葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度(版本2)

生物化学与分子生物学教研室xxxQQ:xxxxxxxxxx电话:xxxxxxxxxxx血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响,尿糖检测实验课安排二、注射肾上腺素三、30min（尿糖检测）四、注射后取血五、血糖检测一、注射前取血实验内容：测定血糖浓度，观察肾上腺素对血糖浓度的影响半定量测量尿糖实验要求：掌握葡萄糖氧化酶测定血糖的方法、原理、测定操作、正常参考值、临床意义熟悉尿糖测定及意义血糖的调节血糖过高血糖不足胰高血糖素糖皮质激素血糖的来源和去路血糖氧化分解合成转化H2O+CO2+ATP糖原其它糖、非糖物质食物糖原非糖物质消化吸收分解糖异生胰岛素血糖平衡肾上腺素血糖调节相关神经系统：下丘脑+自主神经尿糖注射葡萄糖血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体提供能量的主要物质，也是体内糖代谢情况的重要生理指标。一）神经系统调节：下丘脑+自主神经二）体液调节，也叫激素调节，有升糖激素和

降糖激素三）还有一些器官：肝、肌肉以及肾脏等化学感受器肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺类激素，主要在应激状态下发挥升高血糖的作用。肾上腺素机制cAMP肝、肌细胞的膜受体血中的肾上腺素磷酸化酶葡萄糖乳酸肝糖原糖酵解乳酸循环级联激活受刺激结合促进肌糖原分解血糖测定方法葡萄糖氧化酶法广泛使用,特异性强、价廉、操作简单福林-吴宪法邻甲苯胺法己糖激酶法超微量还原铁氰化钾法第一步：第二步：Trinder反应H2O2

＋苯酚＋4-氨基安替比林H2O

＋醌亚胺

+O2红色氧化缩合37oC505nm比色测定37oC葡萄糖＋O2＋H2O葡萄糖酸＋H2O2氧化葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶（GOD）辣根过氧化物酶（POD）具体操作（1）空腹称重（已称好）（2）耳缘静脉取血取血部位去毛，接着擦拭酒精，涂二甲苯、凡士林。用三棱针刺破耳缘静脉放血，离心管收集血液2-3ml（干棉球压迫止血），离心，1500rpm，10min，取出放试管架上备用。（3）注射肾上腺素腹侧皮下注射肾上腺素(0.4mL/kg体重)，记录在注射时间，操作如图：9正确抓兔耳缘静脉皮下注射1.注射时，把兔子皮肤提起来，在褶皱处，竖着进针1.5-2cm。2.注射完后等一会再把针头拔出。轻按注射部位。30min后再采血。错误抓兔（5）取4支试管，按下表加入试剂:（6）混匀后，37OC水浴15min；取出冷却，空白管调零，505nm处比色测定。（4）注射后取血:

2-3ml,离心，取出备用。(ml)血糖检测结果记录计算：1.注射前、后的血糖浓度2.注射后血糖浓度增高率A肾-A正A正×100%增高率=C测A测

A标×C标=（mmol/L）家兔血糖正常参考值（5.34-6.62mmol/L)1.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：特异性强，临床常用。检测原理是葡萄糖氧化酶法。2.班氏定性试验：价廉，操作简单，比较常用，但易受尿中还原性物质干扰。尿糖测定14班氏定性试验原理：根据沉淀显色的深浅，对尿糖作半定量检测。(CHOH)nCH2OH++4OH-(CHOH)nCH2OH++H2O2CuOHH2O+黄色碱性葡萄糖葡萄糖酸红色COOH2CuOHCHO2Cu2+Cu2O煮沸分解操作步骤A尿2滴B尿2滴再煮沸5min班氏剂20滴班氏剂20滴煮沸5min待完全沉淀到管底后（10min），对比判断标准判定结果。尿糖结果判断标准尿糖检测结果记录【注意事项】1.微量加样枪的使用2.先加0.02ml，完全冲到管底。3.0.02ml加样要精确下一次实验牛血清白蛋白的分离、纯化及鉴定尿糖：指尿中的葡萄糖。重吸收原尿尿糖