实验十四 血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)

仅供个人参考实十

血胆醇定（固氧酶）胆固醇的测定方很多；通常可分为化学试剂比法、酶法、气相色谱法、高效液色谱法、核素稀质谱法五大类。化学试剂比色中有直接法和间接法；前者可用清直接测定者用溶剂或其它方法提取胆醇后再作定量法于操作简便结果准确，试剂无腐蚀性，且因使用特异性酶，大大减少血液中其它成分的干扰，目前已为测定胆固醇的主要法。【目】1．了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固测定的操作。2.掌血清胆固醇测定的临床意义。【原】血清中总胆固（TC包胆固醇(CE)游离型胆固醇FC),型占70%游离占30%胆固醇酯酶CEH先将胆固醇酯水解为固醇和游离脂肪酸FFA固醇在胆固醇氧化酶（）的作用下氧化成胆甾酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（）催化氢与4-氨基安替比林4-AAP）和酚反，生成红色的醌亚胺，其颜色浅与胆固醇的含量呈正比，500nm波处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇含量。反应式如下：【器】试管、吸管、试架、微量加样器、恒温水浴箱分光光度计。【试】酶法测定胆固醇采用市售试剂盒。1.应用液胆醇酶试剂的成为：磷酸盐缓冲液50mmol/L胆固醇酯酶≥200U/L胆固醇氧化酶≥100U/L过氧化物酶≥000U/L4-氨基安替比林0.3苯酚5mmol/L此外还含有胆酸和Triton，胆酸钠是固醇酯酶的激活剂，表面活性TritonX-100能促进脂白释放胆固醇和胆固醇酯，有于胆固醇酯的水解。不得用于商业用

仅供个人参考2．5.17mmol/L（200mg）胆固醇标准液精确称取胆固醇200mg溶无水乙醇移入100ml量瓶中用无水乙醇释至刻度(也可用异丙醇等配制。【操】取试管3支，编，按下操作。表3-15酶测定清固醇作骤加入物ml）血清胆固醇标准液蒸馏水酶应用液

测定管0.02－－2.00

标准管－0.02－2.00

空白管－－0.022.00混匀后℃水浴保温15分，在500nm波处比色，以白管调零，读取各管吸光度。【算【意项1.疸血清过高的胆红素可还原—部分反应中的HO，低显色反应，使结果偏低。但测定胆固醇，红素对酶法的干扰比化学法小2.胆固醇标准液引起的误差较大，故目前提倡采用胆固醇定值清为标准。3.轻溶血对测定结果无影响，但显溶血可使结果增高，此时用一个不加COD的空白管从结果减去后纠正。4.它影响因素，如维生素C、胱甘肽、氟化物引起偏差。【常考围】3.10～5.70mmol/L【床义1.清胆固醇增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合征、胆管阻塞、甲状功能减退。2.清胆固醇降低常见严重贫血、甲状腺功能亢进、长期营养不良等。【果分】【考】1．胆固醇有哪些重要的生理功能，血清胆固醇升高对机体最严重危害是什么？2．胆固醇在体内可转变为哪些物质，如何排泄？不得用于商业用

仅供个人参考3．实验中需要哪几种酶参加，各有什么作用？不得用于商业用

仅供个人参考仅供个人用于学习、究；不得用于业用途。Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.NurfürdenpersönlichenfürStudien,Forschung,kommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'étudelarechercheuniquementàdesfinspersonnelles;pasàdesfinscommerciales.толкдлялюдей,котореиспо