2023年蛙心灌流实验报告

实验二离体蛙心灌流实验专业:学号:姓名：实验目的1.学习离体器官（蛙心）灌流的方法。2.观测理化因素对蛙心活动的影响。实验原理蛙心的灌流:蛙心无营养性血管，离体之后采用人工灌流的方法,仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张,并维持较长时间,心肌的营养是通过心脏内膜液体的直接渗透而得。心肌:受体受体激动剂效应β1肾上腺素去甲肾上腺素心率增快、房室传导加速、心肌收缩力加强。Ｍ乙酰胆碱心率减慢、房室传导减慢、心肌收缩力减弱。１．任氏液：正常对照具有NaＣl、CａCl2、KCl、NaH2PO4、Ｎａ2HPO4和蒸馏水,其电解质、晶体渗透压、pＨ值与蛙的组织液相近。2.0.6５％NaCl灌流:3.２％ＣaＣl2灌流:4.1%KCl灌流:5.１：10000E灌流6.1：100０0Ach灌流7.心得安β1受体阻断剂,克制肾上腺素与β1受体结合,使E不能发挥作用。8.阿托品Ｍ受体阻断剂，克制Ach减慢心率,加速房室传导,增长心房收缩力。实验器材离体蛙心任氏液、ｌ％KCl溶液、2％ＣaC12溶液、0.6５%NａＣｌ溶液、1:10０00肾上腺素、１:10０0０乙酰胆碱、心得安、阿托品实验环节1.离子试剂任氏剂1.离子试剂任氏剂0.65%NaCl任氏液清洗2%CaCl2任氏液清洗1%KCl任氏液2.药物试剂E任氏液清洗心得安+E任氏液清洗Ach任氏液清洗阿托品+Ach任氏液结果与分析心率：34次/min最大收缩力：2.５g最小收缩力:1.１ｇ图１正常脉搏曲线心率：３５次／mｉn最大收缩力:1.６ｇ最小收缩力：１．1g图20．65％NａCl灌流脉搏曲线分析：细胞外液中Ca２+浓度减少,2期Cａ2+内流减少，胞浆中Ca２+减少，心肌收缩力减少。心率:38次／min最大收缩力:3.5g最小收缩力:1．１g图３２%ＣaCl2灌流脉搏曲线分析:心肌的舒缩活动与心肌肌浆中的钙离子浓度的高低有关。心肌肌浆网不发达,储钙能力差，易受细胞外钙离子浓度高低影响。细胞外液中Na+与Ca2+有竞争性克制，细胞外液Ca２＋浓度升高,细胞兴奋时内流Ca２+增长,心肌收缩力增强。慢反映细胞4期去极速度加快,心率增快。心率:21次/ｍｉn最大收缩力:３.4ｇ最小收缩力:1.1g图41%ＫCl灌流脉搏曲线分析：K+与Ｃａ２＋在细胞膜上有竞争性克制,细胞外液中K+浓度升高，K+克制细胞膜对Ca2+转运,因此进入细胞内Ca２＋减少，心肌的兴奋—收缩耦联作用减小，心肌收缩力减弱。心率:35次/min最大收缩力:3．５g最小收缩力：0.９g图5肾上腺素灌流脉搏曲线分析：肾上腺素与心肌细胞膜上的β1受体结合,心肌细胞和肌浆网膜Ca2＋通透性增强，肌浆中Ｃａ2+浓度升高，心肌收缩力增强。并且肾上腺素使肌钙蛋白与钙离子亲和力下降,肌钙蛋白对钙离子的释放增强,肌浆网膜摄取钙离子的速度加快,钠－钙离子的互换增长，复极期向细胞外排出钙离子增多,心肌舒张速度增快,整个舒张过程明显加强。心率：3４次/min最大收缩力:2.5ｇ最小收缩力:1.1g图6心得安＋E灌流脉搏曲线分析：心得安是β1受体阻断剂，可以克制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用，因此心率及心肌收缩力保持不变。心率：33次/min最大收缩力：2.5g最小收缩力:1．1ｇ图7乙酰胆碱灌流脉搏曲线分析：乙酰胆碱与心肌细胞膜上的Ｍ受体结合，心肌细胞膜Ｋ+通道的通透性增强，促进K+外流,动作电位期间Cａ２+内流减少，心肌收缩力减少。同时乙酰胆碱可直接克制Ca2+通道,导致Ｃa2+内流减少，心肌收缩力减少。心率:34次／ｍin最大收缩力:2．5g最小收缩力:１.1g图8阿托品＋Aｃｈ灌流脉搏曲线分析：阿托品是M受体阻断剂，可以克制Ａｃh减慢心率，加速房室传导，增长心房收缩力，因此心率及心肌收缩力保持不变。讨论为什么常用离体蛙心,而不常用离体哺乳类动物心脏做心脏灌流实验？蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处,它的离体组织、器官的生活条件比较简朴，易于控制和掌握，来源丰富且价格低廉。离体蛙心不需要恒温和特殊的供氧设备,因此常被选作心脏灌流实验。而哺乳类心脏生活条件规定高，离体心脏灌流需要恒温环境,恒压或恒流灌流、供氧。实验影响因素多、设备多，心脏离体后存活时间较短。因此一般学生实验较少用哺乳类动物心脏做离体心脏灌流实验。离体蛙心为什么会节律性跳动？把离体和脱离神经支配、体液因素影响的动物心脏保持在适宜的环境中，在一定期间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动,这是由于心脏的静脉窦能自动按一定的兴奋节律产生兴奋，并传导到心房和心室,引起整个心脏又节律的兴奋和收缩。静脉窦能产生节律性兴奋是由于其自律细胞在复极完毕后，立即开始自动的缓慢的去极化，使膜电位逐渐减小，当达成阈电位水平时,便爆发动作电位。蛙心插管插入心室时,是在心脏舒张期插入还是在心脏收缩期插入？为什么?蛙心插管插入心室时，应在心缩期插入。这是由于积极脉开口处有半月瓣，当心室收缩时，半月瓣正好打开,此时积极脉与心室腔相通，插管容易顺势插入心室。而在心室舒张期,半月瓣处在关闭状态,对插管产生阻力,不利于插入，强行插入易损伤心肌组织。实验过程中,为什么必须保持蛙心插管内液面高度的恒定？液面过高过低会产生什么影响？在实验中，蛙心插管内液面的高度发生变化,心脏收缩曲线会发生相应的变化。心肌缩短幅度和速度即受前负荷的影响，也受后负荷的制约。插管内液面高度所产生的压力，在心室舒张末期是作用于心肌的前负荷，这个前负荷决定了心肌在收缩之前的初长度。因此根据心肌Ｓtarｌiｎｇ心肌定律,液面高度的变化将导致心肌收缩强度的改变。心室开始收缩时，插管内液体产生的压力又成为心肌收缩时承受的后负荷,后负荷改变会使心肌收缩的幅度和速度发生变化。液面过高，心缩曲线幅度减少。过高的液面使心室前负荷超过最适前负荷，心肌收缩强度不在增长或下降。而过高的后负荷却使心肌缩短幅度和速度大大下降。液面过低，心室收缩曲线幅度也会减少,前负荷过小,导致心肌收缩强减小的效应比后负荷减小的效应要强。因此实验中选取一最适液面高度，并保持这一液面高度，以便取得较好的实验结果。任氏液为什么能维持离体蛙心较长时间的跳动?如何才干使离体蛙心存活时间长?由于任氏液是常规的生理代用液。它的组成与体液相近,具有能维持生物体的正常生命活动的功能。它与体液等渗具有相同的PH值,并具有能量、营养物，并且具有生物体心肌波动所需要的离子,如：K＋、Na+、Ca２+等,并且等浓度，故能维持蛙心较长时间的跳动。可以通过用与蛙体液相近的生理代用液来使蛙心长时间存活。蛙心灌流时，蛙心心肌以何种方式获得营