高中生物2.1微生物的实验室培养第二课时

微生物的培养与应用课题1

微生物的实验室培养微生物的接种

将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。

微生物常用接种方法有：平板划线法、稀释涂布平板法。(斜面接种、穿刺接种等）接种工具和方法接种和分离工具1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀单个细胞单个菌落从混杂的微生物群体中获得只含某一种微生物的群体的过程。※微生物的分离纯化1、纯化原理：常用接种方法平板划线法操作核心防止杂菌污染，保持培养物纯度2、微生物接种和纯化的方法稀释涂布平板法微生物群分散㈡.纯化大肠杆菌1.平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。

原因：一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。问题讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。C下列操作与无菌技术无关的是（）A.接种前用火焰灼烧接种环B.接种前用酒精擦拭双手C.将平板倒置，放入培养箱中培养D.接种在酒精灯的火焰旁完成将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。2.稀释涂布平板法2.稀释涂布平板法的操作方法（1）系列稀释操作（2）涂布平板操作注意1.将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。2.操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

讨论：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。第2步应该如何进行无菌操作？涂布平板操作第2步要用无菌移液管，操作时左手将皿盖打开一条缝隙，右手将移液管中的菌液迅速滴加到培养基表面，并盖上皿盖。答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。三、微生物的恒温培养将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察记录结果。实验组对照组菌落⑴.定义：单个或者少数微生物在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。（P14,P18)⑵.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。⑶.功能：每种微生物在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。几种菌落及其形态几种菌落及其形态四、结果分析与评价

1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？

（对照组）没有。若有菌落，说明培养基被污染。2、在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立的菌落？这些菌落的颜色、形状和大小相似吗？

是。相似。如在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3、培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。

菌落的大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大。4、如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？

说明有杂菌污染。可能原因：灭菌不彻底、接种过程或培养过程中有杂菌污染。四、结果分析与评价

㈠.培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。㈡.接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。㈢.是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同