《体外分析技术》

体外分析技术体外分析技术Invitroanalysistechniques：是指离体的组织、血液或体液等作为生物样本，在人体外进行的、分析样本成分或其含量的检测技术。特点：超微量分析的灵敏度，高强度的特异性以及简便快速的方法领先于其他定量分析技术。非放射免疫分析

3重点讲述体外分析技术临床应用4放射免疫分析

1免疫放射分析

2第一节放射免疫分析免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。标记免疫分析：用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确定待检物。第一节放射免疫分析基本原理标记抗原（Ag*）和非标记抗原（Ag）与限量抗体(Ab)竞争性结合。Ag*和Ag与Ab亲和力相同。基本原理Ab限量，Ag*定量,Ag*和Ag的量大于Ab结合位点，二者通过竞争方式与Ab结合；随着Ag增加，Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放射量降低,二者变化成规律性。第一节放射免疫分析基本原理以Ag*Ab复合物为B，未结合的Ag*为F，则B/F或B/(B＋F)与Ag的量变存在着函数关系，由此可的制作该反应的标准曲线

。第一节放射免疫分析基本试剂抗体｛亲和力特异性滴度标记抗原｛比活度放射性化学纯度免疫活性标准品｛与被测物免疫活性相同放射化学纯度高定量精确抗原抗体复合物分离方法双抗体法沉淀法双抗+沉淀吸附法固相分离法第一节放射免疫分析放射免疫测量仪器第一节放射免疫分析室内质量控制1.零标准管结合率2.非特异性结合率3.最低浓度管和最高浓度管差4.标准曲线连线回归的参数5.E25、E50、E756.质控品7.质控图第一节放射免疫分析

RIA质量控制常用指标灵敏度精密度特异性准确度稳定性健全性多次重复测定结果的一致性最小可检出量测定值与真实值符合程度抗体特异性，交叉反应少有效期保持原有性能不变评价标准品与被测物的免疫活性第一节放射免疫分析第二节免疫放射分析基本原理将过量的标记抗体与抗原结合，分离结合的标记抗体与未结合的多余的标记抗体，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原的量呈正相关。第二节免疫放射分析特点：1．以标记抗体作为示踪剂2．反应动力学：标记抗体是过量，非竞争性，全量反应，反应速度快。3．灵敏度明显高于RIA，约为RIA的10～100倍。4．标准曲线工作范围宽。5．特异性高。6．稳定性好。RIAIRMA原理检测范围特异性标准曲线灵敏度标记物抗原竞争性结合相对低窄差结合率与测值成反比抗体非竞争结合高宽1-2数量级优结合率与测值成正比第二节免疫放射分析第三节非放射性免疫分析荧光免疫分析化学发光免疫分析酶标免疫分析电化学发光分析第三节非放射性免疫分析基本原理：指酶标记抗原或酶标记抗体进行的抗原抗体反应，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。酶免疫标记技术（ELISA）第三节非放射性免疫分析基本原理:以荧光素标记抗体或抗原作为示踪剂的一种新的免疫分析技术，其原理与ELISA相似。该法既可对液体中的抗原和抗体定量，也可对组织切片中的抗原、抗体进行定性和定量。一般以镧系元素作为荧光标记（示踪剂）。荧光免疫分析（FIA）第三节非放射性免疫分析基本原理：利用化学或生物发光系统作为抗原抗体反应的指示系统，借以定量检测抗原或抗体的方法，发光物质可直接作为抗原抗体的标记物，也可以游离形式用于催化剂（酶）和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。化学发光免疫技术（CLIA）第三节非放射性免疫分析化学发光免疫技术（CLIA）第三节非放射性免疫分析第三节非放射性免疫分析ECLIA是目前最先进的标记免疫测定技术，是继RIA、ELISA、FIA、CLIA以后的新一代标记免疫测定技术，具有敏感、快速和稳定的特点。直接以[Ru(bpy)3]2+标记，反应时标记物直接发光，ECLIA

与普通化学发光的主要差异在于是电启动发光反应，循环及多次发光，因此ECLIA反应易精确控制，重复性极好。

电化学发光免疫技术（ECLIA）第三节非放射性免疫分析第三节非放射性免疫分析RIAEIAFIACLIAECLIA示踪剂125I酶镧系酶、吖啶酯三联吡啶钌反应条件液固固固固固操作程序简易简易简易简易简易分析自动化否否可可可稳定性高较差高高高标记物有效期短较长长长长影响结果的因素多多多少少温育时间长短长较短短放免与非放免标记分析技术性能比较第四节体外分析技术临床应用甲状腺功能项目英文缩写临床意义三碘甲状腺原氨酸(TT3)甲亢↑；甲减↓甲状腺素(TT4)甲亢↑；甲减↓游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)甲亢↑；甲减↓。结果不受TBG影响游离甲状腺素(FT4)甲亢↑；甲减↓。结果不受TBG影响促甲状腺激素(TSH)原发性甲减↓；继发性甲减↑；甲亢↓抗过氧化物酶抗体（TPOAb）慢性淋巴细胞性甲状腺炎↑甲状腺球蛋白抗体(TGAb)慢性淋巴细胞性甲状腺炎↑自身免疫性甲状腺炎患者↑甲状腺微粒体抗体(TMAb)甲状腺球蛋白(TGAg)分化型甲状腺癌↑反三碘甲状腺原氨酸(rT3)甲亢↑；甲减↓；低T3综合征↑肿瘤标志物肿瘤标志物的合理选择肿瘤名称首选标志物辅助标志物结直肠癌CA242、CEACA199、CA50胰腺癌CA242、CA199CEA、CA50胃癌CA724CEA、CA199肝癌AFP

胆囊癌CA199

乳腺癌CA125、CA153、CEA

卵巢癌CA125CA724绒毛膜癌HCG

小细胞癌NSECY211非小细胞癌CY211CEA生殖细胞癌AFP、HCG

前列腺癌PSAfreePSA甲状腺癌TGCEA原发灶不明肿瘤CEA、AFP、CA199、CA242、CA724、CA125、CA153、NSE、CY211、PSA（男性）、FPSA（男性）、HCG第四节体外分析技术临床应用垂体及生殖激素项目英文缩写临床意义人绒毛膜促性腺激素（血、尿）(HCG)

妊娠↑，孕期9-12周血浓度达最高峰，也用于绒毛膜癌、恶性葡萄胎诊断及术后评估生长激素(GH)分泌不足会导致身材矮小、缺乏生长潜能，分泌过多引起巨人症和肢端肥大症孕酮(PROG)用于排卵期、早孕状态和黄体期生育力评估泌乳素(PRL)用于诊断高泌乳素血症性闭经、溢乳、男子女性型乳房、垂体增生、垂体肿瘤、泌乳素瘤、原发不孕、子宫功能性出血、垂体前叶功能减退等促卵泡生成素(FSH)常用于诊断染色体异常的先天性疾病、闭经、多囊卵巢综合征、更年期综合征促黄体生成素(LH)雌二醇(E2)常用于诊断生育障碍、男子女