乳清酸左卡尼汀对实验大鼠胃溃疡的治疗作用

乳清酸左卡尼汀对实验大鼠胃溃疡的治疗作用

[11-03-2913:27:00]

编辑：studa20

作者：何健茹，王立军，苏玉虹【摘要】

目的观察乳清酸左卡尼汀对胃溃疡的治疗作用，并探讨其抗溃疡的相关机制。方法大鼠胃溃疡造模,应用HE染色观察大鼠胃溃疡创面的愈合程度，Elisa法测胃溃疡组织IL-8，IL-10的表达情况;应用免疫组化法测胃溃疡组织EGF的表达情况。结果乳清酸左卡尼汀低剂量组25mg/(kg·d)、乳清酸左卡尼汀中剂量组50mg/(kg·d)、乳清酸左卡尼汀高剂量组100mg/(kg·d)对胃溃疡均有治疗作用，中剂量效果接近于奥美拉唑。乳清酸左卡尼汀能够降低组织MDA含量，增强SOD活性，通过抗氧化应激治疗溃疡。乳清酸左卡尼汀通过抑制胃溃疡组织炎症因子IL-8,10表达而起到抗氧化作用。乳清酸左卡尼汀的抗溃疡作用与其促进表皮生长因子(EGF)表达有关。结论乳清酸左卡尼汀对胃溃疡有治疗作用，其机制可能与抗氧化应激和促进EGF表达有关。【关键词】

乳清酸左卡尼汀;胃溃疡;抗氧化应激;生长因子;大鼠

TheTreatmentEffectandMechanismResearchofCarnitine-orotateonGastricAcidLeftHEJianru1,WANGLijun2,SUYuhong1(1.LiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001China;2.ChongqingPoliceStation,Chongqing400020China)Abstract:ObjectiveToobservethetherapeuticeffectofCarnitine-orotateongastriculceranddiscusstherelevantmechanism.MethodsHEdyeingobservationwasappliedintotheratgastrichealingprocess.ElisatestIL-8,IL-10expression.ImmunohistochemicalmethodwasappliedtotesttheexpressionofEGF.Results①Carnitine-orotatecanhealgastriculcer.②Carnitine-orotatecanreduceMDAcontentoftheorganization,StrengthenSOD,Throughanti-oxidationstresstreatmentulcers.③Carnitine-orotateinhibitinflammatoryfactorIL-8,10expressionandplayaroleinanti-oxidation.④Carnitine-orotateresistanceandpromoteEGF.ConclusionsCarnitine-orotateiseffectivetotreatstomachulcersmainlythroughanti-oxidationstressesandpromotetheexpressionofEGF.Keywords:Carnitine-orotate;gastriculcer,antioxidantstress;growthfactor;rats左卡尼汀为一种氨基酸衍生物，是脂肪代谢必需的辅助因子，可促进脂质代谢，临床上一直用于降血脂治疗及调整胃肠道功能。随着对该药物研究的深入，近年研究发现，左卡尼汀有促进创伤愈合的作用，其机制为抗氧化作用。在此基础上，我们为左卡尼汀加入了一个乳清酸基团，形成了一种新的药物乳清酸左卡尼汀或左卡尼汀乳清酸盐。此药还处于实验室研制阶段，有研究发现左卡尼汀对急性肝损伤具有保护作用，但其作用于消化性溃疡至今未见报道。本实验旨在通过大鼠消化性溃疡动物模型，观察乳清酸左卡尼汀对消化性溃疡的治疗作用，并探讨相关机制，从而为乳清酸左卡尼汀的临床应用提供实验依据。1材料与方法1.1材料1.1.1动物与分组：健康SD雄性大鼠60只,体重为200g，由辽宁医学院动物实验中心提供。按完全随机设计法将其分成6组，每组10只,分别为：(1)正常对照组，无手术自由进食水;(2)胃溃疡模型组，手术后以1mL/100g生理盐水灌胃;(3)乳清酸左卡尼汀低剂量组25mg/(kg·d);(4)乳清酸左卡尼汀中剂量组50mg/(kg·d);(5)乳清酸左卡尼汀高剂量组100mg/(kg·d);(6)奥美拉唑组14mg/(kg·d)。SD大鼠给药剂量按动物与人体的每千克体重等效剂量折算系数计算(公式：大鼠日服药量=人日服药量×0.16)，灌胃容积最大为2mL/100g。1.1.2主要试剂及药品①乳清酸左卡尼汀，由锦州奥鸿药业有限责任公司提供;②奥美拉唑，由锦州九泰药业提供;③表皮生长因子(Epidermisgrowthfactor，EGF)、过氧化物歧化酶(Proliferatingcellnuclearantigen，SOD)检测试剂盒、丙二醛(MaleicDialdehyde，MDA)检测试剂盒，由武汉博士德生物工程有限公司提供;④ELISA检测试剂盒：上海西唐生物科技有限公司;⑤紫外分光光度计：日本岛津。1.2方法1.2.1动物造模：按照文献用乙醚麻醉然后将固定于手术台上,剪掉腹壁毛，常规消毒后，剑突下腹壁正中切口2～2.5cm暴露全胃，在胃体部与幽门窦交界处将微量注射器平刺入浆膜下0.4～0.5mm注入体积分数为10%醋酸0.05mL形成丘疹,将胃送回腹腔,缝合腹壁，消毒伤口。术后2～3h内均清醒过来，60只大鼠随机分成6组(除外正常对照组)，造模周期为2天，第3天开始给药。乳清酸左卡尼汀高、中、低剂量治疗组、奥美拉唑组分别以1mL/100g的容积按上述药物剂量配成悬浊液给药，模型组以1mL/100g的生理盐水灌胃，正常对照组自由饮食，连续给药10天。1.2.2取材：大鼠在连续灌胃给药10天后，于末次给药后禁食24小时，自由饮水，12天将大鼠麻醉后颈动脉取血，分离血清并取材。以溃疡部位为中心修剪胃壁组织，以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材，切取含溃疡边缘约3mm组织在内的溃疡组织块(正常组在胃前壁近幽门处取组织)组织块约1.0cm×1.2cm大小，分成两部分。一部分体积分数为0.10的中性甲醛固定，按照常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5μm厚度连续切片，分别作HE染色和免疫组化使用;另一部分迅速放入EP管内放入-80℃冰箱内储存，以备SOD、MDA和ELISA检测IL-8，10表达的使用。1.2.3HE染色：取以上各组大鼠胃组织切片进行HE染色，主要步骤如下:石蜡切片常规脱蜡至水(二甲苯I10min→二甲苯Ⅱ10min→体积分数为1.00的乙醇I5min→体积分数为1.00的乙醇Ⅱ5min→体积分数为0.95的乙醇I5min→体积分数为0.95的乙醇Ⅱ5min→体积分数为0.90的乙醇5min→体积分数为0.80的乙醇5min)→自来水冲洗1min→Harris苏木素染液3～5min→流水冲洗1～2min→盐酸酒精分化30～45s→流水冲洗10～20min至返蓝→伊红染液复染30～45s→梯度酒精脱水(体积分数为0.80的乙醇5min→体积分数为0.90的乙醇5min→体积分数为0.95的乙醇I5min→体积分数为0.95的乙醇Ⅱ5min→体积分数为1.00的乙醇I5min→体积分数为1.00的乙醇Ⅱ5min)，二甲苯透明(二甲苯I10min→二甲苯Ⅱ10min)，中性树胶封片。光学显微镜下观察各组的病理学变化。1.2.4免疫组织化学检测EGF表达：取切片常规脱蜡按照免疫组化试剂盒说明书操作，DAB显色20min，自来水充分冲洗，苏木素复染、脱水、透明、封片，光学显微镜下观察。棕黄色颗粒状为阳性细胞。1.2.5组织中SOD、MDA含量测定：按SOD、MDA试剂盒操作。1.2.6酶联免疫吸附测定IL-8和IL-10的含量(enzyme-liknedimmunosobrentassay,ELISA)。1.3统计学分析应用SPSS13.0软件进行统计分析，形态学指标进行描述性统计分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，进行单因素方差分析及LSD检验。2结果2.1光镜观察结果2.1.1乳清酸左卡尼汀高剂量组100mg/(kg·d)、乳清酸左卡尼汀中剂量组50mg/(kg·d)、乳清酸左卡尼汀低剂量组25mg/(k