 50%的红细胞悬液。用竹签把细胞悬液和试剂充分混匀，并把混合物均匀涂开，慢慢连续倾斜并观察凝集。大多数厂家规定试验必须在2分钟内判断结果。结果解释：抗D血清出现凝集对照呈均匀的红细胞悬液时是阳佳

11、结果，抗D和对照都是均匀的红细胞悬液时，提示阴性结果。如果要做变异型D和不完全D试验，必须用试管采用抗球蛋白法。如对照出现凝集，在未经进一步试验之前，不能解释为阳性结果。(2) 试管法1) 盐水法：在一支标记的干净试管中加入一滴IgM抗D试剂，在第二支标记试管中加入1滴合适的对照试剂。在每支试管中各加入1滴2%5%受检者红细胞悬液，轻轻混匀，1000g离心1530秒。轻轻重悬细胞扣，检查有无凝集，判读结果。 结果解释：抗D试管出现2+或2+以上的凝集而对照管呈现均匀悬液，是阳性结果。如抗D试管凝集低于2+或1十，低于阳性对照，或对照管出现凝集，在未经进一步试验之前， 不能解释为阳性结果。抗D试

12、管和对照管都是均匀悬液，是阴性结果。患者的血液可以解释为Rh阴性，但对献血者须进一步进行Rh阴性确认试验，以免漏检变异型D和不完全D。2) 抗球蛋白法：在标记的干净试管、阳性对照管、阴性对照管中各加入1滴IgG抗D血清，分别加入2%5%受检者红细胞悬液l滴，阳性对照红细胞悬液1滴，阴性对照红细胞悬液1滴。置37水浴30分钟。生理盐水洗涤细胞3次，最后一次洗涤后把盐水倾倒干净，用吸水纸吸干试管边缘。每管加1滴抗人球蛋白血清，混合离心。轻轻重新悬浮细胞扣，并观察凝集反应。 结果解释：阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检管凝集，表明受检红细胞上有相应抗原；受检管不凝集，表示受检者红细胞上不含相应抗原。

13、3）微量板法：在一个干净的微量板的孔内加1滴Rh试剂，在第二孔内加1滴对照试剂。在每一个孔内加1滴2%5%的红细胞悬液，轻叩微量板边缘，混匀，200g离心3060秒，用手工或借助振荡器重悬细胞扣。判读、解释并记录结果。4. Rh变异型试验及阴性确认试验（1） 原理 变异型D和不完全D型红细胞带有D抗原，与大多数抗D试剂在盐水介质中不发生凝集，但细胞与抗D血清一起孵育后，在间接抗球蛋白试验中发生凝集。因此必须进行Rh阴性确认试验，排除变异型D和不完全D型的可能。（2）试剂 用针对已知RhD表位的抗D诊断试剂组合成能覆盖所有D表位的抗体组（通常两种抗D，其中一种含IgG抗D，以便进行随后的弱D试验

14、）。如果无法获得上述试剂，则可用不同厂家或不同人份的抗D血清35种。抗球蛋白试剂多特异性抗球蛋白和（或）抗IgG ,IgG致敏红细胞，2%5%受检者红细胞。（3）方法 在一支标记的干净试管中加入l滴IgM抗D试剂，在第二支标记试管中加入l滴合适的对照试剂。在每支试管中各加入l滴2%5%受检者红细胞悬液，轻轻混匀，并在37 孵育30分钟，1000g离心1530秒，轻轻重悬细胞扣并观察凝集反应，如受检红细胞与抗D管凝集而与试剂对照管不凝集，可记录受检标本为阳性结果，不必做抗球蛋白试验。如不凝集，则用大量盐水洗涤细胞34次，最后一次洗涤后把盐水倾倒干净，吸干试管边缘，加l2滴抗球蛋白试剂，轾轻混匀，

15、1000g离心30秒，重悬细胞扣并观察凝集反应。如果试验为阴性，加入已知IgG致敏红细胞，再次离心，检查凝集。（4）结果解释 做变异型D和不完全D型试验时，必须同时做试剂对照试验或直接抗球蛋白试验，抗D试管出现凝集而对照管无凝集时，是阳性结果，判为Rh阳性。抗D试管无凝集反应是阴性结果，为Rh阴性。如果试剂对照管凝集，将不能对这次变异型D和不完全D型试验作出有效解释。在这种情况下，对预期受血者应输Rh阴性血，如果受检细胞是献血者，该血液不应该用于临床。（5）注意事项 Rh定型主要鉴定D抗原，定型时应按照抗D试剂的使用说明进行，必须要有严格的对照试验，包括抗原的阴、阳性对照以及试剂对照试验。Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因有：受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子；