高效液相色谱仪使用注意事项

高效液相色谱仪使用注意事项主讲：李国秀

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目录页仪器安装条件一流动相使用注意事项二色谱柱使用注意事项三高压输液泵使用注意事项四手动进样阀使用注意事项五检测器使用注意事项六

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一、仪器安装条件实验台应水平、稳固；避免在具有腐蚀性气体、大量灰尘或能产生强磁场的地方安装仪器；安装设备的房间应通风良好，应具有向外排风的装置；应安装三芯电源插座(220V，5～10A)，必须具有专门的接地线，并确保输出电源的电压稳定；环境温度要求在4～40℃之间，温度波动小于±2℃／h，最好室内有空调设施；房间内相对湿度应低于80%；由空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器；避免光线直射及冷、热源对仪器产生直接影响。高效液相色谱仪的用注意事项

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二、流动相使用注意事项1、必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45μm滤膜过滤。过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体。2、流动相不应含有任何腐蚀性物质。3、若用缓冲溶液作流动相，工作结束后应用含量较高的超纯水冲洗系统中的盐，冲洗时间至少为1小时，然后用纯甲醇或乙腈冲洗至少30分钟。高效液相色谱仪的用注意事项

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二、流动相使用注意事项4、流动相为纯水或缓冲溶液时，最好当日现配现用，低温下密封保存，一般不超过3天，防止微生物生长。5、应定期清洗储液器和进液处的砂芯过滤头，尤其当使用磷酸盐缓冲溶液时，易产生絮状沉积物，必须及时清除，否则易引起柱阻塞。6、进行梯度洗脱时，要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。

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三、色谱柱使用注意事项1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动，调节流速时应该缓慢进行。2、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不能直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。3、一般来说色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。高效液相色谱仪的用注意事项

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三、色谱柱使用注意事项4、选择使用适宜的流动相，在要求的pH范围和柱温下使用，以避免固定相被破坏。5、样品量不应过载，进样前应对样品进行必要的净化，以免对色谱柱造成损伤。可在进样器和色谱柱之间连接保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以应该经常更换。

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三、色谱柱使用注意事项6、每次工作完后，最好用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50mL～75mL。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗至少1小时，再逐步过渡到纯甲醇或乙腈。

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三、色谱柱使用注意事项7、保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。

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四、高压输液泵使用注意事项１、使用的流动相必须经过过滤和脱气，防止任何固体微粒进入泵体。2、使用中应注意柱前压是否稳定，若压力突然升高，表明管道过滤器或色谱柱柱头堵塞，应立即停用，待更换过滤片，清理色谱柱柱头后方可重新开启高压输液泵。高效液相色谱仪的用注意事项

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四、高压输液泵使用注意事项3、当使用酸或碱缓冲溶液后，应及时清洗，防止无机盐结垢，造成泵柱塞受到磨损或腐蚀。4、当往复式泵泵头的单向阀排液不畅通时，应拆开通向混合器的接头，用流动相冲洗出机械杂质，而不要轻易拆开单向阀导致泵无法工作。

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四、高压输液泵使用注意事项5、绝对不允许在没有流动相或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。6、长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。7、压力下限应设置在0.5～1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞杆的干磨。

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五、手动进样阀使用注意事项１、样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。2、要使用专用的液相注射器进样，绝对不可用气相色谱注射器。高效液相色谱仪的用注意事项

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五、手动进样阀使用注意事项3、进样量的多少要根据定量管的环体积决定，当试样量较少时，进样体积由注射器的进样体积决定，但最大体积要小于环体积的1/2。当试样量较多时，进样体积由定量管的体积决定，为保证试样完全把定量管的流动相置换干净，需注射5～6倍环体积的试样。

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五、手动进样阀使用注意事项4、转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力，再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。5、为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。

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