细菌的革兰氏染色课件

细菌的革兰氏染色一、目的：学习细菌的革兰氏染色法。细菌的革兰氏染色一、目的：学习细菌的革兰氏染色法。二、原理革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。二、原理革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家所创立的。革兰阳性菌细胞壁的化学组成肽聚糖（15-50层）细胞膜（双层脂质

蛋白嵌镶）脂质蛋白质β-1,4糖苷键N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰胞壁酸四肽链五肽桥革兰阳性菌细胞壁的化学组成肽聚糖（15-50层）细胞膜（双层革兰阴性菌细胞壁的化学组成外膜肽聚糖（1-3层）细胞膜脂质蛋白质脂质双层脂蛋白脂多糖革兰阴性菌细胞壁的化学组成外膜肽聚糖（1-3层）细胞膜脂质蛋革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁区别要点革兰阳性菌革兰阴性菌

肽聚糖组成聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥聚糖骨架、四肽侧链

肽聚糖层数可多达50层仅1-2层

肽聚糖含量占细胞壁干重50%-80%占细胞壁干重5%-10%

强度较坚韧，三维立体结构较疏松，二维平面结构

磷壁酸有无

外膜无有

青霉素、溶菌酶敏感不敏感革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁区别要点G+菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网格结构紧密，含脂量低，当被酒精脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小以至关闭，从而阻止了不溶性结晶紫-碘复合物的逸出，还是原来的颜色；G¯细菌的细胞壁肽聚糖层较薄，含量较少，而脂类含量高，当酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁透性增大，结晶紫-碘复合物也随之被抽提出来，故G¯细菌细菌菌体呈复染液的红色。G+菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网格结构紧密，含脂量低，当1234？结晶紫碘液酒精复红1234？结晶紫三、实验器材

1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红、蒸馏水、乙醚-乙醇混合液、香柏油。3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。三、实验器材

1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌涂片，做成浓菌液，注意取菌不要太多。（2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。四、实验方法：（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按（4）结晶紫染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。（5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。（4）结晶紫染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。（7）复染：滴加复红复染3-5min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。（8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。（9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至细菌的革兰氏染色课件革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌（10)实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许乙醚-乙醇混合液（二甲苯）将镜头擦2-3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中。②观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。（10)实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净五、注意事项1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后（冲反面），应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。五、注意事项1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，欢迎批评指正！谢谢！欢迎批评指正！谢谢！细菌的革兰氏染色一、目的：学习细菌的革兰氏染色法。细菌的革兰氏染色一、目的：学习细菌的革兰氏染色法。二、原理革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。二、原理革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家所创立的。革兰阳性菌细胞壁的化学组成肽聚糖（15-50层）细胞膜（双层脂质

蛋白嵌镶）脂质蛋白质β-1,4糖苷键N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰胞壁酸四肽链五肽桥革兰阳性菌细胞壁的化学组成肽聚糖（15-50层）细胞膜（双层革兰阴性菌细胞壁的化学组成外膜肽聚糖（1-3层）细胞膜脂质蛋白质脂质双层脂蛋白脂多糖革兰阴性菌细胞壁的化学组成外膜肽聚糖（1-3层）细胞膜脂质蛋革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁区别要点革兰阳性菌革兰阴性菌

肽聚糖组成聚糖骨架、四肽侧链、五肽交联桥聚糖骨架、四肽侧链

肽聚糖层数可多达50层仅1-2层

肽聚糖含量占细胞壁干重50%-80%占细胞壁干重5%-10%

强度较坚韧，三维立体结构较疏松，二维平面结构

磷壁酸有无

外膜无有

青霉素、溶菌酶敏感不敏感革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁区别要点G+菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网格结构紧密，含脂量低，当被酒精脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小以至关闭，从而阻止了不溶性结晶紫-碘复合物的逸出，还是原来的颜色；G¯细菌的细胞壁肽聚糖层较薄，含量较少，而脂类含量高，当酒精脱色时，脂类物质溶解，细胞壁透性增大，结晶紫-碘复合物也随之被抽提出来，故G¯细菌细菌菌体呈复染液的红色。G+菌细胞壁较厚，肽聚糖含量较高，网格结构紧密，含脂量低，当1234？结晶紫碘液酒精复红1234？结晶紫三、实验器材

1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红、蒸馏水、乙醚-乙醇混合液、香柏油。3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。三、实验器材

1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌涂片，做成浓菌液，注意取菌不要太多。（2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。四、实验方法：（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按（4）结晶紫染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。（5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。（4）结晶紫染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，加适量（以盖满（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。（7）复染：滴加复红复染3-5min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。（8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。（9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20—25s至细菌的革兰氏染色课件革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性杆菌（10)实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许乙醚-乙醇混合液（二甲苯）将镜头擦2-3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。将显微镜小心轻拿，按号放入显微镜柜中。②观察后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，放入回收容器内。（10)实验完毕后的处理：①将浸过