学习目标掌握色谱分析的基本原理,了解气相色谱仪的结【-】

学习目标1、掌握色谱分析的基本原理，了解气相色谱仪的结构；2、掌握气相色谱分析的条件选择；3、掌握气相色谱定量分析方法；4、学会利用色谱图及相应术语；5、了解气相色谱分析仪的维护与保养方法。色谱法的最早用于分离植物色素：在一玻璃管中放入颗粒状的碳酸钙，将含有植物色素〔植物叶的提取液〕的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。第一节色谱分析的基本原理一、色谱分析法概述如今的色谱法早已不局限于色素的分离，其方法也早已得到了极大的发展，但其分离的原理仍然是一样的。我们仍然叫它色谱分析。色谱法(chromatography)以试样组分在固定相和流动相间的溶解、吸附、分配、离子交换或其他亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离、分析方法称色谱法。基本术语色谱柱—进行色谱分离用的细长管。固定相—管内保持固定、起分离作用的填充物。〔stationaryphase〕流动相—流经固定相的空隙或表面的冲洗剂。〔mobilephase〕色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。

1、按两相的状态分类色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体，由此可分为气相色谱法〔GC〕和液相色谱法〔LC〕。固定相既可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。二、色谱法分类2、按固定相的形式分类按固定相的状态可分为：柱色谱：固定相装在色谱柱中；纸色谱：利用滤纸作载体，吸附在纸上的水作固定相；薄层色谱：将固体吸附剂在玻璃板或塑料板上制成薄层作固定相。

3、按分离原理分类吸附色谱法：利用吸附剂〔固定相一般是固体〕表面对不同组分吸附能力的差别进行分离的方法；分配色谱法：利用不同组分在两相间的分配系数的差别进行分离的方法。离子交换色谱：利用溶液中不同离子与离子交换剂间的交换能力的不同而进行分离的方法。空间排斥〔阻〕色谱法：利用多孔性物质对不同大小的分子的排阻作用进行分离的方法。色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在流动相合固定相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。三、色谱分离的基本原理使用外力使含有样品的流动相〔气体、液体〕通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面，当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用，由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。三、气相色谱法的特点1、分离效能高2、快速3、灵敏度高、样品用量少4、不足---固体试样不能直接测定，需要标准样品作对照，对试样的要求较高〔既要易挥发又要热稳定性好〕。四、色谱法的发展趋势多机联用、计算机化、专家处理系统。第二节气相色谱仪的基本组成7890气相色谱仪7890单检测器系列色谱仪7890II双气路色谱仪气相色谱仪主要由气路系统、进样系统、分离系统、检测系统和记录系统组成。气路系统主要是指〔分离前〕载气连续运行的密闭通道。作用——获得纯净、流速稳定的载气。组成——包括压力计、流量计及气体净化装置。A载气----要求化学惰性，不与有关物质反应。载气的选择除了要求考虑对柱效的影响外，还要与分析对象和所用的检测器相配。H2，N2，He，Ar等，载气的选择主要由检测器性质及分离要求决定。B净化器----提高载气纯度，多为分子筛和活性碳管的串联，可除去水、氧气以及其它杂质。C稳压恒流装置----压力表和流量计一、气路系统压力表：多为两级压力指示：第一级，钢瓶压力指示(总是高于常压。对填充柱：10-50psi；对开口毛细管柱：1-25psi)；第二级，柱头压力指示。流量计：在柱头前使用转子流量计，但不太准确。通常在柱后，以皂膜流量计测流速，许多现代仪器装置有电子流量计，并以计算机控制其流速保持不变。进样系统包括进样器和气化室常以微量注射器(穿过隔膜垫)或六通阀进样，即将液体样品定量地注入气化室。汽化室温度比样品成分的最高沸点高约30-60℃;

进样要求：L；对毛细管柱分离，体积约为~10-3

L，此时应采用六通阀进样装置来实现。体积过大或进样过慢，将导致分离变差(拖尾)。气化室要求：良好的密闭性。二、进样系统气化室进样系统微量注射器1、色谱柱〔分离柱〕色谱分析的心脏部分。分离柱有填充柱和开管柱(或称毛细管柱)，由柱管和固定相组成。柱材料包括金属、玻璃、融熔石英等。三、分离系统分离系统包括色谱柱、柱温箱〔色谱炉〕、温控装置。填充柱----多为U形或螺旋形，内径2~4mm，长1~5m，内填固定相；开管柱----分为涂壁、多孔层和涂载体开管柱。内径，长达几十至几百m。通常弯成直径10~30cm的螺旋状。开管柱因渗透性好、传质快，因而分离效率高(n可达106)、分析速度快、样品用量小。2、柱温箱〔色谱炉〕设置色谱炉是为了提高适宜的柱温，柱温是影响分离的最重要的因素，其变化应小±0.x℃。选择柱温主要是考虑样品待测物沸点和对分离的要求。柱温通常要等于或略高于样品的平均沸点(分析时间20-30min)；对宽沸程的样品，应使用程序升温方法。3、控温系统包括对三个部分的控温，即气化室、柱箱和检测器。控温方式：恒温和程序升温。温度选择：在介绍仪器组成时给出，此处略。温度控制是否准确、升、降温速度是否快速是市售色谱仪器的最重要指标之一。恒温：45℃程序升温：30-180℃恒温：145℃温度低，分离效果较好，但分析时间长程序升温，分离效果好，且分析时间短温度高，分析时间短，但分离效果差程序升温与恒温对分离的影响比较1、检测器——将各分离组分及其浓度变化用电信号显示出来，以便进行定性或定量分析的装置。检测器有多种型号。四、检测系统2、常用气相色谱检测器1〕热导池检测器---TCD〔Thermalconductivitydetector)2〕氢火焰离子化检测器---FID〔Hydrogenflameionizationdetector)3〕电子捕获检测器---ECD〔Electroncapturedetector〕4〕火焰光度检测器---FPD〔Flamephotometricdetector〕TCD的工作原理---由于不同气态物质所具有的热传导系数不同，当它们到达处于恒温下的热敏元件〔如Pt,Au,W,半导体〕时，其电阻将发生变化，将引起的电阻变化通过某种方式转化为可以记录的电压信号，从而实现其检测功能。特点：此检测器几乎对所有可挥发的有机和无机物质均能响应。但灵敏度较低，被测样品的浓度不得低于万分之一。属非破坏性检测器。FID的工作原理含碳有机物在H2-Air火焰中燃烧产生碎片离子，在电场作用下形成离子流，根据离子流产生的电信号强度，检测被色谱柱分离的组分。FID的结构主体为离子室，内有石英喷嘴、发射极(极化极，此图中为火焰顶端)和收集极。FID特点：1〕灵敏度高(～10-9g/g)；2〕线性范围宽(～107数量级)；3〕噪声低；4〕耐用且易于使用；特点：体积小，灵敏度高，死体积小，应答时间快，但对部分物质如H2、O2、N2、CO、CO2、NO、NO2、CS2、H2O等无响应。属破坏性检测器。电子捕获检测器(ECD〕Electroncapturedetector，ECD主要对含有较大电负性原子的化合物响应。它特别适合于环境样品中卤代农药和多氯联苯等微量污染物的分析。ECD的结构ECD的原理及工作过程---从色谱柱流出的载气(N2或Ar)被ECD内腔中的放射源电离，形成次级离子和电子(此时电子减速)，在电场作用下，离子和电子发生迁移而形成电流(基流)。当含较大电负性有机物被载气带入ECD内时，将捕获已形成的低速自由电子，生成负离子并与载气正离子复合成中性分子，此时，基流下降形成“倒峰〞。气相色谱检测器的性能及有关术语理想的检测器应具有的条件：1〕适合的灵敏度：对一些组分十分灵敏，而对其它那么不，其间相差达107倍；2〕稳定、重现性好；3〕线性范围宽，可达几个数量级；4〕可在室温到400℃下使用；5〕响应时间短，且不受流速影响；6〕可靠性好、使用方便、对无经验者来说足够安全；7〕对所有待测物的响应相似或可以预测这种响应；8〕选择性好；9〕不破坏样品。但任何检测器都不可能同时满足上述所有要求。五、记录处理系统能自动记录由检测器输出的信号，也称为记录仪〔积分仪〕。要求：有可变的满标量程；满标响应时间短；纸速均匀可调；有增益和阻尼控制。1、进行气相色谱法分析时，载气〔一般用氮气或氢气〕由高压钢瓶供给，经减压阀减压后，载气进入净化管干燥净化，然后由稳压阀控制载气的流量和压力，并由流量计显示载气进入柱之前的流量后，以稳定的压力进入气化室、色谱柱、检测器后放空。气相色谱法分析的过程2、当气化室中注入样品时，样品立即被气化并被载气带入色谱柱进行分离。分离后的各组分，先后流出色谱柱进入检测器，检测器将其浓度信号转变成电信号，再经放大器放大后在记录器上显示出来，就得到了色谱的流出曲线。3、利用色谱流出曲线上的色谱峰就可以进行定性、定量分析。这就是气相色谱法分析的过程。色谱流出曲线

试样中各组分经色谱柱分离后，按先后次序经过检测器时，检测器就将流动相中各组分浓度变化转变为相应的电信号，由记录仪所记录下的信号——时间曲线或信号——流动相体积曲线。一、气相色谱术语第三节气相色谱的基本理论1、基线在实验条件下，色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线称为基线。基线在稳定的条件下应是一条水平的直线。它的平直与否可反应出实验条件的稳定情况。2、色谱峰检测器响应信号随时间变化的峰形曲线。3、峰高〔h〕色谱峰顶点与基线的距离叫峰高。4、峰底宽度〔W〕从峰两边拐点作切线与基线相交的截距。5、峰面积色谱峰与峰底基线所围成区域的面积叫峰面积。6、半峰宽〔W1/2〕峰高一半处的宽度。7、保留时间〔tR〕试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间tM〔死时间〕和组份在固定相中滞留的时间。8、死时间〔tM〕不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间，它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用，因此，其流速与流动相的流速相近。据tM可求出流动相平均流速。9、调整时间某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。

tR׳=tR–tM

保留时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关，因此有时需用保留体积来表示保留值。1〕保留体积：从进样至被测组分出现最大浓度时流动相通过的体积，VR。2〕死体积：色谱柱管内存在固定相颗粒间空隙、色谱仪管路和连接头间空隙和检测器间隙。忽略后两项时，不被固定相滞留的组分，从进样至出现浓度最大值时流动相通过的体积称为死体积(deadvolume)，VM。〔Fc为柱尾载气体积流量即流速〕VM=tMFc3〕调整体积：扣除死体积后的保留体积。VR׳=VR–VM或VR׳=tR׳Fc10、相对保留值〔relativeretention〕在相同的操作条件下，待测组分与参比组分的调整保留值之比，用ri,s表示。色谱流出曲线的意义

色谱峰数=样品中单组份的最少个数；色谱保留值——定性依据；色谱峰高或面积——定量依据；色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标；色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。但当两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。因此，要从热力学和动力学〔流体力学〕两方面来研究色谱行为。二、色谱分离的基本原理1、分配系数(K)如前所述，分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次地分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次地吸附一脱附过程。这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数。它是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即K只与固定相和温度有关，与两相体积、柱管特性和所用仪器无关分配系数K的讨论试样一定时，K主要取决于固定相性质。在一定条件下，各种物质的K是不同的。K较小的组分在色谱分析中每次分配后在气相中的浓度较大，因此较早流出色谱柱。K较大的组分每次分配后在气相中浓度较小，因此较晚流出色谱柱。当分配次数足够多时，就能将具有不同K的组分分开。所以，我们可以认为，气相色谱法是利用不同的物质具有不同的K而进行分离的。而K的不同那么是由于各组分在固定相中的溶解度〔对气-液色谱〕或吸附能力〔对气-固色谱〕不同而造成的。2、分配比在一定温度和压力下，组份在两相间的分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量〔物质的量〕比，称为分配比。它反映了组分在柱中的迁移速率。又称保留因子、容量因子或容量比。其中Vm—流动相的体积Vs—固定相体积K与k的关系：称为相比，它也是反映色谱柱柱型特点的参数，即对特定的色谱柱，其空隙体积〔流动相体积〕与固定相体积〔吸附剂表面容量〕之比是固定的。对填充柱，=6~35；对毛细管柱，=50~1500。分配比k的求算：k也等于组分的校正保留时间与死时间的比值因此，k可通过实验测得。由此可知，k可表示出组分在柱中停留时间的长短。k越大，停留时间也就越长。k=(tR-tM)/tM=tR’/tM1、塔板理论描述色谱柱中组分在两相间的分配状况及评价色谱柱的分离效能的一种半经验式的理论。塔板理论将一根色谱柱当作一个由许多塔板组成的精馏塔，用塔板概念来描述组分在柱中的分配行为。塔板是从精馏中借用的，是一种半经验理论，但它成功地解释了色谱流出曲线呈正态分布。二、色谱分离的基本理论组分在每个塔板的流动相和固定相间进行分配，达成一次分配平衡。然后随着流动相按一个塔板、一个塔板的方式向前移动。经过多次分配平衡后，分配系数小的组分，先离开蒸馏塔〔色谱柱〕，分配系数大的组分后离开蒸馏塔〔色谱柱〕，从而使分配系数不同的组分彼此得到分离。当n=5时，即5个塔板体积的流动相进入柱中时，组分就开始从柱口流出。并且呈现先小后大的情况。以上是当塔板数为5时的情况，出现的峰形不对称，这是由于塔板数太少的原因。当塔板数大于50时，峰形就是对称的。在实际色谱柱中，n值很大〔约为106～109〕，所以色谱峰一般为正态分布。上述例子说明：分离效能的大小主要与塔板的数目有关，塔板数越多，分离效能越高。色谱柱的塔板数可以用理论塔板数和有效塔板数来表示。1〕理论塔板数n色谱柱的理论塔板数可由下式计算：式中：tR为某组分的保留时间；W1/2为某组分色谱峰的半宽度；W为色谱峰的峰底宽度。由式可知：柱子的理论塔板数与峰宽和保留时间有关。保留时间越大，峰越窄，理论塔板数就越多，柱效能也就越高。对于一个柱长固定为L的柱子，其理论塔板高度H为对于每一个塔板的高度，它越小，也表示分离效能越高。2〕理论塔板高度H组分在柱内每达成一次分配平衡所需要的柱长。3〕有效塔板数n有效和有效塔板高度H有效在以上计算理论塔板数的式子中使用的是保留时间，它包括了死时间，它与组分在柱内的分配无关，因此不能真正反映色谱柱的柱效。为此，引入了有效塔板数的概念。同理有效塔板高度为：有效2、速率理论——范弟姆特(VanDeemter)方程式速率理论认为，单个组分粒子在色谱柱内固定相和流动相间要发生千万次转移，加上分子扩散和运动途径等因素，它在柱内的运动是高度不规那么的，是随机的，在柱中随流动相前进的速度是不均一的。速率理论是在塔板理论的基础上，给出了影响塔板高度的因素：u为流动相线速度；A，B，C为常数，其中A—分别表示涡流扩散系数；B—分子扩散系数；C—传质阻力系数〔包括液相和固相传质阻力系数〕。该式从动力学角度很好地解释了影响板高〔柱效〕的各种因素，任何减少方程右边三项数值的方法，都可降低H，从而提高柱效。〔1〕涡流扩散项(A)在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份在迁移过程中随流动相不断改变方向，形成紊乱的“涡流〞：因填充物颗粒大小及填充的不均匀性——同一组分运行路线长短不同——流出时间不同——峰形展宽。展宽程度以A表示：A=2dp其中dp—填充物平均直径；—填充不均匀因子。可见，使用细粒的固定相并填充均匀可减小A，可提高柱效。对于空心毛细管柱，无涡流扩散，即A=0。〔2〕分子扩散项(B/u)纵向分子扩散是由于浓度梯度引起的。当样品被注入色谱柱时，它呈“塞子〞状分布。随着流动相的推进，“塞子〞因浓度梯度而向前后自发地扩散，使谱峰展宽。其大小为B=2D—称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散的阻碍情况；D—组分在流动相中的扩散系数。组份为气体或液体时，分别以Dg或Dl表示；〔3〕传质阻力项(Cu)因传质阻力的存在，使分配不能“瞬间〞达至平衡，因此产生峰形展宽。气相色谱以气体为流动相，液相色谱以液体为流动相，二者传质过程不完全相同。三、色谱柱的分离度相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽度平均值之比，用R表示。分离度可以用来作为衡量色谱峰分离效能的指标。①分离效果差，柱效低，选择性〔〕低②完全分离，柱效高，峰窄，选择性〔〕低③完全分离，选择性〔〕增加，柱效低，峰宽④完全分离，柱效高，选择性〔〕好对于峰形对称且满足正态分布的色谱峰：R=1,分离程度为98%；R=1.5，分离程度可达99.7%。所以R=1.5时，可认为两色谱峰已完全分开。第四节气相色谱定性和定量分析用物对照是基于在一定操作条件下，各组分保留时间是一定值的原理。具体做法：1〕分别以试样和标准物进样分析——各自的色谱图；2〕对照：如果试样中某峰的保留时间和标样中某峰重合，那么可初步确定试样中含有该物质。一、定性分析1、利用物对照法定性适合含多组分试样的分析极性固定相用保留值定性要求两次进样条件完全一致，这是比较困难的。而用ri,s定性，那么只要温度一定即可。具体做法：在样品和标准物中分别加入同一种基准物s，将样品的ri,s和标准物的ri,s相比较来确定样品中是否含有i组分。3、

据相对保留值ri,s

定性4、

利用加入纯物质增加峰高的方法定性通过在样品中加入标准物，看试样中哪个峰增加来确定。2、利用绝对保留值定性适合两种物质的比较1、定量分析的依据GC分析是根据检测器对待测物的响应信号〔峰高或峰面积〕与待测物的量成正比的原理进行定量的。即：mi=fiAi因此必须准确测定峰高h或峰面积A。二、定量分析峰高h的测量h峰面积的计算1、对称峰

峰高h与半峰宽的积；

实际A=1.065hW1/2；2、不对称峰

峰高与平均峰宽的积：A=1/2h(W+W)在同一分析中，只能使用同一种近似测量的方法。1〕外标法〔标准曲线法〕取纯物质配制得到一系列不同浓度的标准溶液，分别取一定体积的标准溶液注入色谱仪，得到相应的色谱峰，根据Ai〔面积〕对Xi〔浓度〕作图得标准曲线。外标法适于日常分析和大批量同类样品分析；但进样量和操作条件必须严格控制。2、定量分析方法2〕内标法准确称取样品m，加入一定量的某纯物质作内标物ms，然后进行色谱分析。根据待测组分和内标物的峰面积及内标物的重量就可求得待测组分的含量：3〕归一化法要求试样中所有n个组分全部流出色谱柱，并全部出峰！那么其中组分i的含量为：f为校正因子；A为其峰面积。此法简单、准确，操作条件影响小。但应用不多。因为不知道试样有多少组分？应该出多少峰才叫全部出峰？例：用气相色谱法〔TCD〕分析卤代烃混合物。在同样条件下，测得标准样和未知样数据如下表，求未知试样中各组分的质量百分含量。组分标准样未知样进样量（g）峰面积（标尺单位）m2峰面积（标尺单位）m2氯乙烷氯丙烷氯戊烷氯庚烷0.400.400.400.40110.0112.287.378.482.3无峰125.2180.0解：未知样总量：m=0.2993+0.5737+0.9184g氯戊烷%=32.03%氯庚烷%=51.27%二、载气及其流速的选择第五节气相色谱条件的选择一、色谱柱的选择柱长增加，R增大，但分析时间延长，填充柱通常为1～3m。确保分离效率的前提下，尽量选择较短的分离柱。内径增大，增加分离的试样量，但纵向扩散路径增加，柱效降低，填充柱内径一般为3～6mm。N27~10cm/sH210~12cm/s三、柱温的选择柱温对分离效果和分析速度产生影响。

柱温降低，分离度增加柱温升高，柱效增大使用时除了考虑最高温度和最低温度外，以比试样中各组分的平均沸点低20-30℃为宜；宽沸程混合物，选用程序升温法。

最高温度：固定液最高使用温度最低温度：一般必须高于固定液的熔点四、进样条件的选择1、气化温度选择在选择的气化温度下，应能使样品瞬间气化而不分解。温度高以于柱温30-70℃为宜。2、进样量μL，气体0.1-10mL。3、进样速度进样速度必须很快，速度慢易产生脱尾的现象。第六节气相色谱仪的维护与保养一、气路系统二、进样系统三、色谱柱的维护四、检测系统五、温度控制系统六、信号记录系统ILOQTVY#%*-0358adgilnqsvxACFHKMPSUXZ$&)+2479cehjmpruwzBEGJLOQTVY!%(-1368bdgilnqtvyADFIKNPSUXZ$*)0257acfhkmpruxzCEHJMORTWY!%(+1469begjloqtvyBDGILNQSVX#$*)0358adfiknpsuxzCFHKMPRUWZ!&(+1479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358adgilnqsvxACFHKMPSUXZ$&)+2479cehkmpruwzBEGJLOQTWY!%(-1368bdgiloqtvyADFIKNPSUX#$*)0257acfhkmpsuxzCEHJMORTWY!&(+1469begjloqtwyBDGILNQSVX#$*-0358adfiknpsuxACFHKMPRUWZ!&(+1479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358bdgilnqsvxACFHKNPSUXZ$&)+2479cfhkmpruwzBEGJLORTWY!%(-1368bdgjloqtvyADFIKNPSVX#$*)0257acfhknpsuxzCEHJMORTWZ!&(+1469begjlortwyBDGILNQSVX#$*-0358adfiknpsuxACFHKMPRUWZ!&(+2479cehjmortwyBEGJLOQTVY##$*)0257acfiknpsuxzCEHJMORUWZ!&(+1469begjmortwyBDGILNQSVY#%*-0358adfiknpsvxACFHKMPRUWZ!&)+2479cehjmortwzBEGJLOQTVY#%*-1368bdgilnqsvxADFIKNPSUXZ$&)+257acfhkmpruwzBEHJMORTWY!%(-1369begjloqtvyADFILNQSVX#$*)0257adfiknpsuxzCEHJMPRUWZ!&(+1469begjmortwyBDGILNQSVY#%*-0358adfiknqsvxACFHKMPRUWZ$&)+2479cehjmoruwzBEGJLOQTVY#%(-1368bdgilnqsvyADFIKNPSUXZ$&)0257acfhkmpruwzCEHJMORTWY!%(-1469begjloqtvyADGILNQSVX#$*)0257adfiknpsuxzCEHJMPRUWZ!&(+1469behjmortwyBDGILNQTVY#%*-0358adfilnqsvxACFHKMPRUXZ$&)+2479cehjmpruwzBEGJLOQTVY!%(-1368bdgilnqtvyADFIKNPSUXZ$*)0257acfhkmpruwzCEHJMORTWY!%(-1469begjloqtvyADGILNQSVX#$*)0258adfiknpsuxzCEHKMPRUWZ!&(+1469cehjmortwyBDGILOQTVY#%*-0358adgfhkmpsuxzCEHJMORTWY!%(+1469begjloqtvyBDGILNQSVX#$*)0358adfiknpsuxzCFHKMPRUWZ!&(+1479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358bdgilnqsvxACFHKNPSUXZ$&)+2479cfhkmpruwzBEGJLORTWY!%(-1368bdgjloqtvyADFIKNPSUX#$*)0257acfhkmpsuxzCEHJMORTWY!&(+1469begjloqtwyBDGILNQSVX#$*-0358adfiknpsuxACFHKMPRUWZ!&(+2479cehjmortwyBEGJLOQTVY#%*-0368bdgilnqsvxACFIKNPSUXZ$&)+247acfhkmpruwzBEGJLORTWY!%(-1368bdgjloqtvyADFIKNPSVX#$*)0257acfhknpsuxzCEHJMORTWZ!&(+1469begjlortwyBDGILNQSVX#%*-0358adfiknpsvxACFHKMPRUWZ!&)+2479cehjmortwzBEGJLOQTVY#%*-1368bdgilnqsvxACFIKNPORUWZ!&(+1469begjmortwyBDGILNQSVY#%*-0358adfiknqsvxACFHKMPRUWZ$&)+2479cehjmoruwzBEGJLOQTVY#%(-1368bdgilnqsvyADFIKNPSUXZ$&)+257acfhkmpruwzBEHJMORTWY!%(-1369begjloqtvyADFILNQSVX#$*)0257adfiknpsuxzCEHJMPRUWZ!&(+1469behjmortwyBDGILNQTVY#%*-0358adfilnqsvxACFHKMPRUXZ$&)+2479cehjmpruwzBEGJLOQTVY#%(-1368bdgilnqsvyADFIKNPSUXZ$&)0257acfhkmpruwzCEHJMORTWY!%(-1469begjloqtvyADGILNQSVX#$*)0258adfiknpsuxzCEHKMPRUWZ!&(+1469cehjmortwyBDGILOQTVY#%*-0358adfilnqsvxACCEHJMORTWY!%(+1469begjloqtvyBDGILNQSVX#$*)0358adfiknpsuxzCFHKMPRUWZ!&(+1479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358bdgilnqsvxACFHKMPSUXZ$&)+2479cehkmpruwzBEGJLOQTWY!%(-1368bdgiloqtvyADFIKNPSUX#$*)0257acfhkmpsuxzCEHJMORTWY!&(+1469begjloqtwyBDGILNQSVX#$*-0358adfiknpsuxACFHKMPRUWZ!&(+2479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358bdgilnqsvxACFHKNPSUXZ$&)(+1469begjlortwyBDGILNQSVX#%*-0358adfiknpsvxACFHKMPRUWZ!&)+2479cehjmortwzBEGJLOQTVY#%*-0368bdgilnqsvxACFIKNPSUXZ$&)+247acfhkmpruwzBEGJMORTWY!%(-1368begjloqtvyADFIKNQSVX#$*)0257acfiknpsuxzCEHJMORUWZ!&(+1469begjmortwyBDGILNQSVY#%*-0358adfiknqsvxACFHKMPRUWZ!&)+2479cbegjloqtvyADFILNQSVX#$*)0257adfiknpsuxzCEHJMPRUWZ!&(+1469behjmortwyBDGILNQTVY#%*-0358adfilnqsvxACFHKMPRUXZ$&)+2479cehjmoruwzBEGJLOQTVY#%(-1368bdgilnqsvyADFIKNPSUXZ$&)0257acfhkmpruwzCEHJMORTWY!%(-1469begjloqtvyADGILNQSVX#$*)0258adfiknpsuxzCEHKMPRUWZ!&(+1469cehjmortwyBDGILOQTVY#%*-0358adfilnqsvxACFHKMPRUXZ$&)(+1469begjloqtvyBDGILNQSVX#$*)0358adfiknpsuxzCFHKMPRUWZ!&(+1479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358bdgilnqsvxACFHKMPSUXZ$&)+2479cehkmpruwzBEGJLOQTWY!%(-1368bdgiloqtvyADFIKNPSUX#$*)0257acfhkmpsuxzCEHJMORTWY!&(+1469begjloqtwyBDGILNQSVX#$*-0358adfiknpsuxACFHKMPRUWZ!&(+1479cehjmortwyBDGJLOQTVY#%*-0358bdgilnqsvxACFHKNPSUXZ$&)+21469begjlortwyBDGILN