杀虫剂室内生物测定课件

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杀虫剂生物测定

（bioassayofinsecticide）

度量杀虫剂对昆虫（包括螨类和昆虫纲以外的小动物）产生效应大小的农药生物测定。通过比较不同杀虫剂的剂量或浓度对供测昆虫产生效应强度的方法，来评价两种或两种以上杀虫剂的相对效力。

——《中国农业百科全书—农药卷》1杀虫剂生物测定

（bioassayofinsec2第二章杀虫剂室内生物测定一、杀虫剂室内生物测定的一般原则1、供试昆虫尽量一致虫态、虫龄和生理上尽可能一致2、控制环境因素尽量一致温度、湿度、光照对杀虫剂和昆虫的生理状态都有影响2第二章杀虫剂室内生物测定一、杀虫剂室内生物测定的一般3一、杀虫剂室内生物测定的原则3、必须设立对照，一般至少设2种对照空白对照(溶剂对照)标准药剂对照3一、杀虫剂室内生物测定的原则3、必须设立对照，一般至少设24一、杀虫剂室内生物测定的原则4、必须设重复生物测定的测试的对象不是昆虫个体，而是群体。一般重复至少4次，每个重复20-50头试虫。(田间试验重复3~5次)。4一、杀虫剂室内生物测定的原则4、必须设重复5二、影响杀虫剂毒力测定的因素1、杀虫剂：一般用原药，纯度95%以上，用丙酮配制。许多杀虫剂都有同分异构体，测定时应用纯的化合物。避免农药加工中的助剂对生物测定的影响。5二、影响杀虫剂毒力测定的因素1、杀虫剂：6二、影响杀虫剂毒力测定的因素2、昆虫2-1、昆虫的发育阶段一般杀虫剂对卵几乎都没有毒性：卵壳的特殊保护作用蛹一般对杀虫剂也不太敏感成虫的性别、营养及生理条件对其敏感性影响较大。对幼虫而言，低龄幼虫对杀虫剂比较敏感。6二、影响杀虫剂毒力测定的因素2、昆虫7二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-2、昆虫的性别与生殖状态性别的影响主要表现在成虫期，在毒力测定中，对多数昆虫，一般都规定只用一个性别。雌虫往往耐药性更强。雌虫产卵后，对杀虫剂变得敏感些。这可能与体重、脂肪含量和代谢能力有关。7二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-2、昆虫的性别与生殖状态8二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-3、昆虫的生理因素越冬虫：耐药性较高体内脂肪含量影响敏感性新陈代谢率越高，呼吸率越高，对杀虫剂的敏感性越大。8二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-3、昆虫的生理因素9二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-4、昆虫的种群异质性A、自然耐药力B、健壮耐药力C、杀虫剂的抗药性在毒力测定中，应选择异质性小的种群。9二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-4、昆虫的种群异质性10二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-1、温度正温度系数、负温度系数（20~30℃）温度的影响：穿透作用、解毒代谢处理前低温处理果蝇、蜚蠊等，可提高对DDT的抗性，这与低温饲养中形成的不饱和脂肪有关。10二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响11二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-1、温度处理后的低温可使死亡增加，但杀死昆虫的时间延长。30℃以上的高温也能使死亡率增加。11二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响12二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-2、湿度与水分相对湿度对熏蒸剂的影响较大湿度对昆虫引诱剂及拒避剂有显著影响。12二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响13二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-3、光照光照对毒力测定的影响是间接的。在光照条件下，家蝇对DDT药膜的死亡率较高，原因是光照增加了其活动性。13二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响14二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-4、营养与饥饿有的营养物质可增加昆虫体内的解毒酶对胃毒剂的测定，饥饿是必要的。饥饿可增加敏感性。14二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响15三、供试昆虫的处理室内毒力测定原则上用室内种群对野外采集的种群，尽量选用一致的个体。(并在室内饲养1-2代)15三、供试昆虫的处理室内毒力测定原则上用室内种群16三、供试昆虫的处理1、一般移取法对棉铃虫等大个体昆虫，可用镊子对蚜虫、红蜘蛛等，可用毛笔，注意刺吸式口器的口针。

16三、供试昆虫的处理1、一般移取法17三、供试昆虫的处理2、趋光法家蝇、果蝇等都有趋光性。17三、供试昆虫的处理2、趋光法18三、供试昆虫的处理3、麻醉法3-1、二氧化碳法；3-2、挥发蒸气法：乙醚、三氯甲烷与乙醚（1：1）等，家蝇的麻醉时间一般在4分钟以内。3-3、冷冻法：适于家蝇、蜚蠊等试虫，一般分两步，先在5℃下冷冻10分钟，再在0℃下冷冻2-3分钟。18三、供试昆虫的处理3、麻醉法19三、供试昆虫的处理4、吸虫法：赤拟谷盗、米象等，用真空管等吸虫。19三、供试昆虫的处理4、吸虫法：20三、供试昆虫的处理5、结果检查需要数清活动力强试虫时，可把活虫烘死后再数。对红蜘蛛等可采用下列方法：局部高温法。放与60W的灯罩下烘，使活虫爬走。20三、供试昆虫的处理5、结果检查21毒力测定的仪器1.喷粉器1）喷粉箱：喷粉箱(是一套四个1×1×1英尺见方的木箱，除了最上一层的顶部有盖，最下一层的底部有底，其他均只有四周的框壁、因此叠放起来，彼此相通，也就是由上层下降的粉粒可以一直沉到下面。在每一层的上部放一块细铜纱，将粉剂放在第一层铜纱上，用刷笔刷过，细的粉粒即由此通过而下降。在底层中可以用一转盘，将要处理的东西放在转盘上，由于转盘的转动，可见使粉粒沉降的分亦更为均匀。21毒力测定的仪器1）喷粉箱：喷粉箱(是一套四个1×1×1222）喷粉玻璃钟罩：用直径27-33cm的玻璃钟罩放在一个中心有孔的方形或圆形短足的木台上，将定量药粉盛装于中部有球形膨大的玻璃管中，将吹粉球上的管连上橡皮管，从中心孔插入钟罩内，将定量药粉吹入钟罩内。粉剂由喷口向上喷出，然后下降。待罩内药粉沉降一定时间（10-15min）后，取开钟罩。毒力测定的仪器1.喷粉器222）喷粉玻璃钟罩：用直径27-33cm的玻璃钟罩放在一233）转盘沉淀喷粉器：原理同上。两个改进（1）在喷洒接受粉剂的表面上，加一玻璃板；喷粉之后，粉剂开始降落时，不是立即落在被处理物件上，而是落在玻璃板上。由于先沉淀的粉粒都是比较重大的颗粒，因而在沉降一定时间后(1—2分钟)，将玻璃板抽出，使细小均匀而后来沉降下来的粉粒落在被处理的物件上。(2)喷粉桌的中央作为转盘，可以徐徐旋转(每分钟8-12转)，这样可以校正了喷出不完全垂直的不均匀情况。毒力测定的仪器1.喷粉器233）转盘沉淀喷粉器：原理同上。两个改进（1）在喷洒接受粉244）真空喷粉（抽气喷粉钟罩）：是采用带塞玻璃钟罩，按放在垫有橡皮垫和接有通气管的平台上。在玻璃钟罩顶端开口处，复以代有小管的金属盖，小管突出盖面约1cm，并用橡皮塞塞住。目标昆虫及植物体放入钟罩内，将称好的药粉放于金属小盘内，然后抽气，当减压到240mmHg时停止减压，迅速揭开金属小盘上的塞子。借空气压力把药粉撒开，使药粉沉降到被测目标昆虫及植物体上，然后取出被测物体，置于正常的环境条件下，于规定时间内观察记载试虫的死亡情况，计算死亡率。毒力测定的仪器1.喷粉器244）真空喷粉（抽气喷粉钟罩）：是采用带塞玻璃钟罩，按放在251）轻便手提喷塔：由龚坤元等（1962）设计的，是由卵形玻璃喷头和喷塔两部分组成。卵形玻璃喷头，是喷雾设备的主要部分，也是喷雾质量好坏的关键，由颈、身腔、水管、气管、柄组成。喷塔：高40cm，直径22cm。喷雾筒下的底盘稍大于喷雾筒，底盘内放入目标昆虫，如活动性较强的昆虫可制作小纱笼盛装，然后在卵形喷头内放入定量药液，喷雾处理沉降一定时间后取出，经一定时间检查死亡情况，计算死亡率。毒力测定的仪器2.喷雾器卵形玻璃喷头I、是轻便手提喷雾塔；II、是扇形虫笼及喷塔底盘

251）轻便手提喷塔：毒力测定的仪器卵形玻璃喷头I、是轻便手262）沉降喷雾塔

：是一个2m高的喷筒，在上端中央有孔，装雾化喷头，下部有一木盒（或铁皮盒），中央为接受台，放入被测目标昆虫，在液管处吸进定量的药液，用压缩空气使药液喷出，沉降5min。喷头可以用一般的喷雾器，也可以用雾化器代替。雾化器是对液体不加压力，而单凭气流来雾化的喷头。雾化器是两个同轴管，一个小管（液管）套在大管（气管）内，液管内有药液流出，被气管的气流所打碎而喷出。

毒力测定的仪器2.喷雾器I-沉降喷雾塔；II-雾化器

262）沉降喷雾塔：毒力测定的仪器I-沉降喷雾塔；II-雾273）颇特（potter）喷雾塔：颇特喷雾塔分雾化喷头及喷座两部分。它的喷头是用加压形成快速气流来雾化液体，其原理是靠喷出快速气流，将药液带出，并同时加以分散雾化。它是由两个同轴管形成，内管是液管，外管是气流通过的管道。当压缩空气使气流快速从外管喷口喷出，内管的药液随着被吸出，并同时在喷口处为气流所打碎，成为细滴（雾化）。毒力测定的仪器2.喷雾器颇特喷雾塔的喷头

273）颇特（potter）喷雾塔：毒力测定的仪器颇特喷雾28喷雾塔是一个13.5in高的金属圆筒，上接一圆锥，上部直径为6.25in，下部直径为4.75in，是固定在一个四边有玻璃的金属架内。喷雾筒上端中央为雾化喷头，下端是喷雾圆台，可以上下调节，也可以调节雾化喷头与喷雾台之间的距离，是决定雾滴分布的一个因素。喷雾时，把目标昆虫放在纱笼内或玻皿内，放在喷雾台上，固定喷雾圆台的高度，固定药液用量，就可获得十分均匀的喷布。

28喷雾塔是一个13.5in高的金属圆筒，上接一圆锥，上部直294）气雾风道

：它由五个主要部件组成：中空的钢质长方体（0.25m×0.46m×1.8m）底座；一对钢质空气柜（0.46m×0.46m×0.46m）和空气柜相连接的直径0.148m的铝质圆筒状风道以及一个控制台。底座左端有一调速鼓风机，右端封闭。鼓风机将空气吹到右边空气柜，经风道进入左边空气柜排出，而左边空气柜和实验室排风系统相连。喷头安在风道的右边，喷头的喷嘴可以任意更换，喷嘴直径0.045mm。装试虫的笼子放在风道左端。毒力测定的仪器2.喷雾器气雾风道

294）气雾风道：毒力测定的仪器气雾风道30毒力测定的仪器2.喷雾器5）Hoskin横筒喷雾器：由三节1英尺直径的圆筒（每节长1.2英尺）所组成，两端加盖，盖中央均有直径1英寸的小孔。一端为喷雾入口，一端为空气出口。全部横筒斜放在架上，喷孔一端比另一端高2英寸。喷雾器下端有一开孔(直径3.5英寸），为雾点下沉开口。下部放要喷洒的物件。可使用一般喷雾器喷头，也可改装雾化器作喷头，用一定量的气压来喷洒。Hoskin横筒喷雾器30毒力测定的仪器5）Hoskin横筒喷雾器：Hoskin31毒力测定的仪器2.喷雾器6）转盘沉淀喷雾器：与转盘沉淀喷粉器结构相同，只是将喷粉器改为喷雾器。31毒力测定的仪器6）转盘沉淀喷雾器：32毒力测定的仪器2.喷雾器7）Webb喷雾器：主要是为测定残效（喷洒成药膜）而设计的，也可以为一般喷雾使用。主要装置是一个方形喷雾箱（1.5*1.5*1.5英尺），下面是一个沉降筒（直径1英尺）。喷雾箱上端开口装喷头，下面有一大孔，直径与沉降筒相同。孔上有一块可抽动的玻璃板。沉降筒高1米，下面装一木箱，抽屉内放需喷洒的物件。由于喷雾箱是密闭的，药剂喷洒时，雾点在箱内旋转即能均匀分布，抽开玻璃板，雾点均匀下降。雾化器也可作为其喷头使用。Webb喷雾器32毒力测定的仪器7）Webb喷雾器：Webb喷雾器33四、杀虫剂毒力测定方法1、胃毒剂毒力测定基本原理：使杀虫剂随食物一起被目标昆虫吞食进入消化道而发挥毒杀作用。根据取食量的差异分为无限取食法和定量取食法。33四、杀虫剂毒力测定方法1、胃毒剂毒力测定34四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法药量不易掌握，有拒食效应时更难获得满意结果1-1-1饲料混药喂虫法拟谷盗、米象和麦蛾等仓库害虫；以药剂与食物的比例作为含药浓度的表示方法，一般5-7天检查死亡情况。34四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法35四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法1-1-2培养基混药法人工含毒培养基，果蝇。其它方法：种子拌药法、糖浆混药法、毒耳法。35四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法36四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法能准确地测定吞食的剂量1-2-1叶片夹毒法（sandwichmethod）取食量大的咀嚼式口器昆虫按取食多少排列，分为生存组、死亡组和中间组，按中间组计算；36四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法37四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法1-2-2液滴饲喂法（feedingofmeasureddrop）舐食性昆虫，如家蝇、果蝇、蜜蜂等，用微量注射器形成小的液滴(0.01~0.001ml)，直接饲喂昆虫。37四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法38Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity1、适应昆虫鳞翅目幼虫，一般三龄以上，饥饿4~8小时，选取50头，电子天平称重，计算平均体重。2、药剂：原药，水溶性原药先用蒸馏水溶解，再用丙酮等有机溶剂稀释；水不溶性原药选用丙酮（或乙醇，二甲基亚砜等）按等比（或等差）稀释成5-7个浓度。38Theleafsandwichtestfori39Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity3、夹毒叶片的制做用直径1厘米的打孔器打叶碟，放入培养皿中，保湿。用点滴器从低浓度到高浓度每叶点滴1~2µL药液，溶剂挥发后，和另一片涂有淀粉糊的叶碟对合制成夹毒叶片，放入12孔培养板的孔内。每处理4个重复，每重复至少12个含毒叶片。39Theleafsandwichtestfori40Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity4、药剂处理每孔接一头试虫，于正常条件下培养，接虫2~4小时后，待试虫取食完含毒叶片后，（未取食完含毒叶片的淘汰掉）。加入干净饲料继续观察。5、调查：24小时后（根据实验要求和目的可适当调节时间），调查死虫数和活虫数。40Theleafsandwichtestfori41Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity6、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50，95%置信限，相关系数等。剂量以µg（药剂）/g（虫）表示。41Theleafsandwichtestfori42四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定用较高浓度（或剂量）的杀虫剂施于虫体的体表，使虫体充分接触药剂而发挥触杀作用。2-1喷粉法及喷雾法Potter喷雾塔真空喷粉器沉降喷雾塔42四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定43四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-2浸渍法常用于有效化合物筛选试验（screentest），被联合国粮农组织（FAO）推荐为蚜虫抗药性的标准测定方法。此法不是单纯的触杀毒力。43四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定44四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-3玻片浸渍法（slide-dipmethod）此法为FAO推荐为螨类抗药性的标准测定方法。44四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定45TheImmersiontestforinsecticideactivity1、靶标昆虫鳞翅目幼虫，同翅目的蚜虫类、叶蝉类、飞虱类，鞘翅目成虫如马铃薯瓢虫，缨翅目昆虫如蓟马等。2、药剂水溶性药剂直接用水溶解、稀释，其它药剂选用合适的有机溶剂（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有适量表面活性如0.1%吐温80（或0.1%Triton-X100）的水溶液稀释。每浓度药液量不少于50mL。45TheImmersiontestforinsec46TheImmersiontestforinsecticideactivity3、药剂处理将靶标昆虫浸入药液中5~10s后，用滤纸吸取多余药液，将试虫转移至正常条件下饲养，每处理4次重复，每重复10~20头。并设不含药剂的相应的有机溶剂处理作为对照。46TheImmersiontestforinsec47TheImmersiontestforinsecticideactivity4、调查：24小时后（根据实验要求和目的可适当调节时间），调查死虫数和活虫数。5、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50，95%置信限，相关系数等。47TheImmersiontestforinsec48四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-4药膜法（residualfilms）将一定量的杀虫剂，采用浸渍、点滴、喷洒等方法施于物体表面，形成一个均匀的药膜，然后放入一定量的供试目标昆虫，让其爬行接触一定时间后，再移到正常的环境条件下，于规定时间内观察试虫的中毒死亡反死，计算击倒率或死亡率。48四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定49四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-4药膜法（residualfilms）A、滤纸药膜法B、容器药膜法C、蜡纸粉膜法49四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定50四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-5点滴法（topicalapplication）点滴法是将一定量的药液点滴到供试目标昆虫体壁的一定部位，来测定杀虫药剂穿透表皮而引起昆虫中毒致死的触杀毒力。此法是杀虫剂触杀毒力测定中最准确的方法。50四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定51四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-5点滴法（topicalapplication）点滴部位一般为胸部背板家蝇成虫：1µL/头菜青虫、玉米螟、棉铃虫三龄虫0.1µL/头五龄虫0.5~1µL/头蚜虫一般0.03~0.05µL/头.51四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定52四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定A、微量点滴仪52四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定53四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定B、电动微量点滴器53四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定54四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定C、毛细管微量点滴器54四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定55Thetopicalapplicationtest(点滴法)forinsecticidecontactactivity1、靶标试虫：鳞翅目3-4龄幼虫，同翅目成虫或若虫，点滴时可用乙醚或CO2麻醉处理。2、杀虫剂：原药，水溶性原药先用蒸馏水溶解，再用丙酮等有机溶剂稀释；水不溶性原药选用丙酮（或乙醇，二甲基亚砜等）按等比（或等差）稀释成5-7个浓度。55Thetopicalapplicationtest56Thetopicalapplicationtest(点滴法)forinsecticidecontactactivity3、药剂处理：用毛笔挑取试虫于培养皿中，用（毛细管）点滴器逐头点滴，鳞翅目幼虫点前胸背板，药量一般0.5~1µL；蚜虫、叶蝉等滴于腹部，药量一般0.02~0.1µL。点滴完后放正常条件下饲养。重复：每处理4次重复，每重复至少15虫对照：以对应的有机溶剂为对照。对照死亡率不得超过20%。56Thetopicalapplicationtest57Thetopicalapplicationtest(点滴法)forinsecticidecontactactivity4、结果检查：24（可根据情况调节）小时后检查死虫数和活虫数（死亡标准需注明）。5、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50（LC50），95%置信限，相关系数等。57Thetopicalapplicationtest58四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定熏蒸剂的药量计算以单位容积内的药剂用量来表示（mg/L或ml/L）温度越高，杀虫剂对目标昆虫的熏蒸毒力越强，昆虫的呼吸作用也越强。测定条件：一般25℃

，相对湿度50%58四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定59四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定A、二重皿法59四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定60四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定B、广口瓶法60四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定61四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定Ｃ、药纸熏蒸法61四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定62四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定Ｄ、三角瓶法62四、杀虫剂毒力测定方法3熏蒸剂毒力测定63Erlenmeyerflasktest(锥形瓶法)forinsecticidefumigantactivity1、靶标昆虫鳞翅目幼虫，同翅目的蚜虫类、叶蝉类、飞虱类、鞘翅目成虫（一般羽化2周后的成虫）如玉米象、赤拟谷盗等2、药剂：熏蒸剂宜使用原药，浓度以mg/L计。63Erlenmeyerflasktest(锥形瓶法)64Erlenmeyerflasktest(锥形瓶法)forinsecticidefumigantactivity3、药剂处理：准备500mL的锥形瓶，将试虫笼悬挂于瓶的中部，按预定的剂量加入供试药剂于瓶底，薰蒸处理1h后将试虫转移到正常条件下饲养。每处理4次重复，每重复不少于50头试虫，设不含药剂的处理作为对照。4、调查：一般24（根据试验要求和药剂特点可适当调节）小时调查试虫死死情况。数据处理同其它方法。64Erlenmeyerflasktest(锥形瓶法)65四、杀虫剂毒力测定方法4内吸作用（systemicaction）毒力测定A、根系内吸法B、叶部内吸法C、茎部内吸法D、种子内吸法65四、杀虫剂毒力测定方法4内吸作用（systemica66四、杀虫剂毒力测定方法5、忌避剂毒力测定将定量药剂均匀地施于植株上或部分植株上，再接入一定量的目标昆虫，置于正常环境中，定期观察目标昆虫的取食情况，用坐标纸法测量被昆虫取食面积。66四、杀虫剂毒力测定方法5、忌避剂毒力测定67四、杀虫剂毒力测定方法5、忌避剂毒力测定67四、杀虫剂毒力测定方法5、忌避剂毒力测定68四、杀虫剂毒力测定方法6、杀卵活性测定：Thedippingtestforinsecticideovicidalactivity(1)靶标昆虫：一般为鳞翅目的初产卵(2)药剂：水溶性药剂直接用水溶解、稀释，其它药剂选用合适的有机溶剂（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有适量表面活性如0.1%吐温80（或0.1%Triton-X100）的水溶液稀释。每浓度药液量不少于50mL。68四、杀虫剂毒力测定方法6、杀卵活性测定：Thedipp69Thedippingtestforinsecticideovicidalactivity

(3)卵卡制作：取长30mm宽20mm白色硬板，以双面胶粘贴初产卵，每卡卵量不低于30粒，对不适于制作卵卡的试虫，可直接剪取适宜大小的卵块或者对有靶标卵的基质直接进行处理。(4)药剂处理：将卵卡浸入药液5~10s后，转移至正常条件下培养。每处理4次重复。(5)数据处理，同上。69Thedippingtestforinsecti70本章重点一、杀虫剂毒力测定的一般原理二、影响杀虫剂毒力测定的主要因子；三、杀虫剂毒力测定的常用方法；70本章重点一、杀虫剂毒力测定的一般原理71

杀虫剂生物测定

（bioassayofinsecticide）

度量杀虫剂对昆虫（包括螨类和昆虫纲以外的小动物）产生效应大小的农药生物测定。通过比较不同杀虫剂的剂量或浓度对供测昆虫产生效应强度的方法，来评价两种或两种以上杀虫剂的相对效力。

——《中国农业百科全书—农药卷》1杀虫剂生物测定

（bioassayofinsec72第二章杀虫剂室内生物测定一、杀虫剂室内生物测定的一般原则1、供试昆虫尽量一致虫态、虫龄和生理上尽可能一致2、控制环境因素尽量一致温度、湿度、光照对杀虫剂和昆虫的生理状态都有影响2第二章杀虫剂室内生物测定一、杀虫剂室内生物测定的一般73一、杀虫剂室内生物测定的原则3、必须设立对照，一般至少设2种对照空白对照(溶剂对照)标准药剂对照3一、杀虫剂室内生物测定的原则3、必须设立对照，一般至少设274一、杀虫剂室内生物测定的原则4、必须设重复生物测定的测试的对象不是昆虫个体，而是群体。一般重复至少4次，每个重复20-50头试虫。(田间试验重复3~5次)。4一、杀虫剂室内生物测定的原则4、必须设重复75二、影响杀虫剂毒力测定的因素1、杀虫剂：一般用原药，纯度95%以上，用丙酮配制。许多杀虫剂都有同分异构体，测定时应用纯的化合物。避免农药加工中的助剂对生物测定的影响。5二、影响杀虫剂毒力测定的因素1、杀虫剂：76二、影响杀虫剂毒力测定的因素2、昆虫2-1、昆虫的发育阶段一般杀虫剂对卵几乎都没有毒性：卵壳的特殊保护作用蛹一般对杀虫剂也不太敏感成虫的性别、营养及生理条件对其敏感性影响较大。对幼虫而言，低龄幼虫对杀虫剂比较敏感。6二、影响杀虫剂毒力测定的因素2、昆虫77二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-2、昆虫的性别与生殖状态性别的影响主要表现在成虫期，在毒力测定中，对多数昆虫，一般都规定只用一个性别。雌虫往往耐药性更强。雌虫产卵后，对杀虫剂变得敏感些。这可能与体重、脂肪含量和代谢能力有关。7二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-2、昆虫的性别与生殖状态78二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-3、昆虫的生理因素越冬虫：耐药性较高体内脂肪含量影响敏感性新陈代谢率越高，呼吸率越高，对杀虫剂的敏感性越大。8二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-3、昆虫的生理因素79二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-4、昆虫的种群异质性A、自然耐药力B、健壮耐药力C、杀虫剂的抗药性在毒力测定中，应选择异质性小的种群。9二、影响杀虫剂毒力测定的因素2-4、昆虫的种群异质性80二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-1、温度正温度系数、负温度系数（20~30℃）温度的影响：穿透作用、解毒代谢处理前低温处理果蝇、蜚蠊等，可提高对DDT的抗性，这与低温饲养中形成的不饱和脂肪有关。10二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响81二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-1、温度处理后的低温可使死亡增加，但杀死昆虫的时间延长。30℃以上的高温也能使死亡率增加。11二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响82二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-2、湿度与水分相对湿度对熏蒸剂的影响较大湿度对昆虫引诱剂及拒避剂有显著影响。12二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响83二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-3、光照光照对毒力测定的影响是间接的。在光照条件下，家蝇对DDT药膜的死亡率较高，原因是光照增加了其活动性。13二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响84二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响3-4、营养与饥饿有的营养物质可增加昆虫体内的解毒酶对胃毒剂的测定，饥饿是必要的。饥饿可增加敏感性。14二、影响杀虫剂毒力测定的因素3、环境条件对毒力测定的影响85三、供试昆虫的处理室内毒力测定原则上用室内种群对野外采集的种群，尽量选用一致的个体。(并在室内饲养1-2代)15三、供试昆虫的处理室内毒力测定原则上用室内种群86三、供试昆虫的处理1、一般移取法对棉铃虫等大个体昆虫，可用镊子对蚜虫、红蜘蛛等，可用毛笔，注意刺吸式口器的口针。

16三、供试昆虫的处理1、一般移取法87三、供试昆虫的处理2、趋光法家蝇、果蝇等都有趋光性。17三、供试昆虫的处理2、趋光法88三、供试昆虫的处理3、麻醉法3-1、二氧化碳法；3-2、挥发蒸气法：乙醚、三氯甲烷与乙醚（1：1）等，家蝇的麻醉时间一般在4分钟以内。3-3、冷冻法：适于家蝇、蜚蠊等试虫，一般分两步，先在5℃下冷冻10分钟，再在0℃下冷冻2-3分钟。18三、供试昆虫的处理3、麻醉法89三、供试昆虫的处理4、吸虫法：赤拟谷盗、米象等，用真空管等吸虫。19三、供试昆虫的处理4、吸虫法：90三、供试昆虫的处理5、结果检查需要数清活动力强试虫时，可把活虫烘死后再数。对红蜘蛛等可采用下列方法：局部高温法。放与60W的灯罩下烘，使活虫爬走。20三、供试昆虫的处理5、结果检查91毒力测定的仪器1.喷粉器1）喷粉箱：喷粉箱(是一套四个1×1×1英尺见方的木箱，除了最上一层的顶部有盖，最下一层的底部有底，其他均只有四周的框壁、因此叠放起来，彼此相通，也就是由上层下降的粉粒可以一直沉到下面。在每一层的上部放一块细铜纱，将粉剂放在第一层铜纱上，用刷笔刷过，细的粉粒即由此通过而下降。在底层中可以用一转盘，将要处理的东西放在转盘上，由于转盘的转动，可见使粉粒沉降的分亦更为均匀。21毒力测定的仪器1）喷粉箱：喷粉箱(是一套四个1×1×1922）喷粉玻璃钟罩：用直径27-33cm的玻璃钟罩放在一个中心有孔的方形或圆形短足的木台上，将定量药粉盛装于中部有球形膨大的玻璃管中，将吹粉球上的管连上橡皮管，从中心孔插入钟罩内，将定量药粉吹入钟罩内。粉剂由喷口向上喷出，然后下降。待罩内药粉沉降一定时间（10-15min）后，取开钟罩。毒力测定的仪器1.喷粉器222）喷粉玻璃钟罩：用直径27-33cm的玻璃钟罩放在一933）转盘沉淀喷粉器：原理同上。两个改进（1）在喷洒接受粉剂的表面上，加一玻璃板；喷粉之后，粉剂开始降落时，不是立即落在被处理物件上，而是落在玻璃板上。由于先沉淀的粉粒都是比较重大的颗粒，因而在沉降一定时间后(1—2分钟)，将玻璃板抽出，使细小均匀而后来沉降下来的粉粒落在被处理的物件上。(2)喷粉桌的中央作为转盘，可以徐徐旋转(每分钟8-12转)，这样可以校正了喷出不完全垂直的不均匀情况。毒力测定的仪器1.喷粉器233）转盘沉淀喷粉器：原理同上。两个改进（1）在喷洒接受粉944）真空喷粉（抽气喷粉钟罩）：是采用带塞玻璃钟罩，按放在垫有橡皮垫和接有通气管的平台上。在玻璃钟罩顶端开口处，复以代有小管的金属盖，小管突出盖面约1cm，并用橡皮塞塞住。目标昆虫及植物体放入钟罩内，将称好的药粉放于金属小盘内，然后抽气，当减压到240mmHg时停止减压，迅速揭开金属小盘上的塞子。借空气压力把药粉撒开，使药粉沉降到被测目标昆虫及植物体上，然后取出被测物体，置于正常的环境条件下，于规定时间内观察记载试虫的死亡情况，计算死亡率。毒力测定的仪器1.喷粉器244）真空喷粉（抽气喷粉钟罩）：是采用带塞玻璃钟罩，按放在951）轻便手提喷塔：由龚坤元等（1962）设计的，是由卵形玻璃喷头和喷塔两部分组成。卵形玻璃喷头，是喷雾设备的主要部分，也是喷雾质量好坏的关键，由颈、身腔、水管、气管、柄组成。喷塔：高40cm，直径22cm。喷雾筒下的底盘稍大于喷雾筒，底盘内放入目标昆虫，如活动性较强的昆虫可制作小纱笼盛装，然后在卵形喷头内放入定量药液，喷雾处理沉降一定时间后取出，经一定时间检查死亡情况，计算死亡率。毒力测定的仪器2.喷雾器卵形玻璃喷头I、是轻便手提喷雾塔；II、是扇形虫笼及喷塔底盘

251）轻便手提喷塔：毒力测定的仪器卵形玻璃喷头I、是轻便手962）沉降喷雾塔

：是一个2m高的喷筒，在上端中央有孔，装雾化喷头，下部有一木盒（或铁皮盒），中央为接受台，放入被测目标昆虫，在液管处吸进定量的药液，用压缩空气使药液喷出，沉降5min。喷头可以用一般的喷雾器，也可以用雾化器代替。雾化器是对液体不加压力，而单凭气流来雾化的喷头。雾化器是两个同轴管，一个小管（液管）套在大管（气管）内，液管内有药液流出，被气管的气流所打碎而喷出。

毒力测定的仪器2.喷雾器I-沉降喷雾塔；II-雾化器

262）沉降喷雾塔：毒力测定的仪器I-沉降喷雾塔；II-雾973）颇特（potter）喷雾塔：颇特喷雾塔分雾化喷头及喷座两部分。它的喷头是用加压形成快速气流来雾化液体，其原理是靠喷出快速气流，将药液带出，并同时加以分散雾化。它是由两个同轴管形成，内管是液管，外管是气流通过的管道。当压缩空气使气流快速从外管喷口喷出，内管的药液随着被吸出，并同时在喷口处为气流所打碎，成为细滴（雾化）。毒力测定的仪器2.喷雾器颇特喷雾塔的喷头

273）颇特（potter）喷雾塔：毒力测定的仪器颇特喷雾98喷雾塔是一个13.5in高的金属圆筒，上接一圆锥，上部直径为6.25in，下部直径为4.75in，是固定在一个四边有玻璃的金属架内。喷雾筒上端中央为雾化喷头，下端是喷雾圆台，可以上下调节，也可以调节雾化喷头与喷雾台之间的距离，是决定雾滴分布的一个因素。喷雾时，把目标昆虫放在纱笼内或玻皿内，放在喷雾台上，固定喷雾圆台的高度，固定药液用量，就可获得十分均匀的喷布。

28喷雾塔是一个13.5in高的金属圆筒，上接一圆锥，上部直994）气雾风道

：它由五个主要部件组成：中空的钢质长方体（0.25m×0.46m×1.8m）底座；一对钢质空气柜（0.46m×0.46m×0.46m）和空气柜相连接的直径0.148m的铝质圆筒状风道以及一个控制台。底座左端有一调速鼓风机，右端封闭。鼓风机将空气吹到右边空气柜，经风道进入左边空气柜排出，而左边空气柜和实验室排风系统相连。喷头安在风道的右边，喷头的喷嘴可以任意更换，喷嘴直径0.045mm。装试虫的笼子放在风道左端。毒力测定的仪器2.喷雾器气雾风道

294）气雾风道：毒力测定的仪器气雾风道100毒力测定的仪器2.喷雾器5）Hoskin横筒喷雾器：由三节1英尺直径的圆筒（每节长1.2英尺）所组成，两端加盖，盖中央均有直径1英寸的小孔。一端为喷雾入口，一端为空气出口。全部横筒斜放在架上，喷孔一端比另一端高2英寸。喷雾器下端有一开孔(直径3.5英寸），为雾点下沉开口。下部放要喷洒的物件。可使用一般喷雾器喷头，也可改装雾化器作喷头，用一定量的气压来喷洒。Hoskin横筒喷雾器30毒力测定的仪器5）Hoskin横筒喷雾器：Hoskin101毒力测定的仪器2.喷雾器6）转盘沉淀喷雾器：与转盘沉淀喷粉器结构相同，只是将喷粉器改为喷雾器。31毒力测定的仪器6）转盘沉淀喷雾器：102毒力测定的仪器2.喷雾器7）Webb喷雾器：主要是为测定残效（喷洒成药膜）而设计的，也可以为一般喷雾使用。主要装置是一个方形喷雾箱（1.5*1.5*1.5英尺），下面是一个沉降筒（直径1英尺）。喷雾箱上端开口装喷头，下面有一大孔，直径与沉降筒相同。孔上有一块可抽动的玻璃板。沉降筒高1米，下面装一木箱，抽屉内放需喷洒的物件。由于喷雾箱是密闭的，药剂喷洒时，雾点在箱内旋转即能均匀分布，抽开玻璃板，雾点均匀下降。雾化器也可作为其喷头使用。Webb喷雾器32毒力测定的仪器7）Webb喷雾器：Webb喷雾器103四、杀虫剂毒力测定方法1、胃毒剂毒力测定基本原理：使杀虫剂随食物一起被目标昆虫吞食进入消化道而发挥毒杀作用。根据取食量的差异分为无限取食法和定量取食法。33四、杀虫剂毒力测定方法1、胃毒剂毒力测定104四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法药量不易掌握，有拒食效应时更难获得满意结果1-1-1饲料混药喂虫法拟谷盗、米象和麦蛾等仓库害虫；以药剂与食物的比例作为含药浓度的表示方法，一般5-7天检查死亡情况。34四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法105四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法1-1-2培养基混药法人工含毒培养基，果蝇。其它方法：种子拌药法、糖浆混药法、毒耳法。35四、杀虫剂毒力测定方法1-1无限取食法106四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法能准确地测定吞食的剂量1-2-1叶片夹毒法（sandwichmethod）取食量大的咀嚼式口器昆虫按取食多少排列，分为生存组、死亡组和中间组，按中间组计算；36四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法107四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法1-2-2液滴饲喂法（feedingofmeasureddrop）舐食性昆虫，如家蝇、果蝇、蜜蜂等，用微量注射器形成小的液滴(0.01~0.001ml)，直接饲喂昆虫。37四、杀虫剂毒力测定方法1-2定量取食法108Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity1、适应昆虫鳞翅目幼虫，一般三龄以上，饥饿4~8小时，选取50头，电子天平称重，计算平均体重。2、药剂：原药，水溶性原药先用蒸馏水溶解，再用丙酮等有机溶剂稀释；水不溶性原药选用丙酮（或乙醇，二甲基亚砜等）按等比（或等差）稀释成5-7个浓度。38Theleafsandwichtestfori109Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity3、夹毒叶片的制做用直径1厘米的打孔器打叶碟，放入培养皿中，保湿。用点滴器从低浓度到高浓度每叶点滴1~2µL药液，溶剂挥发后，和另一片涂有淀粉糊的叶碟对合制成夹毒叶片，放入12孔培养板的孔内。每处理4个重复，每重复至少12个含毒叶片。39Theleafsandwichtestfori110Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity4、药剂处理每孔接一头试虫，于正常条件下培养，接虫2~4小时后，待试虫取食完含毒叶片后，（未取食完含毒叶片的淘汰掉）。加入干净饲料继续观察。5、调查：24小时后（根据实验要求和目的可适当调节时间），调查死虫数和活虫数。40Theleafsandwichtestfori111Theleafsandwichtestforinsecticidestomachpoisoningactivity6、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50，95%置信限，相关系数等。剂量以µg（药剂）/g（虫）表示。41Theleafsandwichtestfori112四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定用较高浓度（或剂量）的杀虫剂施于虫体的体表，使虫体充分接触药剂而发挥触杀作用。2-1喷粉法及喷雾法Potter喷雾塔真空喷粉器沉降喷雾塔42四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定113四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-2浸渍法常用于有效化合物筛选试验（screentest），被联合国粮农组织（FAO）推荐为蚜虫抗药性的标准测定方法。此法不是单纯的触杀毒力。43四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定114四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-3玻片浸渍法（slide-dipmethod）此法为FAO推荐为螨类抗药性的标准测定方法。44四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定115TheImmersiontestforinsecticideactivity1、靶标昆虫鳞翅目幼虫，同翅目的蚜虫类、叶蝉类、飞虱类，鞘翅目成虫如马铃薯瓢虫，缨翅目昆虫如蓟马等。2、药剂水溶性药剂直接用水溶解、稀释，其它药剂选用合适的有机溶剂（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有适量表面活性如0.1%吐温80（或0.1%Triton-X100）的水溶液稀释。每浓度药液量不少于50mL。45TheImmersiontestforinsec116TheImmersiontestforinsecticideactivity3、药剂处理将靶标昆虫浸入药液中5~10s后，用滤纸吸取多余药液，将试虫转移至正常条件下饲养，每处理4次重复，每重复10~20头。并设不含药剂的相应的有机溶剂处理作为对照。46TheImmersiontestforinsec117TheImmersiontestforinsecticideactivity4、调查：24小时后（根据实验要求和目的可适当调节时间），调查死虫数和活虫数。5、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50，95%置信限，相关系数等。47TheImmersiontestforinsec118四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-4药膜法（residualfilms）将一定量的杀虫剂，采用浸渍、点滴、喷洒等方法施于物体表面，形成一个均匀的药膜，然后放入一定量的供试目标昆虫，让其爬行接触一定时间后，再移到正常的环境条件下，于规定时间内观察试虫的中毒死亡反死，计算击倒率或死亡率。48四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定119四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-4药膜法（residualfilms）A、滤纸药膜法B、容器药膜法C、蜡纸粉膜法49四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定120四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-5点滴法（topicalapplication）点滴法是将一定量的药液点滴到供试目标昆虫体壁的一定部位，来测定杀虫药剂穿透表皮而引起昆虫中毒致死的触杀毒力。此法是杀虫剂触杀毒力测定中最准确的方法。50四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定121四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定2-5点滴法（topicalapplication）点滴部位一般为胸部背板家蝇成虫：1µL/头菜青虫、玉米螟、棉铃虫三龄虫0.1µL/头五龄虫0.5~1µL/头蚜虫一般0.03~0.05µL/头.51四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定122四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定A、微量点滴仪52四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定123四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定B、电动微量点滴器53四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定124四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定C、毛细管微量点滴器54四、杀虫剂毒力测定方法2触杀剂毒力测定125Thetopicalapplicationtest(点滴法)forinsecticidecontactactivity1、靶标试虫：鳞翅目3-4龄幼虫，同翅目成虫或若虫，点滴时可用乙醚或CO2麻醉处理。2、杀虫剂：原药，水溶性原药先用蒸馏水溶解，再用丙酮等有机溶剂稀释；水不溶性原药选用丙酮（或乙醇，二甲基亚砜等）按等比（或等差）稀释成5-7个浓度。