紫外可见分光光度计的介绍及使用

紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第1页!主要内容1仪器构成及原理2分光光度计的使用

波长扫描

定量测定3注意事项紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第2页!紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第3页!物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用

溶液对光的作用示意图紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第4页!溶液对光吸收示意图溶液对光吸收过程紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第5页!组成：光源、单色器，狭缝、样品池、检测器1．光源：①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长，价格低。

钨灯——可见光区320～2500nm氢灯或氘灯——紫外光区195－375nm

组成紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第6页!3.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英——适用于紫外和可见光区4．检测器：将光信号转变为电信号的装置光电管光电倍增管二极管阵列检测器5．记录装置：讯号处理和显示系统紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第7页!紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第8页!启动UVSolution软件

打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的[HitachiApplications]选项中的[UVSolutions2.0]选项。或者直接在桌面上双击UVSolution图标。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第9页!仪器在初始化过程中进行如下自检工作：ROM检测RAM检测波长步进电机运转检测氘灯点亮检测钨灯点亮检测仪器波长校正紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第10页!仪器主机初始化完毕，进入工作状态。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第11页!General:总体设置页面Measurement测量:

Wavelengthscan波长扫描Timescan时间扫描

Photometry定波长测量Operator操作者:输入操作者的姓名Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。UseSampleTable使用样品表:选择是否使用样品表。Comments备注:填写一些备注信息。[Load]按钮:用于装载原来保存的方法文件。[Save]按钮:保存当前的设置参数。[SaveAs]按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第12页!Datamode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2Light一般选择“Auto”紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第13页!Processing数据处理页面

紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第14页!样品名设置，备注信息及文件名输入紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第15页!测量有两种方法可以开始测量：使用菜单方式选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量使用按钮方式：按按钮开始测量如果要终止扫描按按钮。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第16页!测量参数设置在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口.紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第17页!在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校准。在concertration中键入标准浓度单位。3.Instrument紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第18页!5吸光度自动校零在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮进行吸光度校零。6在wavelength中设定扫描的最大吸收波长，7放入标样，选中个标样，点measure依次测定完成后自动给出标准曲线。8选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。9关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第19页!3.测量条件的选择：选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高.选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。4.用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。

5.正确登记，将仪器及实验台擦干净。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第20页!测试题分光光度计由哪几部分组成？设计其光路图。紫外可见分光光度计对光源的要求是什么？一般采用哪几种光源，各光源的波长范围是什么？比色皿一般由什么材料制成？有哪几种规格？做实验时，你是如何选择比色杯的规格及材料的？紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第21页!一仪器原理紫外可见吸收光谱主要产生于分子价电子在能级间的跃迁。利用一定频率的紫外--可见光照射被分析的物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。

紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第22页!I0入射光辐射强度I透射光辐射强度T透射比a吸光系数ε摩尔吸光系数光吸收遵循朗伯-比尔定律：紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第23页!偏离朗伯比尔定律的原因-化学因素

朗伯-比尔定律的假设条件一：

入射光为单色光。朗伯-比尔定律的假设条件之二：

吸收粒子是独立的，彼此之间无相互作用。比尔定律适用于稀溶液。吸光组分的化学变化：

吸光组分的缔合、离解，互变异构，络合物的逐级形成，以及与溶剂的相互作用等，都将导致偏离比耳定律。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第24页!2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是：①入射狭缝——限制杂散光进入。②色散元件——即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。

③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。④出射狭缝——只让特定波长的光射出单色器。

紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第25页!紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第26页!开始程序启动按方法设定按钮扫描范围读数方式扫描速度按样品名输入按钮或将空白样品分别放入参比池和样品池进行用户基线校正按按钮将样品放入样品池开始测量按按钮开始测量打印数据按按钮打开数据处理界面数据检索峰值检出图谱平滑、求导二波长扫描紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第27页!2运行UVSolution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS232Port）见图紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第28页!3仪器主机开始初始化。见图紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第29页!测量参数设置1在[Edit]菜单中选择[Method…]选项，或按按钮。出现下列窗口。

紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第30页!Instrument仪器参数设置页面紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第31页!Monitor显示页面

紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第32页!Report报告结果页面

紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第33页!基线校正用户基线校正方法：可将scanspeed设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮系统基线校正方法。使用空气作为参比和样品。按按钮出对话框见图，选择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第34页!二光度扫描开始程序启动按方法设定按钮按样品名输入按钮或将空白样品分别放入参比池和样品池将样品放入样品池开始测量按按钮开始测量打印数据按按钮打开数据处理界面进行用户基线校正按按钮定量测量设置波长输入标样紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第35页!具体操作程序Method:general:Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量）

Quantitation定量参数设置页面：紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第36页!4

standards标准参数设置

键入标系的样品浓度及名称紫外可见分光光度计的介绍及使用共40页，您现在浏览的是第37页!三注意事项1.开机预热15分钟左右。2.测定时应注意：参照池和吸收池应是一对