江苏睢宁市2023年高三第四次模拟考试生物试卷含解析

2023年高考生物模拟试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1．韭菜植株的体细胞含有32条染色体。用放射性60Co处理韭菜种子后,筛选出一株抗黄叶病的植株X，取其花药经离体培养得到若干单倍体植株，其中抗病植株占50%。下列叙述错误的是A．低温处理植株X可获得多倍体抗病韭菜植株B．获得抗黄叶病植株X的育种原理是基因突变C．该单倍体植株的体细胞在有丝分裂后期有64条染色体D．植株X连续自交若干代，纯合抗病植株的比例逐淅升高2．为研究光合作用中ATP合成的动力，20世纪60年代，AndreJagendorf等科学家设计了如下实验：首先人为创设类囊体内外pH梯度，之后置于黑暗条件下，发现随着类囊体内外pH梯度的消失有ATP形成。下列相关说法合理的是A．离体类囊体取自绿色植物根尖分生区细胞B．在绿色植物中该过程也是在黑暗中完成的C．ATP的合成需要伴随H+运输进入类囊体腔D．推测ATP合成的动力来自H+浓度梯度势能3．下图表示某一生态系统的能量金字塔，其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别代表不同营养级的生物，E1、E2代表两种能量形式。下列有关叙述正确的是A．Ⅰ和Ⅳ是实现生态系统物质循环的关键成分B．生态系统中同一层营养级生物组成生物群落C．E1表示的能量主要是通过光合作用固定的D．生态系统中的物质在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ之间循环利用4．将某成熟植物细胞放在一定浓度的A物质溶液中，观察发现其原生质体（除细胞壁以外的部分）的体积随时间的变化趋势如图所示。下列叙述正确的是（）A．在0～1h内水分子只能从细胞内移动到细胞外B．在1h后A物质才开始通过细胞膜进入细胞内C．在1～3h内A溶液的渗透压小于细胞液渗透压D．若3h后继续观察可能会看到该细胞吸水涨破5．科学家研究发现，TATAbox是多数真核生物基因的一段DNA序列，位于基因转录起始点上游，其碱基序列为TATAATAAT，RNA聚合酶与TATAbox牢固结合之后才能开始转录。下列相关叙述不正确的是A．TATAbox被彻底水解后共得到4种小分子B．mRNA逆转录可获得含TATAbox的DNA片段C．RNA聚合酶与TATAbox结合后才催化核苷酸链的形成D．该研究为人们主动“关闭”某个异常基因提供了思路6．利用基因工程培育抗虫棉时，获得甲、乙两种抗虫植株。这两种抗虫植株的染色体内均插入了3种抗虫基因（均能表达），插入染色体情况见下图。已知至少有2种抗虫基因时，抗虫棉植株才会表现出较强的抗虫特性。不考虑突变和交叉互换，甲、乙两种抗虫植株自交，所得子代中具有较强抗虫特性的个体所占比例依次为A．3/4，3/4 B．1/2、3/4C．3/4、1/2 D．1/2、1/2二、综合题：本大题共4小题7．（9分）艾滋病药物能治疗新型冠状病毒肺炎吗?国家卫健委新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)中提供了用于一般治疗的抗病毒药物，其中洛匹那韦/利托那韦是原本用于艾滋病治疗的药物。为什么治疗艾滋病的药物能治疗新型冠状病毒引起的肺炎?HIV病毒和新型冠状病毒都具有包膜，包膜上有侵染宿主细胞所必需的蛋白质，其中，新型冠状病毒包膜上的S蛋白能识别并结合呼吸道上皮细胞表面的受体血管紧张素转化酶2(ACE2)，HIV病毒包膜上的gp120在宿主细地T细胞表面的受体则是C04蛋白。HIV病毒和新型冠状病毒的遗传物质均为RNA，但两种病毒进入宿主细胞后所经历的生化历程不尽相同。HIV病毒侵入宿主细胞后经过逆转录—整合—转录—翻译—装配的过程，最终出芽释放。其中，翻译时会先表达出一个多聚蛋白，该多聚蛋白在一种HIV蛋白酶的催化下被剪切成多个有功能的蛋白质。而新型冠状病毒侵入宿主细胞后，其RNA可以直接作为模板进行翻译，翻译时产生的多聚蛋白也需要在其自身蛋白酶的催化下进行剪切以形成RNA复制酶等有功能的蛋白质。随后，新型冠状病毒RNA在RNA复制酶的催化下进行复制，与转录、翻译所得的其他成分装配后释放。洛匹那韦/利托那韦的作用对象正是这种HIV蛋白酶。它们与HIV蛋白酶的活性中心结合进而抑制其活性。冠状病毒切割多聚蛋白的主要蛋白酶是3CLPro，研究者通过分子动力学模拟的方法发现洛匹那韦/利托那韦能与SARS病毒的3CLPro活性中心结合。而SARS病毒和新型冠状病毒的3CLPro蛋白氨基酸序列一致性达96%。此前洛匹那韦/利托那韦在SARS治疗中也表现出一定的有效性，但在新型冠状病毒肺炎中使用洛匹那韦/利托那韦仍需谨慎乐观，其疗效和疗效仍需更多的实验研究和临床数据支持。（1）根据HIV病毒和新型冠状病毒的结构可判断它们都可以在吸附后通过____方式进入宿主细胞，但两种病毒侵染的宿主细胞不同，原因是________________。（2）尽管HIV病毒和新型冠状病毒在进入宿主细胞后的生化过程差异很大，但其中却有一个共同之处，即___________________________。（3）洛匹那韦/利托那韦可能通过_________治疗新型冠状病毒肺炎，但治疗艾滋病的药物用于治疗新型冠状病毒肺炎具有局限性，体现在________。（4）治疗艾滋病还有其他几种药物，如AZT和雷特格韦，它们作用的对象分别是HIV的逆转录酶和整合酶，请问AZT和雷特格韦能否用于治疗新型冠状病毒肺炎，理由是________。（5）根据文中信息，新型冠状病毒治疗药物还有哪些其他可能的研发思路?请写出一种____。8．（10分）果蝇的红眼和白眼受X染色体上一对等位基因控制，红（A）对（a）为显性。回答下列问题：（1）红白眼基因位于X染色体上，若要设计一个杂交实验，通过子一代果蝇的表现型体现为伴性遗传方式，可能有的杂交组合有_____________________________（用基因型表示）。（2）某实验室有一随机交配多代的果蝇种群，雌雄均有多只红眼和白眼性状，实验员将红眼果蝇挑出单独饲养在一个瓶中（Ⅰ号瓶），白眼果蝇挑出单独饲养在另一个瓶中（Ⅱ号瓶）。①用Ⅰ号瓶中的红眼果蝇随机交配一代，_________（填“能”或“不能”）证明红眼为伴X显性遗传，原因是______________________________________；②用Ⅱ号瓶中的白眼果蝇随机交配一代，__________（填“能”或“不能”）证明白眼为隐性性状，原因是_________________________________________。9．（10分）小麦是我国重要的粮食作物，种植面积极为广泛。现有不抗锈病的小麦（基因型ee基因位于7号染色体上）与抗锈病的纯合四体小麦（7号染色体有4条，其上共有4个相关抗锈病基因）进行有性杂交，完成下列问题：（1）四体小麦的形成是____________变异的结果。欲确定抗锈病的小麦是四体，最简捷的方法是：选取小麦的____________（填“分生区”或“伸长区”）材料制成装片，进行____________找到____________期细胞，观察__________________。（2）杂交产生的三体小麦（7号染色体有3条），在减数分裂同源染色体联会时，任意两条染色体正常配对，在减数第一次分裂后期正常分离，而另一条随机移向细胞任意一极。若上述杂交子代与不抗锈病小麦杂交，后代基因型及比例是____________，表现型及比例是____________，并画出相应遗传图解。___________10．（10分）自然界里有多种微生物，将其进行合理的筛选、培养和应用，能给医药和化工等生产领域带来巨大经济效益。回答下列问题。（1）对培养基进行灭菌时，多采取____________法，而对接种环或涂布器灭菌时则用____________法，若要将微生物采用平板划线法进行分离操作，在固体培养基表面连续进行了5次划线，则需要对接种环灼烧____________次。平板划线在做第二次及其后的划线操作时，要从上次划线的____________开始划线，最后一次划的线不能与第一次划的线____________。（2）将接种后的固体培养基和一个未接种的固体培养基放入恒温箱中____________培养，以减少培养基中的水分挥发。其中，培养未接种的固体培养基是为了____________。长期保存菌种时，应将培养的菌液与____________充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。（3）甲、乙两组同学用稀释涂布平板法测定某种微生物的数量，在同一稀释倍数下每隔一段时间记录数据（统计时间内微生物总数小于环境容纳量），得到以下结果：培养时间(小时)24487296甲组菌落均值(个)18253632乙组菌落均值(个)20283832计数时最好取培养____________小时记录的菌落数作为实验结果，一方面是由于培养时间较短，会遗漏菌落数目，另一方面是由于____________。11．（15分）请回答下列问题。（1）从微生物所能利用的氮源种类来看，一部分微生物是不需要利用氨基酸作为氮源的，它们能把_____（列举两例）等简单氮源用于合成所需要的一切氨基酸，因而可称为“氨基酸自养型生物”。（2）伊红美蓝培养基可用于饮用水大肠杆菌数目的测定，根据培养基上黑色菌落的数目推测大肠菌的数量。但单位体积饮用水中大肠杆菌数量相对较少，若直接将一定体积的自来水接种到培养基中，培养后可能无法得到菌落或菌落数目太少，可通过“滤膜法”解决这个问题，其操作思路是：_____。稀释涂布平板法和______________________法是测定微生物数量更常用的两种方法。（3）在固定化细胞实验中，明胶、琼脂糖、海藻酸钠等物质能作为包埋细胞载体的原因是______。在工业生产中，细胞的固定化是在严格_____条件下进行的。（4）为探究一种新型碱性纤维素酶去污效能，研究小组进行了不同类型洗衣粉实验，结果如下图。加酶洗衣粉中目前常用的四类酶制剂除纤维素酶外，还有_____（至少答两类）。根据以上实验结果，_____________（能/否）得出对污布类型2的去污力最强是因碱性纤维素酶所致，并说明原因_________。

参考答案一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。每小题只有一个选项符合题目要求）1、C【解析】用放射性60Co处理韭菜种子，可能发生基因突变，取其花药经离体培养得到的若干单倍体植株，抗病植株占50%，说明细胞发生了显性突变，抗病基因为显性基因，用低温诱导处理X（含抗病基因）可以得到多倍体抗病韭菜植株，A正确；获得抗黄叶病植株X的育种为诱变育种，其原理是基因突变，B正确；该单倍体植株的体细胞中染色体只有正常体细胞染色体数的一半，即16条，在有丝分裂后期着丝点分裂染色体加倍变成32条，C错误；植株X连续自交若干代，纯合子的比例会越来越大，纯合抗病植株比例逐渐升高，D正确。考点：诱变育种和单倍体育种点睛：单倍体育种、多倍体育种及植物细胞工程育种的几个易错点(1)单倍体育种一般应用于二倍体植物，因为若为四倍体植物，通过单倍体育种形成的个体不一定是纯合子。(2)用秋水仙素处理植株使染色体数目加倍，若操作对象是单倍体植株，属于单倍体育种；若操作对象为正常植株，叫多倍体育种，不能看到“染色体数目加倍”就认为是多倍体育种。(3)单倍体育种和多倍体育种都需用秋水仙素处理，使染色体数目加倍。单倍体育种在幼苗期处理，多倍体育种在种子萌发期或幼苗期处理。(4)单倍体育种和植物细胞工程育种，都运用了植物组织培养技术。2、D【解析】

本题考查必修1中植物光合作用中ATP的产生机理。由实验可知，ATP的生成依赖叶绿体类囊体膜两侧的H+浓度差，通过H+的跨膜运输促使叶绿体合成ATP。【详解】A、类囊体存在于叶绿体中，而绿色植物根尖分生区细胞没有叶绿体，错误；B、在绿色植物中合成ATP是在光反应阶段进行的，自然环境下此过程需要光照，错误；C、ATP的合成需要伴随H+运输进出类囊体腔，错误；D、把悬浮液的pH迅速上升为8，类囊体内外产生了浓度差，此时，在有ADP和Pi存在的情况下类囊体生成了ATP，因此可以推测：ATP合成的动力来自H+浓度梯度势能，正确。故选D。【点睛】光反应和暗反应的比较：3、C【解析】

分析能量金字塔：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别代表不同的营养级，从下到上依次是第一营养级、第二营养级、第三营养级、第四营养级，第三营养级就是次级消费者。生态系统实现物质循环的关键成分是生产者和分解者，该能量金字塔食物链可有多条，因为每个营养级生物不只一种，能量在生态系统中不能循环利用。

能量来源：①生产者的能量主要来自太阳能；②其余各营养级的能量来自上一营养级所同化的能量。能量去路：①自身呼吸消耗、转化为其他形式的能量和热能；②流向下一营养级；③残体、粪便等被分解者分解；④未被利用。【详解】A、图中Ⅰ代表生产者，Ⅳ代表消费者，而实现物质循环的关键生态成分是生产者和分解者，A错误；B、同一时间内聚集在一定区域中各种生物的集合，叫做群落，即生态系统中的全部生物组成生物群落，B错误；C、Ⅰ是生产者，主要是绿色植物，所以E1表示的能量主要是通过光合作用所固定的，C正确；D、生态系统中的物质在生物群落和无机环境之间循环，而在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ之间（生产者和各级消费者之间）不能循环利用，D错误。故选C。【点睛】分析能量金字塔知，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别代表不同的营养级，从下到上依次是第一营养级、第二营养级、第三营养级、第四营养级，E1代表生产者固定的太阳能、E2代表热能。4、C【解析】

分析曲线图：0～1h内，原生质体的相对体积不断缩小，说明此时期细胞失水而发生质壁分离；2～3h内，原生质体的相对体积不断增大，说明此时期细胞吸水发生质壁分离的自动复原。【详解】A、在0～1h内浸泡之初，外界溶液浓度＞细胞液浓度，单位时间内水分子通过原生质层由细胞液渗透至外界溶液的数量，多于由外界溶液透过原生质层渗透至细胞液的数量，细胞表现为失水，A错误；B、由图可知，该细胞中原生质体的相对体积先减小后增大，这说明该细胞先发生质壁分离后发生质壁分离的自动复原，由此可推知物质A一开始就能通过细胞膜进入细胞，B错误；C、1～3h内原生质体的相对体积逐渐增大，这说明细胞吸水，由此可推知该时间段内物质A溶液的渗透压小于细胞液的渗透压，C正确；D、细胞壁位于细胞膜外侧，对细胞具有支持和保护作用，因此植物细胞吸水不容易涨破，D错误。故选C。【点睛】本题结合曲线图，考查观察质壁分离及复原实验，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的方法、实验现象等。解答本题的关键是正确分析曲线图，并能从中获取有效信息结合质壁分离和质壁分离复原的满足的条件答题。5、B【解析】

真核生物的基因包括编码区和非编码区，在编码区上游，存在一个与RNA聚合酶结合位点，即本题TATAbox，RNA聚合酶与TATAbox牢固结合之后才能开始转录。【详解】A、TATAbox被彻底水解后得到脱氧核糖、磷酸、A、T共4种小分子，A正确；B、TATAbox属于基因启动子的一部分，mRNA逆转录获得的DNA片段不含TATAbox，B错误；C、RNA聚合酶与TATAbox结合后催化氢键的解开，形成单链开始转录形成核糖核苷酸链，C正确；D、某基因的TATAbox经诱变缺失后，RNA聚合酶没有了结合位点，不能启动基因转录，D正确。故选B。【点睛】本题结合基因中的TATAbox，考查遗传信息的转录和翻译，要求考生识记遗传信息转录和翻译的过程、场所、条件及产物等基础知识，能结合题中信息准确判断各选项。6、A【解析】

图中甲植物将三个基因转入一条染色体上，乙有两个基因转入一条染色体另一个基因转入其同源染色体上。分离定律的实质是随着同源染色体的分离，位于同源染色体上的等位基因发生分离。【详解】甲植株自交，所得子代中含3种抗虫基因的个体占3/4，不含抗虫基因的个体占1/4，即子代中具有较强抗虫特性的个体所占比例为3/4；乙植株自交，所得子代中含3种抗虫基因的个体占1/2，含2种抗虫基因的个体占1/4，含1种抗虫基因的个体占1/4，即子代中具有较强抗虫特性的个体所占比例为1/2+1/4=3/4。故选A。【点睛】本题主要考查分离定律和自由组合定律的相关知识，考查学生的理解能力和综合运用能力。二、综合题：本大题共4小题7、胞吞（膜融合）两种病毒表面的配体蛋白不同，特异性结合的宿主细胞表面受体蛋白也不同，因此侵染的宿主细胞不同在翻译时均先表达出多聚蛋白，然后通过蛋白酶催化剪切多聚蛋白获得多个功能蛋白抑制新型冠状病毒的3CLPro蛋白酶活性这两种药物并不是为新型冠状病毒的3CLPro量身定做的抑制剂。在亲和力和特异性上肯定不是最佳不能，因为新型冠状病毒不是逆转录病毒，不具有逆转录酶和整合酶言之有理即可【解析】

根据题干信息分析，HIV病毒和新型冠状病毒都具有包膜，包膜上有侵染宿主细胞所必需的蛋白质，其中新型冠状病毒包膜上的S蛋白能识别并结合呼吸道上皮细胞表面的受体血管紧张素转化酶2(ACE2)，HIV病毒包膜上的gp120在宿主的T细胞表面的受体则是C04蛋白。两种病毒都是RNA病毒，遗传物质都是RNA，但是遗传信息的传递途径不同，HIV病毒是逆转录病毒，期侵入宿主细胞后发生逆转录、转录、翻译的过程，而新型冠状病毒侵入宿主细胞后，其RNA可以直接作为模板进行翻译，也可以自我复制。【详解】（1）两种病毒的主要成分中的蛋白质和RNA都属于生物大分子，因此两种病毒进入宿主细胞的方式都是胞吞；由于两种病毒表面的配体蛋白不同，特异性结合的宿主细胞表面受体蛋白也不同，因此侵染的宿主细胞不同。（2）根据题干信息分析可知，两种病毒进入宿主细胞的相同之处是在翻译时均先表达出多聚蛋白，然后通过蛋白酶催化剪切多聚蛋白获得多个功能蛋白。（3）根据题意分析，洛匹那韦和利托那韦能与SARS病毒的3CLPro活性中心结合，即通过抑制新型冠状病毒的3CLPro蛋白酶活性治疗新型冠状病毒肺炎，但是这两种药物并不是为新型冠状病毒的3CLPro量身定做的抑制剂，在亲和力和特异性上肯定不是最佳。（4）已知AZT和雷特格韦作用的对象分别是HIV的逆转录酶和整合酶，而新型冠状病毒不是逆转录病毒，不具有逆转录酶和整合酶，因此AZT和雷特格韦不能用于治疗新型冠状病毒肺炎。（5）根据题干信息分析，新型冠状病毒治疗药物的研发思路还有：可以抑制病毒与细胞结合，或者抑制胞吞、抑制装配或释放等。【点睛】解答本题的关键是掌握病毒的相关知识点，了解病毒的基本结构，明确不同的病毒含有的侵染宿主细胞所必需的蛋白质的种类不同，识别的受体细胞也不同，同时不同的病毒进入受体细胞发生的遗传信息的传递过程也不同。8、XaXa×XAYXAXa×XAY能该种群随机交配，雌雄均有多只红眼与白眼性状，故红眼雌蝇有XAXA和XAXa两种基因型，红眼雄蝇有XAY，随机交配子代中白眼全为雄蝇，红眼既有雄蝇又有雌蝇能该种群随机交配，雌雄均有多只红眼与白眼性状，若白眼为显性则既有纯合子又有杂合子，自由交配一代会有性状分离现象，若白眼为隐性则全为纯合子，子代不会出现性状分离【解析】

判断基因是位于常染色体还是X染色体的实验设计（1）已知一对相对性状中的显隐性关系（方法：隐性的雌性×显性的雄性）（2）未知一对相对性状中的显隐性关系--正交和反交利用正交和反交法判断：用具有相对性状的亲本杂交，若正反交结果相同，子一代均表现显性亲本的性状，则控制该性状的基因位于细胞核中常染色体上；若正反交结果不同，子一代性状均与母本相同，则控制该性状的基因位于细胞质中的线粒体和叶绿体上；若正反交结果不同，子一代在不同性别中出现不同的性状分离（即与性别有关），则控制该性状的基因位于细胞核中的性染色体上。【详解】（1）要体现红白眼这对相对性状位于X染色体上，只需要通过杂交使子代的性状在雌雄中表现不一致即可，所以选择XaXa和XAY，子代雌性基因型全为XAXa（红眼），雄性XaY（白眼），或者XAXa和XAY，子代雌性基因型XAXA和XAXa，全为红眼，雄性XAY和XaY，既有红眼又有白眼。（2）①此种群为随机交配了多代的果蝇种群，故用Ⅰ号瓶中的红眼果蝇随机交配，若红眼为显性性状，则红眼雌蝇有纯合个体（XAXA）也有杂合个体（XAXa），红眼雄果蝇基因型为XAY随机交配一代，会出现性状分离，即后代中出现白眼全为雄果蝇，红眼既有雌性也有雄性则可证明红眼为伴X显性遗传，否则子代中只有红眼性状；②用Ⅱ号瓶中的白眼果蝇随机交配，若白眼为显性则既有纯合子也有杂合子，相互杂交子代会有性状分离，若白眼为隐性则全为纯合子，子代不会出现性状分离。【点睛】本题考查伴性遗传的相关内容，答题关键是熟练掌握伴性遗传的特点，和检测个体性状显隐性关系的实验设计。9、染色体分生区镜检（显微观察）细胞有丝分裂中染色体形态、数目EEe：Eee：Ee：ce=1：2：2：1抗：不抗=5：1【解析】

观察细胞有丝分裂实验的步骤：解离（解离液由盐酸和酒精组成，目的是使细胞分散开来）、漂洗（洗去解离液，便于染色）、染色（用龙胆紫、醋酸洋红等碱性染料）、制片（该过程中压片是为了将根尖细胞压成薄层，使之不相互重叠影响观察）和观察（先低倍镜观察，后高倍镜观察）。【详解】（1）四体属于染色体数目变异，要想观察染色体形态和数目，只有用显微镜观察进行细胞分裂的细胞才能看到染色体；分生区细胞进行有丝分裂，可以观察到染色体，且分裂中期是观察染色体形态和数月的最佳时期；四体是7号染色体有四条，确定抗锈病小麦为四体，需要用分生区细胞制成装片，在显微镜下找到处于有丝分裂中期的细胞，观察其染色体形态和数目。（2）根据题意，相关遗传图解如下故可知：子一代测交后代的基因型比例为：EEe：Eee：Ee：ce=1：2：2：1；表现型比例为，抗：不抗=5：1。【点睛】能够正确理解题干信息是解答本题的关键！植物细胞有丝分裂观察的实验基础也是解答本题的必备知识。10、高压蒸汽灭菌灼烧灭菌6末端相连（或相接、相交等意思正确）倒置作为对照组，排除培养基被杂菌污染甘油72培养时间过长，两个或多个菌落连成一个菌落【解析】

1、微生物培养的关键是无菌操作技术，无菌操作过程中的灭菌方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法灭菌。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。2、平板划线操作的基本步骤是：（一）右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口通过火焰，将已冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口通过火焰并塞上棉塞。（二）左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面。（三）烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连。（四）将平板倒置，放入培养箱中培养。【详解】（1）对培养基进行灭菌时，多采取高压蒸汽灭菌法，而对接种环或涂布器灭菌时则用灼烧灭菌法。接种环在每次接种前都要灼烧灭菌，最后一次接种完也要灭菌，所以在固体培养基表面连续进行了5次划线，则需