响应面法优化五倍子单宁酸的超声波提取工艺

响应面法优化五倍子单宁酸的超声波提取工艺响应面法优化五倍子单宁酸的超声波提取工艺摘要：采用超声波法提取五倍子单宁酸，根据中心组合〔Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ〕试验设计原理，以响应面分析法优化提取工艺条件。结果说明，五倍子单宁酸的最正确提取工艺条件为乙醇体积分数４８％、料液比1∶２３〔/V，g/ｍＬ〕、提取温度５9℃和提取时间２９ｍｉｎ，在此条件下单宁酸提取率达７．３２％。关键词：五倍子；单宁酸；超声波提取；响应面分析单宁酸又称鞣酸，是一种水溶性多酚化合物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等活性［１，２］，被广泛用于医药、食品、日用化工等行业［３］。中国五倍子〔Ｃｈｉｎｅｓｅｇａｌｌｎｕｔ〕资源丰富，是常用的中药材，具有敛肺、涩肠、止血、解毒之成效［４］，含有丰富的单宁酸，其质量和产量均比拟高，是我国消费单宁酸的主要原料之一。本研究采用超声波提取五倍子单宁酸，采用响应面分析法优化提取工艺，为五倍子单宁酸的进一步开发利用提供参考。１材料与方法１．１材料与仪器五倍子〔市售〕；单宁酸标准品〔购自国药集团化学试剂〕；无水乙醇、钨酸钠、磷钼酸、碳酸钠、磷酸等均为分析纯。ＫＱ５２００ＤＢ型数控超声波清洗机〔昆山市超声仪器〕；Ｃａｒｙ５０紫外-可见分光光度计〔美国瓦里安公司〕；ＴＤＬ－５台式离心机〔上海安亭科学仪器厂〕等。１．２试验方法１．２．１五倍子单宁酸的提取五倍子经枯燥至恒重，去虫尸、粉碎后过６０目筛。准确称取５．００００ｇ五倍子干粉末于锥形瓶中，按各种设定条件〔乙醇体积分数、料液比、提取温度和时间〕进展超声提取，待超声波清洗机停顿后，取出锥形瓶将提取液移入离心管，３０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，真空抽滤，搜集滤液定容至１００ｍＬ即为待测样品溶液。１．２．２单宁酸含量的测定采用Ｆｏｌｉｎ－Ｄｅｎｉｓ法测定单宁酸含量［５］，以单宁酸为标准品，得到吸光度〔Ａ〕与单宁酸质量浓度〔Ｃ〕的回归方程：Ａ＝０．１４１Ｃ＋０．０９５，Ｒ２＝０．９９９３。准确汲取１．２．１所得的待测样品液２．００ｍＬ，测定６５０ｎｍ处吸光度值，得到单宁酸的质量浓度，按下式计算五倍子单宁酸提取率：１．３响应面法试验根据中心组合〔Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ〕试验设计原理［６］，选取乙醇体积分数、料液比、提取温度和提取时间４个对单宁酸提取率影响显著的因素，采用４因素３程度的响应面进展试验设计，试验因素及程度见表１。２结果与分析２．１响应值分析以单宁酸提取率为响应值论文联盟.Ll.〔Ｙ〕，响应面试验结果见表２。对其进展方差分析〔表３〕，回归方程的Ｆ值为７．７５０，Ｐ＜０．０１，说明所拟合的二次回归方程适宜；相关系数Ｒ２＝０．９００４，说明响应值的变化有９０．０４％来源于所选变量乙醇体积分数、料液比、提取温度和提取时间。同时，表３说明Ｘ２、Ｘ３Ｘ３、Ｘ４２是极显著的〔Ｐ＜０．０１〕，Ｘ３、Ｘ４、Ｘ１Ｘ３、Ｘ２２是显著的〔Ｐ＜０．０５〕，Ｘ１、Ｘ１２、Ｘ１Ｘ２、Ｘ１Ｘ４、Ｘ２Ｘ３、Ｘ２Ｘ４、Ｘ３Ｘ４是不显著的〔Ｐ＞０．０５〕，说明试验因素对响应值的影响不是简单的线性关系。采用ＳＡＳ的ＰｒｏｃＲｅｇ程序的逐步排除法〔ｓｔｅｐｗｉｓｅ〕剔除显著程度较高的回归方程项，得到的回归方程为：Ｙ＝７．１０７－０．２７６Ｘ１＋０．８２７Ｘ２－０．４９５Ｘ３－０．４３３Ｘ４－０．４３８Ｘ１２－０．８４５Ｘ１Ｘ３－０．７４５Ｘ２２－１．３６５Ｘ３２－１．４５３Ｘ４２，此回归方程的Ｆ值为１２．４８，相关系数Ｒ２＝０．８６９，且方程是高度显著的。其中一次项Ｘ１和二次项Ｘ１２为显著项，其余一次项、二次项以及交互项Ｘ１Ｘ３为高度显著项。方程可以较好地描绘各因素与响应值之间的真实关系，可以利用该回归方程确定最正确提取工艺条件。对回归方程取一阶偏导并等于零，再求解方程组得Ｘ１＝－０．１９９２８８２４５、Ｘ２＝０．５５５１２５、Ｘ３＝－０．１１９６７０９６７、Ｘ４＝－０．１４８７９６，由此得到最正确提取工艺条件为：乙醇体积分数４８．０１％，料液比1∶２２．７８〔/V，g∶ｍＬ〕，提取温度５８．80℃和提取时间２８．５１ｍｉｎ，预测值为７．４３％。２．２响应面图和等高线图由响应面回归分析拟合绘制响应面图和等高线图，以研究自变量的交互作用对因变量的影响〔图１～图６〕。分析图１～图６可知，图２中的等高线为椭圆形，证明乙醇体积分数〔Ｘ１〕与提取温度〔Ｘ３〕的交互作用显著，这与２．1分析的结果吻合；料液比〔Ｘ２〕和提取温度〔Ｘ３〕对单宁酸提取率较为显著，表现为曲线较陡峭〔图４〕。因此采用超声波辅助提取五倍子单宁酸过程中，要严格控制好料液比、提取温度和提取时间；假设提取温度改变时，那么应适当调节乙醇体积分数。２．３验证试验在最正确工艺提取条件，即乙醇体积分数４８．０１％〔取４８％〕，料液比1∶２２．７８〔取1∶２３〕，提取温度５８．80℃〔取５9℃〕和提取时间２８．５１ｍｉｎ〔取２９ｍｉｎ〕，进展验证试验，重复３次取平均值，实际测得单宁酸提取率为７．３２％，与预测值７．４３％的相对误差为１．５％。因此采用响应面法得到的提取条件参数可靠，且具有实用价值。３结论采用中心组合试验设计对影响超声波提取五倍子单宁酸的关键因素及其互相作用进展讨论，优化出超声波提取五倍子单宁酸的最正确工艺参数为：乙醇体积分数４８％，料液比1∶２３，提取温度５9℃和提取时间２９ｍｉｎ。在该条件下实际测得单宁酸提取率为７．３２％。超声波法提取五倍子单宁酸，具有提取时间短、条件温和等优点，是一种非常有效的方法，用于单宁酸的提取，具有极大的开展潜力。参考文献：［１］于秋艳，宗成文，赵金伟，等．长白山牛皮杜鹃组培苗与野生苗药用成分含量分析［Ｊ］．湖北农业科学，２０１０，４９〔１１〕：２８９２－２８９４．［２］秦亮，郭延生，胡豪杰，等．正交试验法优选甘肃沙枣总鞣质的最正确提取工艺［Ｊ］．湖北农业科学，２０１０，４９〔６〕：１４４７－１４４９．［３］翟文俊，岳红．微波辅助提取石榴皮中单宁的研究［Ｊ］．食品科技，２００９，３４〔６〕：２０３－２０５．［４］张霞，孙宝忠，哈斯格根，等．五倍子抑菌