聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白

聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离血清蛋白【实验目的】

1.学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理

2.掌握聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳的操作技术【实验原理】

聚丙烯酰胺是由单体丙烯酰胺（简称Acr）和交联剂N,N’-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂过硫酸铵（简称AP）和加速剂N,N,N’N’-四甲基乙二胺(简称TEMED)的作用下,聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。

2021/4/261聚丙烯酰胺凝胶电泳分离原理分子筛效应：分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。电荷效应：电荷量不同，迁移率不同。浓缩效应2021/4/262【实验器材】样品：血清凝胶储备液：1号液：pH8.9Tris~HCl缓冲液+TEMED2号液：Acr+Bis3号液：AP电泳缓冲液：pH8.3的Tris-Gly缓冲液染色液：氨基黑溶液脱色剂：冰乙酸2021/4/263【实验器材】电泳仪、圆盘电泳槽、电泳玻璃管、青霉素小瓶盖、微量注射器、长针头注射器、烧杯、移液管、ParaFilm膜。2021/4/264【实验步骤】1.凝胶的制备

（1）准备工作：用ParaFilm膜密封细橡皮塞的一端，塞入放到木质试管架上的小瓶塞中；2021/4/265（2）制备小孔胶（分离胶）凝胶浓度:7.5%试剂用量蒸馏水1号液2号液

1mL1mL2mL混匀3号液4mL2021/4/2662.灌胶，装胶用滴管吸取凝胶沿管壁装入玻璃管中，检查管内无气泡，加完凝胶后沿管壁缓缓注入几滴蒸馏水，聚合约40-60分钟；时间到后，轻轻取下管底部的橡皮塞和ParaFilm膜，用滤纸吸取凝胶上方水层，将凝胶管垂直插入电泳槽圆孔中并尽量使各管高度一致，其余孔用胶塞堵住，电泳槽内加注电泳液；2021/4/2673.加样：

用微量注射器吸取20/50ml

的样品（含溴酚蓝），沿内壁缓慢加入，注意观察样品的状态变化；4.电泳：负极在上，正极在下，电流调节到2mA/管，开通电源；2min后，电流调节到5mA/管，电泳约1h左右，直到溴酚蓝跑到凝胶底部。2021/4/2685.剥胶

2021/4/2696.固定与染色：将取下的胶条放入染色液中，在室温下，固定染色10min。7.脱色：将染色完毕的胶条用自来水冲洗后浸泡在脱色液中；8.观察并图示记录实验结果。2021/4/26109、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:39:01PM11、人总是珍惜为得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、业余生活要有意义，不要越轨。2023/2/32023/2/303February202317、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/39、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。***2/3/20234:39:01PM11、人总是珍惜为得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。***Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、业余生活要有意义，不要越轨。**2/3/202317、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。***03-2月-23谢谢大家2021/4/26129、人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低头要有勇气，抬头要有低气。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:39:02PM11、人总是珍惜为得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人乱于心，不宽余请。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一个人炫耀什么，说明他内心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32