专题2-微生物的培养与应用复习

专题2微生物的培养与应用

一、微生物的培养与应用

1.微生物的实验室培养

(1)培养基

①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。

②分类a．按培养基的物理性质可以分为液体培养基和固体培养基。b．按培养基的用途可以分为选择培养基和鉴别培养基。划分标准培养基种类特点物理性质液体培养基不加凝固剂固体培养基加凝固剂，如琼脂用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，用来抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养和分离出特定微生物(如分离酵母菌和霉菌，可以在培养基中加入青霉素)鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如用伊红——美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌【特别提醒】

选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。Q3:培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入_____________以纤维素作为唯一碳源的选择培养基，可以分离分解纤维素的微生物。Q1:分离利用石蜡油的微生物，用____________________的培养基Q2:分离产生蛋白酶的微生物，用___________________的培养基Q4:分离固氮微生物用______的培养基。例以石蜡油作为唯一碳源以蛋白质作为唯一氮源青霉素缺氮③培养基配方及营养要素

基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。

无菌技术主要操作要求

a．实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。

b．实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。

(2)无菌技术

（1）消毒和灭菌的区别培养基培养皿空气接种环双手牛奶②巴氏消毒③化学消毒⑤紫外线消毒⑥高压蒸气灭菌①灼烧灭菌④干热灭菌常用的消毒方法和灭菌方法

2．纯化大肠杆菌以及菌种的保藏

(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：

计算、称量、溶化、、倒平板。【友情提醒】平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快的挥发。(2)纯化大肠杆菌

①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

(2)纯化大肠杆菌

平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；

稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（2）接种操作:

第一步:灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；

每次划线前:灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落

划线结束后:灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

(3)菌种的保藏

①短期保存：固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。

②长期保存：－20℃甘油管在冷冻箱中保藏。

二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1．分离的原理

土壤中的细菌能合成脲酶，能把尿素分解成无机物。2．分离分解尿素的细菌所使用的特定培养基培养基:选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。

KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g

葡萄糖

10.0g

尿素(惟一氮源)1.0g

琼脂15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。3．统计菌体数目的方法

(1)显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。②方法：用计数板计数。③缺点：不能区分死菌与活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法)

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

【例2】可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是(

)A．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

A

三、分解纤维素的微生物的分离

(1)实验原理

即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

(2)实验流程

土壤取样：富含纤维素的环境。↓

选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量。↓

梯度稀释↓

涂布平板：将样品涂布于鉴别(含CR的)纤维素分解菌的培养基(固体)。↓

挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈。

1.(2011·新课标)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以

为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于

培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即

和

。原油选择平板划线法稀释涂布平板法(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力

。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、

和

。无菌技术要求实验操作应在酒精灯

附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。强干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰2.某同学在做细菌培养实验过程中发现：某种细菌(记作S)的周围其他细菌的生长繁殖受到抑制。他认为，最可能的原因是S细菌产生了一种不利于其他细菌生存的物质。为验证这一假设，实验组和对照组均使用相同的培养基，正确的接种方法应是()DA．实验组接种S细菌，对照组接种其他细菌B．实验组接种其他细菌，对照组接种S细菌C．实验组接种其他细菌，对照组不接种，一段时间后，除去其他细菌，两组再分别接种相同的S细菌D．实验组接种S细菌，对照组不接种，一段时间后，除去S细菌，两组再分别接种相同的其他细菌【解析】根据实验目的可知，实验的变量是S细菌所产生的物质，所以实验组先接种S细菌，一段时间后去除S细菌，其产生的物质残留在培养基中，而对照组不接种，然后再分别接种相同的其他细菌来检验抑制物质是否存在。3.请分析回答下列问题：(1)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是()①土壤取样