酮洛芬镇痛作用的研究

酮洛芬镇痛作用的研究1绪论1.1解热镇痛药疼痛是多种疾病的症状，它使患者感受痛苦，尤其是剧痛，还可能引起生理功能紊乱，甚至休克。因此，适当地应用药物缓解疼痛，防止可能产生的生理功能紊乱是很必要的。但疼痛发生的原因不同，应区别不同情况选用不同药理作用的药物。缓解疼痛的药物，按其药理作用及作用机制，可以分为两大类：其一是主要作用于中枢神经系统、选择性地消除或缓解痛觉的药物，在镇痛时，意识清醒，其他感觉不受影响，这类药物称为镇痛药(analgesics)，多用于剧痛；其二是具有镇痛、解热、抗炎作用的药物，对各种钝痛(如头痛、牙痛等)有效。解热镇痛药品种繁多，分类复杂，不良反应多，大致可分为八类。1.1.1水杨酸类水杨酸类是应用最早的解热镇痛药，使用最为广泛和持久的阿司匹林又称乙酰水杨酸。乙酰水杨酸解热、镇痛作用温和确切，抗炎抗风湿作用较强，并且有促尿酸排泄作用。还有抗血小板聚集作用。在解热、镇痛剂量下不良反应较少，大剂量（抗风湿）或长期使用时，对胃黏膜屏障有刺激，且已出现变态反应及出汗等。1.1.2乙酰苯胺类苯胺类衍生物中，以非那西汀使用最早，但因毒性大，目前除少数复方制剂还应用外，均为其活性代谢产物对乙酰氨基酚（扑热息痛）取代，扑热息痛是目前应用量最大的的解热镇痛药物之一。扑热息痛为乙酰苯胺或非那西汀在体内的代谢产物，药用为化学合成品。解热作用与乙酰水杨酸相似，镇痛作用较其弱。对胃肠道刺激小，不引起胃肠道出血。1.1.3吡唑酮类吡唑酮类的代表药物为保泰松。保泰松解热镇痛作用较弱，抗炎作用较强，对炎性疼痛效果好，有促进尿酸排泄作用，对胃肠道刺激性较大，易引起肝炎、黄疸、粒细胞及血小板减少，一般少用。安乃近，吸收作用也快，解热作用显著，镇痛作用较强，久用后可引起粒细胞减少，血小板减少性紫癜等，应严格控制剂量。对本品过敏者可产生休克甚至猝死。1.1.4苯酰酸衍生物双氯芬酸（双氯灭痛）为一种新型强效消炎镇痛药，其镇痛、消炎及解热作用比吲哚美辛强2-2.5倍，比乙酰水杨酸强20-50倍。不良反应少，剂量小，个体差异小。口服吸收迅速，排泄快，无蓄积作用。1.1.5吲哚类有机酸吲哚类有机酸是很强的非选择性环氧酶抑制剂，抗炎、镇痛和解热作用强。自1963年用于临床以来，因不良反应多而且严重，目前临床主要用于抗炎和镇痛，如关节炎、滑囊炎、腱鞘炎、强直性脊椎炎等；对痛经也有较好疗效。吲哚美辛镇痛作用明显，可防止血栓形成，有胃肠道反应，可引起中枢神经系统症状、肝功能损害，抑制造血系统，不良反应较重。舒林酸，对痛性和炎性关节疾病疗效和耐受性较好，较少引起胃刺激和溃疡。1.1.6芳香基丙酸类芳香基丙酸类药物为非选择性环氧酶抑制剂。作用强大，抗炎作用突出，各药除效价存在差别外，其他药理学性质非常相似。布洛芬，抗凝血作用强，胃肠道反应较轻，对血象和肾功能无明显影响。萘普生，作用强，不良反应较少，耐受性好。萘普酮，为前体药物，作用强，不良反应较萘普生、阿司匹林少。异丙嗪为长效抗炎、镇痛新药。抗炎镇痛作用比布洛芬、保泰松、阿司匹林强。在同类药中不良反应轻微，安全性高。1.1.7选择性环氧酶-2抑制剂高选择性的环氧酶-2抑制剂是提供高效低毒的新型解热镇痛抗炎药物的关键所在。近来已合成了多种选择性的环氧酶-2抑制剂，如美洛昔康、塞来昔布和尼美舒利等。临床用于治疗风湿性关节炎、骨关节炎及其他炎症性疼痛。初步显示出此类药物疗效确切，不良反应较轻而且少等优点，但这类药物临床应用的远期疗效及不良反应有待进一步验证。1.1.8邻氯苯甲酸类邻氯苯甲酸类药物属非甾体类消炎镇痛药，如甲氯灭酸、甲灭酸等。口服制剂品种较多，作用相对较慢，某些药物因不良反应较大而被淘汰。1.2酮洛芬的性状酮洛芬为一种常见的芳基丙酸类抗炎镇痛药，英文名称为Ketoprofen，与布洛芬系同类药物。化学名称为α-甲基-3-苯甲酰基苯乙酸，其分子式为C16H14O3，分子量为254.8，别名又为优洛芬，酮基布洛芬，苯酮苯丙酸，凯托洛芬，Orudis，Profenid，Alrheunun等。酮洛芬白色结晶性粉末；无臭或几乎无臭。其在甲醇中极易溶，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶，在水中几乎不溶。熔点约93—96℃。图1酮洛芬的结构式1.2.1酮洛芬的药理及应用为芳基烷酸类化合物。具有镇痛、消炎及解热作用。消炎作用较布洛芬为强，副作用小，毒性低。口服易自胃肠道吸收。1次给药后，约0.5～2小时可达血浆峰浓度。t1/2为1.6～1.9小时。在血中与血浆蛋白结合力极强。在24小时内自尿中的排出率为30％一90％。主要以葡萄糖醛酸结合物形式排出。主要适用于类风湿性关节炎、风湿性关节炎、骨关节炎、关节强硬性脊椎炎及痛风等。且将酮洛芬与15种非甾类消炎药相比，其作用最强。单位质量的酮洛芬的抗炎效力是阿司匹林的160倍。然而，右旋酮洛芬和左旋酮洛芬却有显著不同的药学活性，目前市面上使用上的酮洛芬是由等物质的量的左旋和右旋酮洛芬对映体组成的外消旋体。右旋酮洛芬具有抗炎、抗风湿和镇痛作用，而左旋酮洛芬则几乎无抗炎、镇痛作用通常用作牙膏添加剂，防止牙周疾病。且有实验表明右旋酮洛芬的抗炎镇痛作用与２倍量的酮洛芬相同，左旋体的活体很低。由于两种对映体不同的要药理学性质，而单一对映体表现出良好的药理学活性，因此单一对映体的生产将有广阔的发展前景。1.3酮洛芬的常见剂型1.3.1酮洛芬贴片酮洛芬贴片的英文名为：KetoprofenPatch，为解热镇痛及非甾体抗炎镇痛药。为本品为无色粘胶体涂布于棕色被衬上的贴片剂，主要在局部使用，少量吸收。吸收部分血浆蛋白结合率为99%（老年人可较低）。T1/2为1.6～4小时（平均3小时），60%于24小时内自尿中排出，主要以葡萄糖醛酸结合物形式排出，以原形物排出可达10%。老年人、肝肾功能不全者其清除率下降22%～50%。适用于各种关节炎及软组织疾病所致的局部疼痛。但对阿司匹林或其它非甾体抗炎药过敏者，本品可有交叉过敏反应。对阿司匹林过敏的哮喘患者，本品也可引起支气管痉挛。1.3.2酮洛芬凝胶酮洛芬凝胶的英文名为：KetoprofenGel，同样为解热镇痛及非甾体抗炎镇痛药。本品为透明的无色或淡黄色凝胶，用于创伤性损害（扭伤、腱炎、水肿、挫伤）及疼痛的短期治疗，勿涂于破损部位、湿疹、粘膜及眼内。其药代动力学等与酮洛芬贴片一致。亦对阿司匹林或其它非甾体抗炎药过敏者可有交叉过敏反应；对阿司匹林过敏的哮喘患者，可引起支气管痉挛。1.3.3酮洛芬肠溶胶囊酮洛芬肠溶胶囊英文名：KetoprofenEnteric-coatedCapsules。本品口服易吸收，适用于用于各种关节炎：类风湿关节炎、骨性关节炎、强直性脊柱炎、痛风性关节炎等的关节痛、肿以及各种疼痛，如痛经、牙痛、手术后痛、癌性疼痛等。因为口服药，所以在种种不良反应中相对于贴片和凝胶等剂型，胃肠道反应较为常见，如胃部疼痛或不适、胀气、恶心、呕吐、食欲减退、腹泻、便秘等，严重者可出现上消化道溃疡、出血及穿孔。1.4右旋酮洛芬的常见剂型目前在使用的右旋酮洛芬有：右旋酮洛芬肠溶片、右旋酮洛芬-β-环糊精明胶微球、右旋酮洛芬贴片等。1.4.1右旋酮洛芬肠溶片现在通常用双盲双模拟随机平行对照临床试验的方法来测定右旋酮洛芬肠溶片治疗闭合性创伤和扭伤引起的疼痛的临床疗效和安全性。以酮洛芬片作为对照药。可得出右旋酮洛芬肠溶片组治疗闭合性创伤和四肢扭伤疼痛的有效率为90％,酮洛芬片组的有效率为85％,两组药物的疗效、起效时间与最佳缓解时间均无统计学差异。右旋酮洛芬肠溶片组不良反应发生率为15％,低于酮洛芬片组(35％)。所以可得出结论:右旋酮洛芬肠溶片治疗闭合性创伤和扭伤引起的疼痛安全、有效，并且较之外消旋体酮洛芬更有效。常用的测定人血浆中右旋酮洛芬的方法为HPLC法测定人血浆中右旋酮洛芬的浓度。这种方法简便，准确，重现性好。HPLC法的测定方法为:血浆样品以乙醚为萃取剂，萘普生为内标物；采用Shim-packVP-ODS色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-5mmol/L磷酸缓冲液(22:78,pH=6.8),流速1.0ml/min；紫外检测波长262nm。右旋酮洛芬血浆样品的线性范围为0.02～20.00μg/ml，r=0.9999，n=8。萃取回收率和方法回收率分别为72.28%～75.63%和104.0%～107.8%(n=5)，日内、日间RSD分别为0.6%～6.2%和2.7%～4.8%(n=5)。1.4.2右旋酮洛芬-β-环糊精明胶微球右旋酮洛芬-β-环糊精明胶微球其与比酮洛芬疗效高而不良反应较小，其氨基丁三醇盐吸收快、奇效迅速，制成缓释剂后可明显的降低胃肠道反应。右旋酮洛芬-β-环糊精明胶微球用于一切痛症，适用于短期消除创伤和术后疼痛、肿痛、剧烈痛及各种原因引起的疼痛。片剂或注射液可用于缓解中度至剧烈的术后疼痛，包括腹部、胸部、妇科、口腔、矫形及泌尿科手术。此外，亦可缓解急性肾胶痛、胆绞痛、牙痛、创伤痛、三叉神经痛、癌症内脏痛，以及以往一切需用吗啡或哌替啶才能生效的各种疼痛症。1.4.3右旋酮洛芬贴片现在对酮洛芬非胃肠道给药剂型有较大的研究，其中以对其透皮给药的研究最多。研究发现酮洛芬透皮给药，药物作用于患处，局部药物浓度远远高于口服血药浓度（据报导可以高达100倍以上）；可以减少该药口服时的胃肠道刺激等不良反应；与其它药物相互作用的可能性大大下降；用药方便，可以延长药物的作用时间。制备右旋酮洛芬贴片主要方法为：以CMC-Na（羧甲基纤维素钠）、PVA（聚乙烯醇）为材料制备右旋酮洛芬贴片,并且采用紫外分光光度法测定右旋酮洛芬的含量。右旋酮洛芬在260±2nm有最大吸收,含量测定方法测定回收率为合格即可,并且体外释放符合Higuchi方程，则本方法制备酮洛芬贴剂制备工艺简单,质量控制方法可行，且所制备的贴剂有良好的缓释作用。2实验部分2.1迟发性超敏反应试验超敏反应即异常的、过高的免疫应答。即机体与抗原性物质在一定条件下相互作用，产生致敏淋巴细胞和（或）特异性抗体,如与再次进入的抗原结合,可导致机体生理功能紊乱和（或）组织损害的免疫病理反应，又称变态反应。目前超敏反应可分为4种类型：Ⅰ型超敏反应，又称过敏性变态反应或速发型变态反应；Ⅱ型超敏反应，又称细胞溶解型变态反应或细胞毒型变态反应；Ⅲ型超敏反应，又称免疫复合物型变态反应；Ⅳ型超敏反应，又称迟发性变态反应。为细胞介导免疫的一种病理表现。它是由T细胞介导的。常见的类型是：化学药品（例如染料）与皮肤蛋白结合或改变其组成，成为抗原，能使T细胞致敏。再次接触该抗原后，T细胞便成为杀伤细胞或释放淋巴因子引起接触性皮炎。另一个类型称为传染性变态反应，是由某些病原体作为抗原性刺激引起的，见于结核病、梅毒等。此外，器官移植的排斥反应、接种疫苗后的脑脊髓炎、某些自身免疫病等都属于此型。2.1.1组别设置模型对照组：水10只GC-1大剂量：2g/kg10只GC-1小剂量：0.5g/kg10只GC-2大剂量：2g/kg10只GC-2小剂量：0.5g/kg10只2.1.2试验方法SD小鼠50只，22-24g，随机分组。给药7天后，给药各组每鼠腹部去毛约3cm*3cm，将1％2,4-二硝基氯苯丙酮溶液50μl均匀涂抹致敏。5天后将1％2,4-二硝基氯苯丙酮溶液10μl涂抹于小鼠右耳两面进行攻击。攻击后24h，颈椎脱臼处死小鼠，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重，同时取小鼠胸腺及脾称重。以左右耳重量之差为肿胀度。分别以每10g小鼠的脾重（mg）和胸腺重（mg）作为脾指数和胸腺指数。2.2小鼠扭体试验在基础医学研究中筛选镇痛药的常用致痛方法概括有物理法（热、电、机械）和化学法。动物的疼痛反应常表现出嘶叫、舔足、翘尾、蹦跳及皮肤、肌肉抽搐。化学法，即将某些化学物质，如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等，涂布于动物的的某些敏感部位或腹腔注射。腹腔注射损伤物质引起受试动物腹痛，动物表现出“扭体反应”（即腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起）。本实验将0.6％醋酸直接腹腔注射，刺激腹膜引起持久的疼痛反应，致使小鼠出现“扭体反应”。镇痛药物可以抑制动物的“扭体反应”，本法敏感、简便、重复性好。2.2.1组别设置模型对照组1：水15只GC-1大剂量：2g/kg12只GC-1小剂量：0.5g/kg12只GC-2大剂量：2g/kg12只GC-2小剂量：0.5g/kg10只模型对照组2：水13只GC-3大剂量：5g/kg14只GC-3中剂量：2g/kg14只GC-3小剂量：0.5g/kg14只2.2.2试验方法SD小鼠22-24g，随机分组。各组小鼠给药6h后再给药一次，30min后腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，记录扭体潜伏期及15min内小鼠的扭体次数，按公式计算镇痛效果。抑制率％＝（NS组扭体次数-给药组扭体次数）/NS组扭体次数*100％2.3免疫试验2.3.1组别设置正常对照组：水10只模型对照组：水20只GC-1大剂量：2g/kg9只GC-1小剂量：0.5g/kg11只GC-2大剂量：2g/kg11只GC-2小剂量：0.5g/kg11只2.3.2试验方法各组小鼠给药第6天，除正常组外其余各组用60mg/kg环磷酰胺腹腔注射造模，造模后第2天，腹腔注射20％羊红细胞0.2ml/只免疫动物。1、免疫后第5天，股动脉放血处死小鼠,室温放置数小时后分离血清。①血清溶血素：部分血清800倍稀释后，吸取0.5ml稀释血清放入另一试管中，依次加入20％羊红细胞、补体、生理盐水各0.5ml，空白管用生理盐水代替血清，混匀，置37℃温箱温育0.5h，然后3000r/min离心5min，取上清夜在540nm处测定OD值，按公式计算溶血素含量：溶血素IgM=样本血清的OD值*稀释倍数②血清凝集素：部分血清用生理盐水作倍比稀释。吸取稀释的血清0.5ml加入另一试管中，加入0.5％羊红细胞0.5ml，混匀，加盖并放置37℃温箱温育3h。观察红细胞凝集程度，一般分5级记录，并按公式计算抗体积数：抗体积数＝ε（S1+2S2+3S3+4S4+……nSn）2、巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验：处死的小鼠立即腹腔注射Hngks液2ml，轻柔腹部1min，然后吸出腹腔洗液，离心取下沉液，于5％鸡红细胞按1:5比例混合，37℃孵育30min，每10min摇动一次。离心，取细胞沉淀悬液涂片。1:1丙酮-甲醇溶液固定5min，Giemsa染色。油镜下计数巨噬细胞，含吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。按公式计算吞噬百分率和吞噬指数：吞噬百分率＝吞噬红细胞的巨噬细胞/巨噬细胞，吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞数/巨噬细胞3、脏器系数：取小鼠胸腺及脾称重，分别以每10g小鼠的脾重（mg）和胸腺重（mg）作为脾指数和胸腺指数。3结果与讨论3.1迟发性超敏反应表1GC对小鼠迟发性超敏反应的影响体重（g）胸腺系数脾脏系数肿胀度模型组27.6±3.20.0057±0.00080.0021±0.000554.3±21.9GC-1大28.7±2.70.0061±0.00090.0022±0.000464.6±20.7GC-1小30.2±2.10.0057±0.00080.0019±0.000544.4±25.4GC-2大28.3±2.80.0061±0.00080.0019±0.000493.5±43.3*GC-2小28.9±3.00.0056±0.00060.0021±0.000673.8±21.8注：*P<0.05GC-1和GC-2各剂量组小鼠的左右耳重量差值均大于对照组，其中GC-2大、小与对照组的差异具有显著性(P<0.01)，表明GC能提高2,4-二硝基氯苯丙酮溶液诱导小鼠耳肿胀程度，具有促进迟发型变态反应的作用。3.2小鼠扭体试验表3GC对小鼠扭体试验的影响潜伏期（s）扭体次数抑制率（％）模型组1316±30618.0±15.4GC-1大347±27815.9±13.811.6GC-1小276±21017.3±9.64.17GC-2大222±13025.3±10.8-40.3GC-2小322±27419.8±16.3-9.8模型组2167±9129.2±15.4GC-3大805±2482.2±5.692.63GC-3中376±3557.8±9.773.4GC-3小213±20919.6±18.332.8GC-1大、小剂量各组小鼠和GC-3大、中、小剂量各组小鼠，15min内扭体次数均较模型对照水组显著减少（P＜0.05），其扭体反应抑制率分别为11.6%、4.17%和92.63%、73.4﹪、32.8%，表明药物对醋酸致小鼠腹痛具有明显镇痛作用。与水组比较，P＜0.05，P＜0.001。3.3免疫试验3.3.1GC对小鼠脏/体比值的影响表4GC对小鼠脏器、溶血素及凝集素的影响体重（g）脾脏系数胸腺系数溶血素凝集素正常组23.6±2.50.0060±0.00060.0034±0.0012126±181192±84模型组19.4±2.20.0076±0.00240.0027±0.0012386±212229±72GC-1大剂量20.8±2.30.0095±0.00320.0032±0.0012142±157193±89GC-1小剂量20.9±1.50.0084±0.00150.0044±0.0013297±219252±73GC-2大剂量21.2±3.10.0091±0.00240.0026±0.0010530±201185±30GC-2小剂量19.6±1.30.0094±0.00290.0031±0.0016325±258137±65GC-1大、小剂量组的脾脏/体重及胸腺/体重比值分别为0.0095±0.0032，0.0084±0.0015和0.0032±0.0012，0.0044±0.0013；GC-2大、小剂量组的脾脏/体重及胸腺/体重比值分别为0.0091±0.0024，0.0094±0.0029和0.0026±0.0010，0.0031±0.0016，分别与正常组与模型组的0.0060±0.0006，0.0076±0.0024和0.0034±0.0012，0.0027±0.0012比较，差异均无显著意义(P>0.05)，提示GC小鼠的免疫器官重量无明显影响。GC各剂量组小鼠的血清溶血素抗体积数均高于阴性对照组，大、小剂量组与对照组的差异具有显著性（P<0.05），表明GC具有提高小鼠血清溶血素水平。3.3.2GC对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响表5GC对小