-正常细胞癌变的原因及HPV病毒诱导的宫颈癌的课件

正常细胞癌变的原因

和HPV病毒诱导宫颈癌的分子机制正常细胞癌变的原因

和HPV病毒诱导宫颈癌的分子机制1一个正常的细胞如何变为一个癌细胞呢?癌症的本质？

癌症源于体细胞突变。基因发生突变的体细胞，在与正常体细胞生存竞争的过程中，不断进化。最终变成永生不死的癌细胞。癌细胞无限制的增殖，进而导致肿瘤的发生。一个正常的细胞如何变为一个癌细胞呢?癌症的本质？2癌变的原因原癌基因突变抑癌基因突变癌细胞物理致癌因子化学致癌因子病毒致癌因子正常细胞作用癌变的原因原癌基因突变抑癌基因突变癌细胞物理致癌因子正常细胞3

肿瘤的发生是基因突变逐渐累积的结果

eg:

肿瘤的发生是基因突变逐渐累积的结果

eg:4已知的癌症危险因素吸烟——肺癌、膀胱癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、口腔癌、鼻腔癌还有很多其他癌症都与烟草的使用有关，据估计90%的男性肺癌死亡的原因可以归为吸烟。烟草所产生的烟雾是复杂的化学物质混合体。当这些物质被吸入肺部，它们可以在局部或远程引发DNA损伤并改变细胞生长和增殖状态。已知的癌症危险因素吸烟——肺癌、膀胱癌、食道癌、胰腺癌、肝癌5--正常细胞癌变的原因及HPV病毒诱导的宫颈癌的课件6--正常细胞癌变的原因及HPV病毒诱导的宫颈癌的课件7物理致癌物紫外线（主要是波长在100~400nm）有足够的能量引起光化学损伤，导致皮肤癌的形成。离子辐射——离子辐射的能量很高，足以从与其碰撞的原子或者分子上移除一个电子。在UV辐射中，DNA是主要的靶标，DNA经过UV辐射后会形成嘧啶二聚体。当这些损伤没修复时，会产生DNA突变。标志性的损害时CT或者CCGG。阳光辐射照成的基因突变有a.p53(如鳞状细胞癌，squamouscellcarcinama,SCC；基底细胞癌，basalcellcarcinoma,BCC)b.p16(如黑色素瘤)c.PTCH(如BCC，也可能导致SCC)经过UV辐射，皮肤角质形成细胞中很多信号通路会改变，如生长停滞和DNA损伤应答基因(如p53，GADD45，错配修复基因)、凋亡信号分子(如bcl-2)和促细胞分裂信号(如Ras)物理致癌物紫外线（主要是波长在100~400nm）有足够的能8生物致癌物传染因子是仅次于烟草的潜在致癌物，15%~30%的癌症与它相关。传染因子引起癌症的机制有三大类：a.通过感染源引起持久的感染伴随慢性炎症，导致巨噬细胞在感染的位点形成活性的氧化和氮化物，这些活性分子能够损伤DNA、蛋白质和膜，导致肿瘤的形成。b.感染因子通过激活细胞的癌基因通道或者使一个抑癌基因失活，直接参与细胞的癌变。c.与人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）相关,感染可能导致免疫抑制，宿主免疫系统识别感染或癌变细胞的能力降低。生物致癌物传染因子是仅次于烟草的潜在致癌物，15%~30%的9生物致癌物生物致癌物10化学致癌物有机致癌物苯（Benzene）多环芳烃（polycyclicaromatichydrocarbon,PAH）:PAH可以被转变为苯环“湾区”的二醇环氧物（diolepoxide）,这些环氧物可以与DNA形成共价的化合物。黄曲霉素B1（aflatoxinB1,AFB1）:最强的肝癌致癌物。无机致癌物镉：能在体内积累，可能通过表观遗传的机制激活原癌基因，破坏细胞的正常过程。砷：接触会产生活性自由基，导致DNA及蛋白质的损伤。激素己烯雌酚（diethyl-stilbestrol,DES）化学致癌物有机致癌物无机致癌物激素11小鼠皮肤致癌的多步骤模型小鼠皮肤致癌的多步骤模型12原癌基因和抑癌基因及相关的癌症原癌基因和抑癌基因及相关的癌症13HPV诱发宫颈癌（cervicalcancer）的过程HPV感染建立在鳞状上皮细胞损伤，表皮防护缺失的基础上，而同时HPV感染又阻碍了鳞状上皮细胞的修复，引起恶性循环

高危型HPV持续感染可引起宫颈上皮内瘤变CIN（cervicalintraepithelialneoplasia）和宫颈鳞癌。HPV感染经过漫长的过程发展为宫颈癌宫颈不典型增生→原位癌→早期浸润癌→宫颈癌)HPV诱发宫颈癌（cervicalcancer）的过程HP14HPV诱发宫颈癌的分子机制

HPV（HumanPapillomavirus,HPV）人类乳头瘤病毒，是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出130多种，该病毒只侵犯人类，对其它动物无致病性。高危的HPV-16病毒HPV16基因组可分为三个不同区域：a.早期区域，编码参与病毒DNA复制、转录调节和细胞转化的蛋白（分别编码为E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8等8个早期蛋白）b.晚期区域，编码病毒大（L1）和小（L2）衣壳蛋白c.长控制区域，又称上游调节区域（upstreamregulatoryregion,URR）,不包括任何OPF，有顺式调节元件，包括起始子和重要的转录增强子HPV诱发宫颈癌的分子机制HPV（HumanPa15HPV16基因及其蛋白作用基因碱基数碱基序列基因表达产物的作用E1954bp859～2813控制病毒DNA的复制E21127bp2725～3852负调节E6、E7，负责细胞周期和凋亡的调控E4287bp3332～3619捆绑于细胞角蛋白，破坏并结合细胞角蛋白网E5236bp3863～4099活化生长因子受体E6494bp65～559捆绑于p53蛋白，抑制p53而阻断细胞凋亡E7314bp544～858捆绑于Rb蛋白，抑制pRB而使细胞周期失控L11628bp5526～7154构成较大病毒壳体L21523bp4133～5656构成较小病毒壳体URR813bp7155～7904/0～64内含启动子，构成反馈调节环HPV16基因及其蛋白作用基因碱基数碱基序列基因表达产物的作16HPV诱发宫颈癌的分子机制E6和E7的主要细胞靶点分别是肿瘤抑制蛋白p53和pRB。高危型HPV游离基因通过非同源重组整合至宿主DNA后，主要的改变是原癌基因E6和E7的高水平稳定表达分别导致抑癌基因p53和Rb失活

小DNA肿瘤病毒（如多瘤病毒，腺病毒，癌症相关的HPV病毒）有一个普遍的机制：编码的致癌蛋白能够和关键的细胞调节蛋白相互作用。病毒癌蛋白的主要癌变活性，各自与pRB形成复合物，并将相应的“口袋蛋白”失活，激活转录因子E2F家族控制的基因，导致细胞增殖。HPV诱发宫颈癌的分子机制E6和E7的主要细胞靶点分别是肿瘤17HPV诱发宫颈癌的分子机制E6与p53的相互作用是非直接的，受一个细胞蛋白—E6-相关蛋白（E6-associatedprotein,E6AP）的调节，E6AP是一种泛素蛋白连接酶，当存在E6时，其直接参与p53泛素化，多泛素化的p53被识别后被26S蛋白酶体降解，破坏了p53转录激活和抑制特性，干扰野生型p53在DNA损伤应答中调节细胞周期阻滞的能力。HPV诱发宫颈癌的分子机制E6与p53的相互作用是非直接的，18HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的上皮细胞早已退出细胞周期E7与pRB结合，释放转录因子E2F家族，刺激细胞增殖并驱使细胞进入S期，重新激活细胞周期的DNA复制。E7与细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的抑制因子相互作用E7蛋白在正常的人类细胞中引起基因组的不稳定性，诱导G1/S和有丝分裂细胞周期检验点缺陷，导致错误分离和非整倍体。HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的上皮细胞早已退出细胞周期19HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的角质细胞是HPV感染的正常宿主分化的角质层细胞早已退出细胞周期G1期是唯一可以接受外界传入的细胞增殖和抑制增殖信号的周期HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的角质细胞是HPV感染的正常宿20HPV诱发宫颈癌的分子机制HPV16病毒E6和E7基因片段是HPV16转化正常细胞的关键早期基因。E2基因存在于HPV病毒基因上，其表达的蛋白E2蛋白是一种特殊的DNA结合蛋白，它抑制病毒感染细胞从而抑制病毒周期，进一步抑制了病毒DNA的复制，促进了基因维护，使病毒转录降低。正常情况下，E2蛋白起到抑制HPV16的启动子的作用，减少了病毒基因E6或E7的转录，从而下调E6或E7的表达，促进了正常细胞的衰老死亡。病毒基因整合的一个重要作用就是解除病毒E6、E7的表达控制。当E2基因断裂时，病毒蛋白E2表达下降，丧失了对E6，E7基因的抑制，病毒基因E6、E7过表达，E6，E7蛋白产生过多，刺激细胞，使其复制，随着复制的逐渐增多，宫颈病变持续加重，最终恶变。因此常将E2开放阅读框架的断裂作为HPV病毒整合到宫颈癌宿主细胞的重要标志。共表达E6和E7就足以使原代人类细胞永生，最显著的是使原代人类角质化细胞永生，其为HPV病毒正常的宿主。与HPV-16和HPV-18中E6/E7蛋白具有使细胞永生的特性相反，低风险的病毒里E6/E7蛋白没有活性或活性很低。HPV诱发宫颈癌的分子机制HPV16病毒E6和E7基因片段是21NucleotideDeficiencyPromotesGenomicInstabilityinEarlyStagesofCancerDevelopmentSUMMARYChromosomalinstabilityinearlycancerstagesiscausedbystressonDNAreplication.WestudiedthereplicationdynamicsincellsinwhicharegulatorofSphaseentryandcellproliferation,theRb-E2Fpathway,isaberrantlyactivated.AberrantactivationofthispathwaybyHPV-16E6/E7orcyclinEoncogenessignificantlydecreasedthecellularnucleotidelevelsinthenewlytransformedcells.ExogenouslysuppliednucleosidesrescuedthereplicationstressandDNAdamageanddramaticallydecreasedoncogeneinducedtransformation.Increasedtranscriptionofnucleotidebiosynthesisgenes,mediatedbyexpressingthetranscriptionfactorc-myc,increasedthenucleotidepoolandalsorescuedthereplication-inducedDNAdamage.Ourresultssuggestamodelforearlyoncogenesisinwhichuncoordinatedactivationoffactorsregulatingcellproliferationleadstoinsufficientnucleotidesthatfailtosupportnormalreplicationandgenomestability。NucleotideDeficiencyPromotes22NucleotideDeficiencyPromotesGenomicInstabilityinEarlyStagesofCancerDevelopmentDSBschromosomalinstabilityWithaninsufficentpoolofnucleotideaberrantlyHPV-16E6/E7CyclinEactiveCellproliferation

enforceRb-E2Fpathwaycausea.Retinoblastoma(Rb)E2Fpathway(Rb-E2F)isanimportantregulatorofcellproliferation.Rbisthekeyplayerincell-cycleregulation,restrictingcellproliferationbydirectinhibitionoftheE2Ffamilyoftranscriptionfactor.b.HPV16E7bindsanddegradesRb.c.CyclinEregulatesSphaseentrybyRbphosphorylationandinactivation,facilitatingE2Frelease.additionalmutationsabrogatingtheDNAdamageresponsearerequiredtoovercometheapoptosis/senescencebarrierNucleotideDeficiencyPromotes23NucleotideDeficiencyPromotesGenomicInstabilityinEarlyStagesofCancerDevelopment

primarykeratinocytesderivedfromadultskinbiopsies,whichhaveaverypoorproliferationcapacityexvivo.ThecellswereinfectedwithaLXSN-basedretroviralvector,whichdidnotaffectcellproliferationorDNAreplication.KeratinocytesfromthesamedonorwereinfectedwiththeLXSNvectorcontainingtheHPV-16E6andE7viralgenes.theE6/E7-expressingcellscontinuedtoproliferateatleast100days,indicatingtheirsuccessfulimmortalization.TheseresultsshowthatE6/E7geneswereexpressedandenforcedcontinuousproliferationoftheinfectedkeratinocytes.InordertoinvestigateearlyeventsinducedbyE6/E7expression,theexperimentswereperformedinnewlytransformedcells2–6weeksfollowingE6/E7infectionandbeforeanaphasebridgesandmicronucleiarevisible.NucleotideDeficiencyPromotes24HPV-16E6/E7ExpressionGeneratesStress

ontheCellularDNAReplicationUseDNAcombingapproachtoinvestigatetheeffectofHPVonthecellularDNAreplication.ThereplicationdynamicswerestudiedinnormalprimarykeratinocytesobtainedfromadultskinsamplesoftwoindividualsandinkeratinocytesfromthesamedonorsexpressingE6/E7proteinsfor2–6weeks.Altogether,thereplicationdynamicresultsshowthat,innewlytransformedE6/E7-expressingcells,thehostcellDNAreplicationisdramaticallyperturbed.HPV-16E6/E7ExpressionGenera25ALow-NucleotidePoolinCellsExpressingHPV-16E6/E7LeadstoReplicationStressandGenomeInstabilitywestudiedtheeffectofE6/E7onthenucleotidepoolusingthehigh-performanceliquidchromatography(HPLC)method.Ourresultsshowa2-to5-folddecreaseinthelevelofthefourdNTPsfollowingE6/E7expressionfor2–4weeksTheseresultssuggestthatthereplicationperturbationandgenomicinstabilityfoundintheE6/E7-expressingcellsresultfromaninsufficientnucleotidepoolrequiredtosupportextensiveproliferation.ALow-NucleotidePoolinCells26ALow-NucleotidePoolinCellsExpressingHPV-16E6/E7LeadstoReplicationStressandGenomeInstabilityForthis,primarykeratinocytesandkeratinocytesexpressingE6/E7for2–4weeksweregrownfor48hrinamediumsupplementedwiththefournucleosides(A,U,C,andG).ALow-NucleotidePoolinCells27AmodelfortheeventsleadingtogenomicinstabilityinearlystagesofcancerdevelopmentOncogeneexpressionforcescellproliferationbyaberrantactivationofcell-cycleregulators(Rb-E2F).Insufficientactivationofthenucleotidebiosynthesispathwaysresultsinalow-nucleotidepoolthatfailstosupportnormalDNAreplication.Thisleadstoreplicationstressandpromotesgenomicinstabilityduringearlystagesofcancerdevelopment.Additionalfactorscontributetogenomicinstabilityindifferentstagesoftumorigenesis,suchasreactiveoxygenspecies(ROS),telomereloss,hypoxia,abrogatedmitoticcheckpoints,andlossoftheDNAdamageresponse(DDR).Amodelfortheeventsleading28ThankyouforyourattentionThankyouforyourattention29正常细胞癌变的原因

和HPV病毒诱导宫颈癌的分子机制正常细胞癌变的原因

和HPV病毒诱导宫颈癌的分子机制30一个正常的细胞如何变为一个癌细胞呢?癌症的本质？

癌症源于体细胞突变。基因发生突变的体细胞，在与正常体细胞生存竞争的过程中，不断进化。最终变成永生不死的癌细胞。癌细胞无限制的增殖，进而导致肿瘤的发生。一个正常的细胞如何变为一个癌细胞呢?癌症的本质？31癌变的原因原癌基因突变抑癌基因突变癌细胞物理致癌因子化学致癌因子病毒致癌因子正常细胞作用癌变的原因原癌基因突变抑癌基因突变癌细胞物理致癌因子正常细胞32

肿瘤的发生是基因突变逐渐累积的结果

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肿瘤的发生是基因突变逐渐累积的结果

eg:33已知的癌症危险因素吸烟——肺癌、膀胱癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、口腔癌、鼻腔癌还有很多其他癌症都与烟草的使用有关，据估计90%的男性肺癌死亡的原因可以归为吸烟。烟草所产生的烟雾是复杂的化学物质混合体。当这些物质被吸入肺部，它们可以在局部或远程引发DNA损伤并改变细胞生长和增殖状态。已知的癌症危险因素吸烟——肺癌、膀胱癌、食道癌、胰腺癌、肝癌34--正常细胞癌变的原因及HPV病毒诱导的宫颈癌的课件35--正常细胞癌变的原因及HPV病毒诱导的宫颈癌的课件36物理致癌物紫外线（主要是波长在100~400nm）有足够的能量引起光化学损伤，导致皮肤癌的形成。离子辐射——离子辐射的能量很高，足以从与其碰撞的原子或者分子上移除一个电子。在UV辐射中，DNA是主要的靶标，DNA经过UV辐射后会形成嘧啶二聚体。当这些损伤没修复时，会产生DNA突变。标志性的损害时CT或者CCGG。阳光辐射照成的基因突变有a.p53(如鳞状细胞癌，squamouscellcarcinama,SCC；基底细胞癌，basalcellcarcinoma,BCC)b.p16(如黑色素瘤)c.PTCH(如BCC，也可能导致SCC)经过UV辐射，皮肤角质形成细胞中很多信号通路会改变，如生长停滞和DNA损伤应答基因(如p53，GADD45，错配修复基因)、凋亡信号分子(如bcl-2)和促细胞分裂信号(如Ras)物理致癌物紫外线（主要是波长在100~400nm）有足够的能37生物致癌物传染因子是仅次于烟草的潜在致癌物，15%~30%的癌症与它相关。传染因子引起癌症的机制有三大类：a.通过感染源引起持久的感染伴随慢性炎症，导致巨噬细胞在感染的位点形成活性的氧化和氮化物，这些活性分子能够损伤DNA、蛋白质和膜，导致肿瘤的形成。b.感染因子通过激活细胞的癌基因通道或者使一个抑癌基因失活，直接参与细胞的癌变。c.与人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus,HIV）相关,感染可能导致免疫抑制，宿主免疫系统识别感染或癌变细胞的能力降低。生物致癌物传染因子是仅次于烟草的潜在致癌物，15%~30%的38生物致癌物生物致癌物39化学致癌物有机致癌物苯（Benzene）多环芳烃（polycyclicaromatichydrocarbon,PAH）:PAH可以被转变为苯环“湾区”的二醇环氧物（diolepoxide）,这些环氧物可以与DNA形成共价的化合物。黄曲霉素B1（aflatoxinB1,AFB1）:最强的肝癌致癌物。无机致癌物镉：能在体内积累，可能通过表观遗传的机制激活原癌基因，破坏细胞的正常过程。砷：接触会产生活性自由基，导致DNA及蛋白质的损伤。激素己烯雌酚（diethyl-stilbestrol,DES）化学致癌物有机致癌物无机致癌物激素40小鼠皮肤致癌的多步骤模型小鼠皮肤致癌的多步骤模型41原癌基因和抑癌基因及相关的癌症原癌基因和抑癌基因及相关的癌症42HPV诱发宫颈癌（cervicalcancer）的过程HPV感染建立在鳞状上皮细胞损伤，表皮防护缺失的基础上，而同时HPV感染又阻碍了鳞状上皮细胞的修复，引起恶性循环

高危型HPV持续感染可引起宫颈上皮内瘤变CIN（cervicalintraepithelialneoplasia）和宫颈鳞癌。HPV感染经过漫长的过程发展为宫颈癌宫颈不典型增生→原位癌→早期浸润癌→宫颈癌)HPV诱发宫颈癌（cervicalcancer）的过程HP43HPV诱发宫颈癌的分子机制

HPV（HumanPapillomavirus,HPV）人类乳头瘤病毒，是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出130多种，该病毒只侵犯人类，对其它动物无致病性。高危的HPV-16病毒HPV16基因组可分为三个不同区域：a.早期区域，编码参与病毒DNA复制、转录调节和细胞转化的蛋白（分别编码为E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8等8个早期蛋白）b.晚期区域，编码病毒大（L1）和小（L2）衣壳蛋白c.长控制区域，又称上游调节区域（upstreamregulatoryregion,URR）,不包括任何OPF，有顺式调节元件，包括起始子和重要的转录增强子HPV诱发宫颈癌的分子机制HPV（HumanPa44HPV16基因及其蛋白作用基因碱基数碱基序列基因表达产物的作用E1954bp859～2813控制病毒DNA的复制E21127bp2725～3852负调节E6、E7，负责细胞周期和凋亡的调控E4287bp3332～3619捆绑于细胞角蛋白，破坏并结合细胞角蛋白网E5236bp3863～4099活化生长因子受体E6494bp65～559捆绑于p53蛋白，抑制p53而阻断细胞凋亡E7314bp544～858捆绑于Rb蛋白，抑制pRB而使细胞周期失控L11628bp5526～7154构成较大病毒壳体L21523bp4133～5656构成较小病毒壳体URR813bp7155～7904/0～64内含启动子，构成反馈调节环HPV16基因及其蛋白作用基因碱基数碱基序列基因表达产物的作45HPV诱发宫颈癌的分子机制E6和E7的主要细胞靶点分别是肿瘤抑制蛋白p53和pRB。高危型HPV游离基因通过非同源重组整合至宿主DNA后，主要的改变是原癌基因E6和E7的高水平稳定表达分别导致抑癌基因p53和Rb失活

小DNA肿瘤病毒（如多瘤病毒，腺病毒，癌症相关的HPV病毒）有一个普遍的机制：编码的致癌蛋白能够和关键的细胞调节蛋白相互作用。病毒癌蛋白的主要癌变活性，各自与pRB形成复合物，并将相应的“口袋蛋白”失活，激活转录因子E2F家族控制的基因，导致细胞增殖。HPV诱发宫颈癌的分子机制E6和E7的主要细胞靶点分别是肿瘤46HPV诱发宫颈癌的分子机制E6与p53的相互作用是非直接的，受一个细胞蛋白—E6-相关蛋白（E6-associatedprotein,E6AP）的调节，E6AP是一种泛素蛋白连接酶，当存在E6时，其直接参与p53泛素化，多泛素化的p53被识别后被26S蛋白酶体降解，破坏了p53转录激活和抑制特性，干扰野生型p53在DNA损伤应答中调节细胞周期阻滞的能力。HPV诱发宫颈癌的分子机制E6与p53的相互作用是非直接的，47HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的上皮细胞早已退出细胞周期E7与pRB结合，释放转录因子E2F家族，刺激细胞增殖并驱使细胞进入S期，重新激活细胞周期的DNA复制。E7与细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的抑制因子相互作用E7蛋白在正常的人类细胞中引起基因组的不稳定性，诱导G1/S和有丝分裂细胞周期检验点缺陷，导致错误分离和非整倍体。HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的上皮细胞早已退出细胞周期48HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的角质细胞是HPV感染的正常宿主分化的角质层细胞早已退出细胞周期G1期是唯一可以接受外界传入的细胞增殖和抑制增殖信号的周期HPV诱发宫颈癌的分子机制分化的角质细胞是HPV感染的正常宿49HPV诱发宫颈癌的分子机制HPV16病毒E6和E7基因片段是HPV16转化正常细胞的关键早期基因。E2基因存在于HPV病毒基因上，其表达的蛋白E2蛋白是一种特殊的DNA结合蛋白，它抑制病毒感染细胞从而抑制病毒周期，进一步抑制了病毒DNA的复制，促进了基因维护，使病毒转录降低。正常情况下，E2蛋白起到抑制HPV16的启动子的作用，减少了病毒基因E6或E7的转录，从而下调E6或E7的表达，促进了正常细胞的衰老死亡。病毒基因整合的一个重要作用就是解除病毒E6、E7的表达控制。当E2基因断裂时，病毒蛋白E2表达下降，丧失了对E6，E7基因的抑制，病毒基因E6、E7过表达，E6，E7蛋白产生过多，刺激细胞，使其复制，随着复制的逐渐增多，宫颈病变持续加重，最终恶变。因此常将E2开放阅读框架的断裂作为HPV病毒整合到宫颈癌宿主细胞的重要标志。共表达E6和E7就足以使原代人类细胞永生，最显著的是使原代人类角质化细胞永生，其为HPV病毒正常的宿主。与HPV-16和HPV-18中E6/E7蛋白具有使细胞永生的特性相反，低风险的病毒里E6/E7蛋白没有活性或活性很低。HPV诱发宫颈癌的分子机制HPV16病毒E6和E7基因片段是50NucleotideDeficiencyPromotesGenomicInstabilityinEarlyStagesofCancerDevelopmentSUMMARYChromosomalinstabilityinearlycancerstagesiscausedbystressonDNAreplication.WestudiedthereplicationdynamicsincellsinwhicharegulatorofSphaseentryandcellproliferation,theRb-E2Fpathway,isaberrantlyactivated.AberrantactivationofthispathwaybyHPV-16E6/E7orcyclinEoncogenessignificantlydecreasedthecellularnucleotidelevelsinthenewlytransformedcells.ExogenouslysuppliednucleosidesrescuedthereplicationstressandDNAdamageanddramaticallydecreasedoncogeneinducedtransformation.Increasedtranscriptionofnucleotidebiosynthesisgenes,mediatedbyexpressingthetranscriptionfactorc-myc,increasedthenucleotidepoolandalsorescuedthereplication-inducedDNAdamage.Ourresultssuggestamodelforearlyoncogenesisinwhichuncoordinatedactivationoffactorsregulatingcellproliferationleadstoinsufficientnucleotidesthatfailtosupportnormalreplicationandgenomestability。NucleotideDeficiencyPromotes51NucleotideDeficiencyPromotesGenomicInstabilityinEarlyStagesofCancerDevelopmentDSBschromosomalinstabilityWithaninsufficentpoolofnucleotideaberrantlyHPV-16E6/E7CyclinEactiveCellproliferation

enforceRb-E2Fpathwaycausea.Retinoblastoma(Rb)E2Fpathway(Rb-E2F)isanimportantregulatorofcellproliferation.Rbisthekeyplayerincell-cycleregulation,restrictingcellproliferationbydirectinhibitionoftheE2Ffamilyoftranscriptionfactor.b.HPV16E7bindsanddegradesRb.c.CyclinEregulatesSphaseentrybyRbphosphorylationandinactivation,facilitatingE2Frelease.additionalmutationsabrogatingtheDNAdamageresponsearerequiredtoovercometheapoptosis/senescencebarrierNucleotideDeficiencyPromotes52NucleotideDeficiencyPromotesGenomicInstabilityinEarlyStagesofCancerDevelopment

primarykeratinocytesderivedfromadultskinbiopsies,whichhaveaverypoorproliferationcapacityexvivo.ThecellswereinfectedwithaLXSN-basedretroviralvector,whichdidnotaffectcellproliferationorDNAreplication.KeratinocytesfromthesamedonorwereinfectedwiththeLXSNvectorcontainingtheHPV-16E6andE7viralgenes.theE6/E7-expressingcellscontinuedtoproliferateatleast100days,indicatingtheirsuccessfulimmortalization.TheseresultsshowthatE6/E7geneswereexpressedandenforcedcontinuousproliferationoftheinfectedkeratinocytes.InordertoinvestigateearlyeventsinducedbyE6/E7expression,theexperimentswereperformedinnewlytransformedcells2–6weeksfollowingE6/E7infectionandbeforeanaphasebridgesandmicronucleiarevisible.NucleotideDeficiencyPromotes53HPV-16E6/E7ExpressionGeneratesStress

ontheCellularDNAReplicationUseDNAcombingapproachtoinvestigatetheeffectofHPVonthecellularDNAreplication.ThereplicationdynamicswerestudiedinnormalprimarykeratinocytesobtainedfromadultskinsamplesoftwoindividualsandinkeratinocytesfromthesamedonorsexpressingE6/E7proteinsfor2–6weeks.Altogether,thereplicationdynamicresultsshowth