无菌检查法实验（直接接种法）

实训葡萄糖注射剂的无菌检查（一）实训目的1．掌握常用注射用药的无菌检查法及其结果的判定与分析；2．熟悉不同类型的药物应采取的微生物学检查方法；3．了解无菌制剂进行无菌检查的几种常用培养基。

无菌检查法是指检查药物制剂是否含有活的微生物的一种方法。各种注射剂(如针剂、输液等)、手术眼科制剂都必须保证不含有任何活的微生物，应绝对无菌才算合格。

无菌检查是利用无菌操作的方法，将被检查的药品分别加入适合需氧菌、厌氧菌和真菌生长的液体培养基中，置于适宜温度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断药品是否合格。（二）实训原理

（三）材料和用具

金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]为阳性对照菌。硫乙醇酸盐流体培养基，改良马丁培养基。无菌注射剂、移液管、滴管、注射器、试管、消毒剂(碘酒、酒精棉球)、酒精灯等。（四）操作步骤

本品采用直接接种法。

1．供试品处理取规定量供试品分别接种至含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。2．无菌检查实训操作（1）取样待测药品的抽样方法及不同类型供试品的制备方法，应按照《中国药典》的规定进行。本试验药品为注射剂，可任意抽取4支，用砂轮在安瓿颈部划一环形线，用碘酒、酒精棉球消毒安瓿外表面，待干后将其打开。

表

待检无菌制剂接种量和培养基用量

无菌药品类型/ml每支取量/ml培养基用量/ml2以下0.5152～201.01520以上5.015（2）接种用无菌注射器取处理后的供试品，分别加入需氧菌、厌氧菌、真菌培养基中，混匀。每种培养基各接种两管。YourTitleHere（3）阳性对照用1支无菌移液管分别取上述阳性对照菌菌液lml，接种于培养基试管中，作为阳性对照。（4）阴性对照不加任何菌或加入与供试液相等量的稀释剂的培养基试管为阴性对照。

（5）培养将上述试验管、阳性对照管、阴性对照管按中国药典规定的温度及时间进行培养。

表

检查用培养基类型、数量、培养温度及培养时间培养基类型培养温度(℃)培养时间(天)培养基数量(个)试验管对照管需氧菌培养基30~351422厌氧菌培养基30~351422真菌培养基23~281422（6）结果判定＊阴性对照管：应无菌生长，培养基液体澄清无变化。＊阳性对照管：阳性对照管培养48-72小时应生长良好，各管应变混浊，表明有菌生长。且可涂片、染色、镜检证实为阳性对照菌。

＊

试验管：

(1)若三种培养基各管均澄清，或虽混浊，但经证实无菌生长，判为供试品符合规定；(2)若任何一培养基试管混浊，并经证实有菌生长，判为供试品不符合规定。除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。试验若经确认无效则需重试，重试时重新取同量供试品依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。注意：试验中要与样品管同时平行做阳性对照和阴性对照。

（五）实训结果无菌试验结果记录品名：

注射液

批

号：

规格：

检验日期：

检定依据：2010年版《中国药典》检测环境：温度：

湿度：

培养箱（Ⅰ）：

培养箱（Ⅱ）：

培养基种类、温度及装量：液体硫乙醇酸盐培养基（Ⅰ批号：

）：培养需养菌、厌养菌、阳性菌及阴性对照，温度30~35℃，装量100ml。改良马丁培养基（Ⅱ批号：

）：培养真菌，温度23~28℃，装量100ml。营养肉汤培养基（Ⅲ批号：

）：培养对照菌，温度30~35℃，装量10ml。对照菌：菌液制备：取对照菌一白金耳，接种于10ml（Ⅲ）培养基内，经30~35℃培养18~24小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释至每毫升小于100个菌，备用。样品处理：取样

，全量通过全封闭式薄膜过滤器过滤后，再分别注入上述培养基，置30~35℃（Ⅰ）及23~28℃（Ⅱ）培养。观察结果如下：（五）实训结果培养天数1234567891011121314硫乙醇酸盐培养基（30~35℃）供试品阴性对照阳性对照改良马丁培养基（23~28℃）供试品阴性对照阳性对照结论：检验人：

复核人：

1.直接接种法适用于无抗菌作用的供试品的无菌检查。2.操作中做了供试品接种、阳性对照和阴性对照实验，同学们都学会了判断试验结果。3.试验结束后请大家注意，