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文档简介

实验二细胞化学细胞工程目的要求1.掌握甲基绿-派洛咛染色法原理及实验技巧2.了解几种化学成分的显示方法及原理3.观察各种化学成分在细胞中的分布4.了解PCC原理5.了解细胞融合及其应用内容

（一）录像：克隆羊（二）光镜下细胞成分的观察

1糖原（动物肝切片，PAS反应）

2.酸性蛋白（蟾蜍血涂片，酸性固绿染色）３.酸性磷酸酶（鼠腹腔液涂片，金属沉淀法显色）

4.DNA

（兔肝切片，Feulgen反应显色）

５.吖啶橙荧光染色——DNA,RNA（人口腔粘膜上皮细胞涂片，荧光显微镜观察。示教）６.细胞融合（鸡血细胞）

７.ＰＣＣ（Ｈｅｌａ细胞）

（三）操作

制作蟾蜍血涂片（显示ＤＮＡ、ＲＮＡ）原理甲基绿派洛咛是两种碱性染料，与带负电荷的磷酸根形成盐健。甲基绿分子有两个正电荷，易于双链DNA分子结合，使DNA显示绿色，派洛咛分子有一个正电荷，易于单链RNA结合使RNA显示红色。

步骤杀蟾蜍取血↓血涂片↓７０％酒精固定１０分钟↓滴甲基绿－派洛咛，染色3０分钟↓冲洗观察双毁髓法处死蟾蜍

1左手四指下面腹部回拉，拇指背部前推，这样做可减少蟾蜍挣扎的力度。

2杀蛙针从双耳后腺到划的倒三角的顶点（脑髓位置）插入1mm左右，旋转针尖搅动脑髓4，5圈，然后保持针尖在脑髓内的时候放平针尖对贴着下背部从脊柱方向插入脊柱破坏脊髓，抽动1，2次。

蟾蜍就完全失去活动能力了。头部与身体交界处有皱褶捣毁脊髓时后肢强直状剪开腹部皮肤蟾蜍内部结构图蛙血涂片的制作将蛙血滴在载玻片中外1/3处，取另一张边缘光滑的载玻片做推片，将其一端至于血滴前方，向后拉到接触血滴，使血液均匀分散在载玻片与推片的接触处，推片与载玻片呈30-40度角，推片向另一端平稳的推出。如右图所示

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