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ICS11.220辽宁省地DB21方标准DBT3256—2020LoopmediatedIsothermalAmplificationLAMPforRapidDetectionforAfrican辽宁省市场监督管理局发布前言T、刘近、吴洪涛、任雪建、赵培、李蓉、章春燕、吕园园、陈腾。依法进行评估及复审。标准起草单位通讯地址：辽宁省动物及产品检疫中心(沈阳市沈河区万柳塘路105号甲)，联系电非洲猪瘟病毒等温扩增快速检测方法规定了非洲猪瘟病毒等温扩增快速检测方法的技术要求。洲猪瘟病毒核酸的快速检测。范性引用文件(包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求理h内完成扩增，用于非洲猪瘟病毒的核酸检测。4仪器和器材4.1高速台式冷冻离心机(离心范围0~20000r/min)试剂和引物5.1样品处理剂5.2ASFV-R-Mix5.3Bstenzyme5.5阳性对照5.6阴性对照骤L样品的采集、前处理、存放与运输LL采样注意事项次性手套，样本间不得交叉污染。LZ采样工具mlml1℃高压灭菌20min；剪刀、镊子经160℃干热灭菌2h，无菌管(真空采血管)。Lt组织病料的采集与前处理LV全血及血清样本的采集与前处理使用含有抗凝血剂(EDTA-紫色盖)的无菌管(真空采血管)从耳静脉或前腔静脉采集血液3ml~5lminLg存放与运输的样品在2~8℃条件下保存应不超过24h；若需长期保存，应放置-70℃冰箱，但应室生物安全技术管理规范》进行样品的生物安全标识。t核酸扩增lL条件与结果判定LL成立条件结果判定实验室生物安全要求GB行。AA(规范性附录)A.1样品处理剂的制备量取80mlPBS(0.01mol/L，pH值7.4)，加入10μlNP40(乙基苯基聚乙二醇)，无菌纯化水A.2ASFV-R-Mix的制备A.2.1引物合成物(F3与B3)和1对环引物(LF与LB)，均由上海生工生物工程股份有限公司合成，序列为：F3：B3：A.2.2TAACGCCACTATGCAGCCCACGGAAGAGCTGAATCTCTATCCTCAACATGTGCGAACTTGTGCCACATACCTGGAACGTCTCC3'ATAGGTAATGCGATCGGATACA'CCAACAATAACCGCCACGCTCGCCACGCAAAGATAAGCAGCCTCGGTGTTGATGCGGATT'取3对引物(FIP、BIP、F3、B3、LF和LB)干粉，按引物说明书分别加入适量无菌纯化水，溶解混置-20℃保存。A.2.3ASFV-R-Mix的配制0.8μmol/L环引物溶液，加入无菌纯化水定容至100ml，经过0.22μm滤器过滤除菌，分装至2ml蓝A.3Bstenzyme的制备用于制备本试剂盒的Bstenzyme为商品化DNA聚合酶，按使用说明书用纯化水稀释至4×106/L，分用于制

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