实验室监测情况及生物安全

实验室监测情况及生物安全第1页/共144页实验室监测内容提要AFP麻疹流感流脑肝炎综合监测标本采集与运送第2页/共144页河南省脊灰实验室成立于1966年1992年加入国家脊灰实验室网络通过每年国家脊灰实验室组织的职能考核(盲样)1997、1999、2000、2002、2004、2007和2009年通过世界卫生组织现场认证目前成员3人第3页/共144页AFP实验室监测第4页/共144页历年标本检测情况第5页/共144页河南省2010年AFP监测情况报告AFP病例612例，非AFP病例9例15岁以下儿童报告发病率2.47/10万采集AFP标本600例接触者病例8例外省病例4例第6页/共144页2010年合格标本采集情况

共采集600例AFP标本，单份便9例，采双份便591例，其中合格标本501例，不合格标本90例第7页/共144页2010年实验室监测指标7天内上细胞分离培养率（%） 96.5粪便标本28天内实验结果报告率（%） 94.4粪便标本中PV分离阳性率（%） 2.7粪便标本中NPEV分离阳性率（%） 21PV分离物14天内送国家脊灰实验室率（%） 100PV分离定型结果与国家脊灰实验室符合率（%） 100第8页/共144页河南省脊灰实验室历年数据比较监测指标200220032004200520062007200820092010检测标本例数574570527554586565499532600双份便559560523545571567493525591单份便954698679AFP病例报告发病率（1/10万）2.42.42.32.32.52.42.12.22.5双份合格粪便标本采集率（%）86.48586.486.385.684.39189.683.5粪便标本采集后7天内送样率（%）90.19688.989.1889096.496.694.37天内上细胞分离培养率（%）92.69297.393.590.195.690.895.596.5粪便标本28天内实验结果报告率（%）92.69599.899.896.695.896.898.194.4PV分离物14天内送国家脊灰实验室率（%）93.644.110010055.292.846.753.5100PV分离定型结果与国家脊灰实验室符合率（%）100100100100100100100100100粪便标本中PV分离阳性率（%）10.865.74.95532.82.7粪便标本中NPEV分离阳性率（%）56.912.716.918.812.917.22521第9页/共144页第10页/共144页2010年PV阳性分离物月份分布图第11页/共144页2010年PV型别分布图第12页/共144页非脊灰病毒近年来非脊灰样病变增多2010年共分离到51例71株地区上无聚集性分布第13页/共144页脊灰抗体水平监测结果地市年龄组总人数I

II

III

阳性率（%）阳性人数滴度阳性率（%）阳性人数滴度阳性率（%）阳性人数滴度周口太康县2`331100.031128.00100.0031139.98100.003164.00

5`632100.03296.59100.003268.3096.903142.41

13`153290.62922.1490.602918.6284.38278.92

18+4881.34013.0785.404114.6772.90358.35

新乡原阳县2`331100.031122.40100.0031163.6983.902629.26

5`63193.52943.76100.003125.02100.003114.96

13`1532100.03226.59100.003222.2778.102510.77

18+62100.06232.0093.505816.3693.505813.38

1.00安阳安阳县2`33591.433227.3197.143461.5191.433223.31

5`63892.113523.997.373746.94100.003820.66

13`153296.883120.7587.502819.8796.883113.75

18+5570.91397.880.004410.8380.004410.56第14页/共144页脊灰抗体水平结果分析

当连续多年无病例发生时,人群中抗体的获得主要是依靠疫苗的免疫接种,且抗体阳性率及几何平均滴度（GMT）取决于相应疫苗的免疫接种率及接种质量。我省健康人群I,II,III型脊灰中和抗体阳性率均保持在较高水平,这是不断提高脊灰疫苗常规接种率和连续多年开展强化免疫的成效。尤其是5~6岁以下各年龄组的脊灰中和抗体阳性率与GMT处于较高水平,这与免疫程序有关(1岁内开展3次脊灰疫苗基础免疫,18月龄、4足岁开展2次加强免疫)第15页/共144页免疫成功率监测结果地市型别人数（对）抗体阳性数抗体阳转阴人数免疫前高于免疫后抗体免疫前后抗体无变化抗体转阳人数抗体四倍增高人数免疫成功总人数免疫成功率（%）免前免后安阳县I3325311347182575.8II28320434222678.8III27284525172266.7原阳县I3022300558122066.7II25281374151963.3III19234310851343.3第16页/共144页免疫成功率结果分析安阳县33对血清样品，免疫前抗体GMT（I、II、III）分别为17.04、22.87、14.40；免疫后抗体GMT（I、II、III）分别为302.84、358.26、74.14。原阳县30对血清样品，免疫前抗体GMT（I、II、III）分别为9.62、14.25、6.06；免疫后抗体GMT（I、II、III）分别为82.52、125.08、18.38。第17页/共144页OPV监测结果

单位批号生产单位结果logTCID50/粒

1原阳县CDC2009091007中国医学科学院医学生物研究所62漯河市CDC2009091001中国医学科学院医学生物研究所5.83临颍县CDC2009080232中国医学科学院医学生物研究所64临颍固厢乡卫生院2009080232中国医学科学院医学生物研究所5.95濮阳县CDC2009091014中国医学科学院医学生物研究所5.76濮阳县胡状乡卫生院2009091014中国医学科学院医学生物研究所5.87二七区CDC2009091307中国医学科学院医学生物研究所5.88二七区侯寨卫生院2009091003中国医学科学院医学生物研究所6.2第18页/共144页OPV效价监测分析

根据国内配比3价脊髓灰质炎糖丸疫苗出厂合格总剂量为5.7logTCID50/粒，以上监测单位的OPV效价均达标。第19页/共144页讨论PV分离率较08年以前有大幅度降低，并且在所有16例AFP病例脊灰病毒分离物中，31.25%(5例)是两种以上型别疫苗株病毒的混合物，且集中在冬季强化免疫活动以后，很可能是在AFP病例发病后给病人口服OPV再采集粪便标本，这样会导致人为提高了PV分离率，加大了实验室的工作量,并给临床确诊带来一定的困难。为提高采集粪便标本的质量必须进一步加强基层工作人员的培训工作，增强AFP病例报告意识和主动监测能力，增强及时发现AFP病例并采集、送检合格粪便标本的意识，杜绝在麻痹后采便前给病人服用脊灰疫苗的做法，提高合格粪便标本的采集率及送检率，确保实验室监测的准确性和可靠性。第20页/共144页IsolationRateofpoliovirusandNPEVfromAFPcasesduring

2000–2011.4

2000-2011年4月AFP病例中PV和NPEV的分离率

21第21页/共144页2010年分离株和疫苗株相比VP1编码区核苷酸变异数

22TypeITypeIITypeIII第22页/共144页AFP病例监测目的

及时发现输入性脊灰野病毒，采取措施防止病毒传播，保持无脊灰状态。及时发现脊灰疫苗衍生病毒（以下简称VDPV）及其循环，采取措施控制病毒进一步传播。评价免疫工作质量，发现薄弱环节。监测脊灰病毒变异情况，为调整疫苗免疫策略提供依据。第23页/共144页监测系统及时性评价指标

2010年国家级监测系统所有指标均达到卫生部和WHO的要求AFP病例监测报告（包括“零”病例报告）及时率≥80%；

AFP病例报告后48小时内调查及时率≥80%；

AFP病例14天内双份合格大便标本采集率≥80%；

AFP病例大便标本7天内送达省级脊灰实验室及时率≥80%；

省级脊灰实验室28天内完成AFP病例大便病毒分离及时率≥80%；

阳性分离物在14天内送国家脊灰实验室的及时率≥80%；

国家脊灰实验室7天内完成省级送达的阳性分离物型内鉴别的及时率≥80%；

需进行核酸序列分析的阳性分离物应在完成病毒型内鉴别后14天完成序列检测；

AFP病例麻痹60天内完成病毒型内鉴别及时率≥80%；

AFP病例麻痹75天内随访及时率≥80%；第24页/共144页1959-1961，发明了口服脊灰活疫苗。AlbertB.Sabin,M.D.

发明了口服减毒活疫苗。第25页/共144页脊灰病毒分类“型”指脊灰毒株的血清型，通过血清抗体中和试验方法定型目前，根据与同型Sabin株VP1区核苷酸序列差异，将脊灰病毒划分为三类：Sabin-like(SL)：与Sabin株VP1区核苷酸序列相比，变异率<1%脊灰疫苗高变异株病毒：病毒与原始疫苗株相比，衣壳蛋白1区（VP1区）核苷酸序列变异介于0.5%～1%之间（有5～8个碱基发生变异）。VDPVs：与原始疫苗株病毒相比，VP1区核苷酸序列变异介于1%～15%。脊灰野病毒：与原始疫苗株病毒相比，VP1区全基因序列变异超过15%，或者是既往国内外流行过或与既往国内外流行过的脊灰病毒高度相似的病毒。----《脊髓灰质炎野病毒输入性疫情和疫苗衍生病毒相关事件应急预案（试行）》第26页/共144页脊灰病毒引起的病例分类VAPPVDPVs病例：从AFP病例粪便、咽部或脑脊液、脊髓组织标本分离到VDPVs，经省级专家诊断小组鉴定，临床不能排除脊灰诊断的病例。cVDPVs：由相关的脊灰疫苗衍生病毒引起的2例或以上脊灰疫苗衍生病毒病例的事件。脊灰野病毒病例：粪便、咽部或脑脊液、脊髓组织标本脊灰野病毒检测阳性，临床诊断符合脊灰的病例。脊灰野病毒由境外传入者，为输入性脊灰野病毒病例。第27页/共144页循环的VDPVs(cVDPVs)指在人与人之间传播着的VDPVs；免疫缺陷VDPVs(iVDPVs)患者长期向外环境中排出VDPVs，分离于患有免疫缺陷的慢性排毒者；未归类VDPVs（aVDPVs）指分离自非免疫缺陷患者或与爆发无关的单个VDPV，或从环境中分离到的VDPV，这些VDPV暂时无法归类到第1、2类VDPV中。已经证实有3种VDPVs第28页/共144页所谓VDPV，是指那些有明确证据表明，循环的时间显著超过OPV在服苗者体内正常繁殖的时间的脊灰病毒。

I型OPV------最长14天

II型OPV------最长72天

III型OPV------最长72天VDPV只能依赖于VP1区核苷酸序列测定来确定（所以划分标准有些武断）；对于所有来源于OPV的脊灰病毒，都必须进行VDPV的筛查，并做进一步的生物学特征鉴定。29第29页/共144页尼日利亚和刚果发生II型cVDPVs循环病毒的数量(百分比)与Sabin2相比，VP1区核苷酸变异的个数现在的VDPV30第30页/共144页II型疫苗株病毒数次被发现与cVDPV相关，但是不满足现行的cVDPV的标准；一些国家或地区（AFP病例或接触者）中分离到的脊灰疫苗变异株VP1区核苷酸变异在0.5%-1%之间，但在时间或空间上呈现聚集性，VP1区核苷酸序列显示这些病毒是单一来源进化的，有明显的相关性，即病毒学证据提示这些病毒发生了循环。31第31页/共144页WHO建议更改II型VDPV的定义与Sabin2株相比，VP1区核苷酸序列变异个数大于等于6，应该被报告为VDPV；对cVDPV或iVDPV的评估和控制措施不变；实验室检测方法不变；I型和III型VDPV的定义不变。一变三不变32第32页/共144页

TheSequencingResultof

2010byNPLTypeFrom

No.<0.5%

≥0.5%<1%≥1%

AFP524480

NO-AFP00001contact101000

Floating5500

Health272340

Total9482120

AFP100926（1）2

NO-AFP00002contact6510

Floating752（1）0

Health1082（1）0

Total123110112

AFP7966131

NO-AFP55003contact212100

Floating8710

Health221831

Total135117172备注：2型中，（1）表示核苷酸等于6个变异3型中，79株中有1株重组株，变异率<0.5%第33页/共144页1996-2010年中国II型脊灰病毒的序列分析病毒分离株的数量与Sabin2相比，VP1区核苷酸变异的个数现在的VDPV新的VDPV34第34页/共144页WHO在对众多国家和地区对II型脊灰疫苗病毒VP1区核苷酸变异在0.5%-1%的毒株循环进行了深入研究和总结，发现II型更容易发生循环，建议更改II型VDPV定义标准，为早期发现和阻断II型病毒的循环争取宝贵的时间。对脊灰消灭计划的影响：对实验室检测和报告没有影响；对报告病例（未引起循环）的后续追踪调查影响没有明显提升。35第35页/共144页2007年脊髓灰质炎病毒VP1区核苷酸序列分析姓名家庭住址f1结果f2结果核苷酸变异张义晨淅川县城关镇脊灰I+II型疫苗株阴性5个程欣永城市侯岭程乡脊灰II型疫苗株脊灰II型疫苗株5个董永超濮阳县徐镇脊灰II型疫苗株脊灰II型疫苗株6个第36页/共144页接触者标本的采集（1）AFP病例接触者（2）VDPV病例、输入性脊灰野病毒病例接触者（3）高危AFP病例和聚集性临床符合病例

第37页/共144页接触者标本的采集-AFP病例接触者

以下情况应采集AFP病例的5名接触者（原则上5岁以下）大便标本。1）每年AFP病例大便标本数少于150份的省；2）未采集到合格大便标本的AFP病例；3）根据临床或流行病学资料高度怀疑为脊灰的AFP病例；4）死亡的AFP病例。

第38页/共144页原始标本运送（1）标本采集后要在7天内送达省级脊灰实验室，标本应冷藏运送，在送达省脊灰实验室时带冰且包装完整。标本的运送要符合国家对标本运送的有关要求。（2）采集的标本应有完整的登记资料，一并送达省脊灰实验室。标本标签登记要清楚，标本送检表项目要填写完整。第39页/共144页AFP粪便标本采集注意事项-1采集标本需使用统一配发的一次性无菌采样管。不要使用玻璃容器、药瓶、塑料袋、纸盒等其它容器，这些容器容易泄漏造成生物安全事故。请各地市及时检查采样管数量，不足时及时补充。采样管需标识清楚。采样管上需标识病人姓名，采样时间，第一份或第二份。采集标本量需足够且适量。大便标本需采集5-8克，采样管半管即够，不要装满，防止冷冻后体积膨胀溢出。第40页/共144页AFP粪便标本采集注意事项-2带冰运送和保存。脊灰病毒耐冷怕热，为提高病毒检出率，采集标本后需及时带冰送至省疾控中心脊灰实验室，如不能及时运送，需保存在-20℃条件下。运送时必须用冷藏包或保温筒/杯运送，，建议使用非水性保冷袋，防止冰块融化后污染标本，请根据各地市路程远近及所需时间带足够量冰袋（块），如使用冰块，请将冰块用自封袋（双层）密闭包装，标本也需单独密封包装（推荐使用自封袋）。第41页/共144页AFP粪便标本采集注意事项-3发病后不要服苗。确需服苗的采集标本后再服苗。采双份粪便标本。双份便采集间隔时间为24-48小时内，即超过24小时，不超过48小时。接触者标本需及时采集并送至河南省疾病预防控制中心。如可能请同时采集，不能同时采集的请及时通知病例所在地疾控中心。第42页/共144页麻疹实验室监测第43页/共144页我们需要实验室网络来做麻疹监测工作吗？Doweneedlabtodothesurveillancework?

麻疹measles

风疹rubella

细小病毒Ｂ１９第44页/共144页Measlescasedefinition麻疹病例的临床诊断‘Casewithfeverof>38OC,maculopapularrash,witheithercough,coryzaorconjunctivitisoranycasewhichaphysicianthinksismeasles’发热》38OC，出现斑丘疹和至少伴有以下一种症状：咳嗽，鼻炎或结膜炎或医务人员疑为麻疹EchovirusesEcho病毒Measles麻疹ParvovirusB19微小病毒B19Dengue登革热HHV-6Rubella

风疹Others其它实验室在麻疹诊断和鉴别诊断中的作用－消除阶段越显重要Theimportantroleoflaboratoryinmeaslesdiagnosisanddifferentiatediagnosis

第45页/共144页在麻疹控制和消除中扮演重要的角色可疑麻疹病例血清学诊断麻疹疫苗相关病例的诊断血清流行病学研究麻疹疫苗质量和免疫效果的评定通过分子流行病学研究，鉴定病毒的传播来源，传播路线，是本土，还是输入实验室网络在麻疹强化控制和消除中提供有效的科学支持

实验室网络职能第46页/共144页中国麻疹实验室网络的建立

2001年，在中国卫生部、中国CDC、IVDC、WHO和US-CDC的支持下，建立了中国麻疹实验室网络。

中国的麻疹实验室网络覆盖了31个省份（直辖市）、

331个地市。2003年国家麻疹实验室被任命为西太区地区参比实验室。第47页/共144页河南省麻疹实验室及网络的建立1999年我省开始WHO/CDC协作项目；2000年全省装备市级麻疹实验室,配备实验器材及设备.2001年全省18市级麻疹实验室监测网络通过省级实验室考核认证，承担起各市麻疹防治的常规运转监测任务。2002-2007年省级负责对市级麻疹实验室网络进行每年一次的职能考核，公布盲样血清考核及血清复检再证实结果并颁发合格证书。第48页/共144页31个省级实验室国家麻疹实验室WHO西太区参比实验室331个地市级实验室

麻疹病毒分离株的基因定型开展省级麻疹实验室的质量控制和考核认证为各省实验室网络的建设提供技术支持麻疹病毒分离和鉴定

(中和实验，PCRPCR-RFLP,realtimePCR）开展地市级麻疹实验室的质量控制和考核认证为各地市级实验室网络的建设提供技术支持疑似麻疹病例的实验室血清学诊断标本的采集

我国三级麻疹监测实验室网络框架执行WHO西太去麻疹风疹参比实验室职能和国家麻疹实验室职能第49页/共144页实验室网络在麻疹强化控制和消除中扮演重要的角色部分县级疾控机构也开展了血清学检测工作31个省级实验室1个国家麻疹实验室/WHO西太区参比实验室331个地市级实验室

麻疹病毒分离株的基因定型麻疹病毒分离和鉴定

(RT-PCR,PCR-RFLP,rRT-PCR）标本的采集疑似麻疹病例的血清学诊断各上级实验室对下级实验室进行质量控制和考核认证提供技术支持我国各级麻疹网络实验室各司其职，为消除麻疹提供实验室技术平台和科学保障第50页/共144页~50%麻疹散发疑似病例为实验室证实的2010年疑似麻疹散发病例的血清学证实数据来源：麻疹监测信息报告管理系统《全国麻疹监测方案》要求：麻疹散发疑似病例血标本采集率应

>80%（79.62%）第51页/共144页2010年疑似麻疹爆发病例的血清学证实《全国麻疹监测方案》要求：麻疹爆发疫情血清学确诊率应>90%

采集病原学标本的爆发疫情应>80%数据来源：麻疹监测信息报告管理系统第52页/共144页麻疹监测方案的制定标准操作规程生物安全规范各级实验室职能血清和病毒库信息数据库技术储备系统运作执行WHO西太去麻疹风疹参比实验室职能和国家麻疹实验室职能第53页/共144页《全国2006－2012年消除麻疹行动计划

》要求当以省为单位麻疹发病率较高时，有条件可以开展麻疹疑似病例监测，重点进行麻疹暴发疫情的监测。当发生麻疹暴发疫情时，应按相关要求采集患者出疹早期鼻咽拭子、尿液或血液等标本，及时送省级麻疹实验室进行病毒分离。第54页/共144页麻疹实验室网络的运转---麻疹可疑病例的血清学诊断---麻疹的血清流行病学---省级麻疹病毒学监测情况---省级对地市级实验室网络质量控制和考核认证

---国家实验室对省级实验室的血清再证实情况第55页/共144页麻疹控制的不同阶段

对实验室血清学诊断和病毒监测的要求

阶段实验室职能发病形式IgM检测病毒监测强化控制阶段ＮＯ散发NoNo初始病例

爆发

Yes

初始5-10病例的检测Yes

5-10标本消除阶段所有散发Yes

所有Yes

所有初始病例爆发Yes

初始5-10病例的检测Yes

5-10标本第56页/共144页背景－麻疹流行地区的麻疹基因型分布C2B3D2B3B2B3D4D8D4H1D9G3G2H2D5D4D8D4D6D6D7C2D6D4B3H1D10B3D3Rota,P.A.2003.Updateontheglobaldistributionofgenotypesofwildtypemeaslesviruses.JInfectDis187Suppl1:S270-6.第57页/共144页河南省麻疹网络实验室认证或认可情况2000年、2002年、2004年、2007国家CDC/WHO专家对河南省级实验室及郑州、濮阳、安阳、洛阳等市级麻疹实验室现场进行评审,均顺利通过。2000年-2006年我省送往国家级麻疹血清标本证实工作,六年中有五年符合率100%.2001年-2006年接受国家级麻疹盲样考核连续六年成绩均为100分,并发给了证书.2000-2008年每年省级对18市级麻疹实验室进行职能考核认证和血清抽检再证实工作,并发放成绩单或合格证书.第58页/共144页麻疹、风疹散发病例IgM检测结果统计年份麻疹散发病例病例总数采集血标本数IgM检测阳性数麻疹风疹2010.1～12月2931230315821002011.1～3月2201967725合计315124991659125第59页/共144页麻疹、风疹散发病例IgM检测结果统计年份风疹散发病例病例总数采集血标本数IgM检测阳性数麻疹风疹2010.1～12月14641181922011.1～3月26731128合60页/共144页麻疹、风疹暴发疫情血清学确诊分析年份麻疹暴发起数累及病例数病例<10例起数血清学确诊起数血清学确诊比例采集病原学标本起数采集病原学标本比例病原学确诊起数2010.1～12月1343121292.3%17.7%12011.1～3月00000000合计1343121292.3%17.7%1第61页/共144页2010年分地区发病数及血清采集情况第62页/共144页麻疹血清学监测—标本采集后7日内报告率（%）第63页/共144页071421283542-7-14-210246810RashOnse出疹tDaysafterrashonset出疹天数IgGIgMInfection感染Relativelevelsofantibody相对抗体水平消除阶段：麻疹病例和接触者的隔离必要日期:最后接种日期出疹日期出生日期IgMsensitivity~70%IgM敏感性—70%virusexcretion排泄病毒标本的采集:IgM：单份血清，出疹0-28天分离:

尿液，N/S，出疹0-5天

麻疹病毒感染人体后抗体动态和病毒的排泄第64页/共144页有最近免疫史的IgM阳性可疑病例麻疹消除阶段-疫苗相关病例会显现出来疫苗相关病例：容易误诊为麻疹病例，病毒基因序列是金标准第65页/共144页可疑麻疹病例血清学检测策略-强化控制阶段出疹２８天内单份血清

可疑麻疹病例suspectedmeaslescases麻疹IgMmeasles

阳性positive阴性negative

证实麻疹confirmedM

风疹IgMrubella

阳性P阴性N

证实风疹confirmedR排除discard第66页/共144页

风疹IgMspectedCase可疑病例的血清

阳性阴性

证实为风疹 麻疹IgM

阳性阴性

证实为麻疹丢弃可疑麻疹病例血清学检测策略-在接近或达到麻疹消除阶段：先检测风疹，或同时检测麻疹和风疹第67页/共144页麻疹病毒学监测1993-2010年麻疹病毒分离株YearIsolatesNo.1993-2003297200467200521320062342007276200835120092772010278Total1993第68页/共144页1993-2010年麻疹病毒学监测结果自2009年起，连续发现6起麻疹输入事件：1D4，2D9,3D11;其中D11是我国于2009年首次在全球发现并命名的新基因型，该新基因型的鉴定已经得到了WHO和USCDC的认可；该新基因型麻疹病毒于2009年12月引起了我国云南孟连县的麻疹爆发，流行病学上证实是从缅甸输入的，由于缅甸所在的东南亚区尚未开展麻疹病毒的监测工作，D11新基因型麻疹病毒的首次发现对于WHO东南亚区及其相邻的我国所属的西太区的麻疹病毒的监测工作具有非常重要的意义。A-VLA-VL第69页/共144页麻疹病毒学监测的意义通过鉴定病毒的分子特征对流行病学方法进行补充,特别是无流行病学资料时.确认/鉴别病毒的来源（野毒的基因型来源，本土或输入；疫苗病例）确定病毒的传播途径提供评估控制策略效果的方法辅助分析不寻常的或严重的病例，例如SSPE,MIE,CRS。评估病毒的传播模式、为阻断病毒传播提供科学依据提供评估控制策略效果的有效指标。帮助建立诊断方法帮助抗病毒制剂的研制（中和抗体）建立麻疹毒株库及基因数据库发展疫苗（筛选毒株，和中和位点）第70页/共144页充分的技术储备和人力资源参与对中国疫苗全基因组的序列测定和全球所有麻疹疫苗序列的对比分析，迅速平息了有关“中国疫苗被外国插入不明基因片段的“的谎言。参加卫生部组织的现场技术指导和督导，提供技术支撑。及时对XX省“疑为麻疹疫苗异常反应死亡”病例的病因学进行了快速鉴定，证实为EV71引起，为疫苗顺利完成接种计划提供了科学保障。成功应对和阻断了”国外输入D11病毒基因型“带来的挑战提出需要关注麻疹疫苗相关病例的诊断和鉴别诊断应对消除麻疹，免疫一亿儿童带来的挑战第71页/共144页围绕麻疹消除的指标-在保证监测质量1.发病率<1/100万2.可疑麻疹病例报告率和实验室检测率大于等于2/10万3.疫苗覆盖率1剂次和2剂次的免疫覆盖率在所有区域都>95%

4.爆发>80%爆发<10麻疹病例5.本土麻疹病毒株的流行被阻断>12月没有本土麻疹病毒株引起的麻疹病例*麻疹疑似病例发病3日内病原学标本（咽拭子）采集率达到60%第72页/共144页实验室质量控制每年组织省辖市麻疹实验室网络职能考核

血清盲样考核（下发麻疹、风疹质控血清）血清抽样复核

--共有18家网络实验室参加考核第73页/共144页地区阴性1:2001:8001:32001:12800合计几何均数阳性率太康县061153741445228.529100%二七区263054481403231.84499%原阳县083267491563228.564100%临颍县063252501403395.882100%安阳县311554891625557.23998.1%卧龙区6295244191501201.41896.0%濮阳县12325550181671078.63792.8%总计238822737434710592758.18497.8%2009综合监测——健康人群麻疹IgG抗体水平第74页/共144页2009综合监测——健康人群麻疹IgG抗体水平年龄组阴性1:2001:8001:32001:12800合计几何均数阳性率2--38123874942263444.43396.5%5--68195375732282539.84296.5%13--154164494572152654.2598.1%>18341921311233902599.20899.2%总计238822737434710592758.18497.8%第75页/共144页2009综合监测——麻疹疫苗免疫成功率检测地区免前份数免后份数有效对数阳转对数阳转率太康县3030302893.3%二七区3532322990.6%原阳县3830302893.3%安阳县30303030100.0%濮阳县4832323196.9%合计18115415414694.8%第76页/共144页分年龄健康人群风疹IgG抗体水平

年龄组标本数IgG抗体均数（IU/ml）阳性率2--367102.7982.1%5--662171.6085.5%13--1560131.7591.7%>18101187.6692.1%总计290148.4588.3%第77页/共144页麻疹监测存在问题可疑麻疹病例报告率和实验室检测率待提高（大于等于2/10万）。数据库填报不完整，存在缺项漏项。麻疹疑似病例血标本和咽拭标本采集率、血标本送检及时率、实验室报告及时率有待进一步提高。麻疹暴发病例均需采集血清标本和咽拭标本第78页/共144页每个散发病例都要采集标本鉴定病毒来源每次爆发每个可能的传播链都要采集标本，以鉴别是否是同一株病毒在持续传播各省要提高散发和爆发疫情病原学标本采集率，病毒分离率和基因型别的及时鉴定率各项指标严格按照麻疹监测方案执行一个要消除的传染病：达到高质量的监测投入经费严重不足！病毒学监测存在问题第79页/共144页采样及送检要求1血/血清标本：医疗机构在发现麻疹病例或疑似病例时，应负责采集血标本。基本要求是：采血量为2～3毫升，无溶血，无污染；标本送检表填写完整；血标本或分离血清（＞0.5毫升）应放置4℃冷藏，并立即通知或24小时内送达辖区县级疾病预防控制机构。县级疾病预防控制机构收到标本后，48小时内将血清（冷藏条件下）和标本送检表送至市级麻疹血清学实验室。鼻咽拭子：在患者出疹早期采集。

采集后4℃冷藏条件下，48小时送省CDC；如不能及时送检，放-70℃保存，一周内尽快安排送检。第80页/共144页采样及送检要求2鼻咽拭子、尿液或血液等标本：在患者出疹早期采集。

采集后4℃冷藏条件下，48小时送省CDC；如不能及时送检，放-70℃保存，并尽快安排送检。第81页/共144页流感实验室监测第82页/共144页美国CDC通过基因比对分析，宣布病毒来源于猪MMWR,21April新型重配甲型H1N1流感病毒：含有人流感、猪流感和禽流感病毒基因Nature,26June,ScienceExpress2009不是来自中国，不是来源于实验室

甲型H1N1流感病毒第83页/共144页第84页/共144页63家网络实验室197家哨点医院203家网络实验室356家哨点医院411家网络实验室556家哨点医院扩大流感监测网络2009年5月前2009年7月2009年12月后第85页/共144页第86页/共144页流感监测方案相关文件全国流感/人禽流感监测实施方案（2005～2010年度）甲型H1N1流感监测方案(第一版)卫生部关于扩大全国流感监测网络的通知卫生部办公厅关于印发《甲型H1N1流感监测方案（第二版）》的通知卫生部办公厅关于印发《全国流感监测方案（2010年版）》的通知—2010年9月3日中国疾病预防控制中心关于印发全国流感检测技术指南的通知—2011年8月9日第87页/共144页一、2010版监测方案---明确目标第88页/共144页二、2010年版监测方案--监测目的监测流感活动水平和流行动态；及时发现流感病毒变异并作出预警；为全球及我国流感疫苗毒株的预测和推荐提供依据。第89页/共144页三、2010年版方案--监测内容改变病例定义监测时间样本量标本运送及保存时限第90页/共144页各级实验室主要工作任务第91页/共144页河南省流感网络实验室监测概况网络实验室构成网络实验室流感病毒监测情况网络实验室流感病毒核酸监测能力考核情况培训和督导工作不足工作要求第92页/共144页河南省流感网络实验室构成2009年5月以前只有河南省疾控中心流感实验室一家全国流感网络实验室，之后扩大到19家，各地市疾控中心检验室开始开展流感病毒的实验室检测工作。目前开展病毒分离工作的仅有省中心实验室，各地市均在积极筹备建设病毒分离实验室，濮阳、商丘等地已具有病毒分离能力。第93页/共144页2009-2011河南省流感实验室工作量统计-核酸检测ILI检测数阳性数（阳性率）季H1季H3甲型H1N1A型B型A未分型2009141895402（38.1%）4614034055192173160020107836860（11.0%）310817358824930420113879442（11.4%）34824030513314第94页/共144页2010-2011年河南省ILI标本检测情况第95页/共144页2005-2011年省中心流感实验室流感病毒分离情况2005200620072008200920102011病毒分离检测数2565136878104991524619分离毒株数172583611734522季节性H115153439810季节性H3004809320新甲型H1N100003603BV251429110BY0530141119第96页/共144页2005-2011年省中心流感实验室流感病毒分离情况第97页/共144页河南省流感监测网络ILI标本送检及时性采集标本后送网络实验室时间（天）2010年2011年标本数百分率（%）标本数百分率（%）≤7740194.4362993.67~143714.71644.215~21570.7581.522~2870.09170.4≥290000第98页/共144页河南省流感网络实验室检测技术培训班时间：2010年12月13－17日地点：省中心流感实验室目的：建立地市级流感病毒分离能力对象：各地市流感实验室技术骨干内容：流感病毒的细胞分离技术、鸡胚分离培养技术、流感病毒的血清鉴定技术培训一第99页/共144页河南省流感网络实验室检测技术手把手培训班培训二时间：2010年3月1－31日地点：省中心流感实验室目的：提高地市级流感实验室核酸检测能力对象：各地市流感实验室技术骨干内容：流感病毒核酸检测的RT-PCR技术、Real-timePCR技术第100页/共144页流感网络实验室现场督导2010年12月对新乡、三门峡、信阳、驻马店进行了网络实验室的现场督导2011年1-8月，对洛阳、濮阳、南阳、鹤壁流感实验室进行了现场督导，指导并交流病毒分离实验室建设经验，争取尽快开展病毒分离工作。第101页/共144页网络实验室流感病毒核酸检测能力考核2010年9-10月，国家流感中心对全国流感网络实验室进行流感病毒核酸检测能力考核，我省19个网络实验室10个报告结果有误；2011年1月省CDC转发中国疾控中心考核结果通报，并提出具体整改要求；2011年4月到5月，由省中心流感实验室制备考核标本，对全省18家流感网络实验室进行盲样考核，16家网络实验室的结果完全正确，平顶山和周口结果有误；2011年6月通报省内考核结果，督促各地市做好经验总结；2011年8-9月国家流感中心对全国流感网络实验室进行流感病毒核酸检测能力考核，目前该项工作正在进行中。第102页/共144页存在问题网络实验室流感核酸检测阳性标本，送省CDC实验室的送检率低。阳性标本向省CDC送检不及时。咽拭标本保存不当，影响病毒分离阳性率。不能鉴别流感病毒亚型，只做A、B型的区分第103页/共144页样本采集、运送及保存要求1第104页/共144页流感病毒核酸检测阳性标本

保存及送检要求2各地市流感网络实验室收检的咽拭标本在核酸检测实验完毕后，放-70℃保存。核酸检测阳性标本送省中心流感实验室进行病毒分离，要求从采样日期到送检日期不得大于14天。省中心流感实验室分离到的阳性标本需及时送检国家流感中心进行复核，从采集日期到送检日期不得超过一个月。第105页/共144页流脑实验室监测病原学监测；耐药监测免疫水平监测；健康人群带菌监测；第106页/共144页一、病原学监测--医疗机构内标本采集

医疗机构发现疑似流脑病例时，无论是否使用抗生素治疗，都要尽快采集病人脑脊液、血液、瘀点（斑）组织液标本，标本要尽可能在使用抗生素治疗前采集。脑脊液：采集1毫升脑脊液，进行涂片检测、培养分离、抗原检测和核酸检测。血液：抽取病人全血4毫升，其中一部分用于分离血清，-20℃保存准备检测抗体，其余全血进行病原培养分离、核酸检测。瘀点（斑）组织液标本：选病人皮肤上的新鲜瘀点（斑），消毒后用针头挑破，挤出组织液，涂片镜检。

第107页/共144页病原学监测—疾控部门检测1县级疾病预防控制机构接到医疗机构报告后，当天应到医疗机构收集标本，并尽快将标本送市级疾病预防控制机构进行检测，对于病原和抗原检测阴性的病例要采集恢复期血清以进行血清抗体测定，检测抗体的血清标本应冷藏运送。部分具备检测能力的县级疾病预防控制机构，可从事相应的病原学和血清学检测工作。已经检测过的标本，报告市级疾病预防控制机构后，直接送省级疾病预防控制机构。脑膜炎双球菌比较脆弱，采集标本后，在运送样品或培养物时，应保持样品处于20℃～36℃之间。第108页/共144页病原学监测—疾控部门检测2市级疾病预防控制机构收到病例标本后，进行流脑病原检测；收集到急性期和恢复期血清后，进行血清抗体测定。收到标本7天内完成标本检测，并将检测结果、分离的菌株于48小时内送省级疾病预防控制机构；培养阴性的标本每月汇总送省级疾病预防控制机构。

第109页/共144页病原学监测—疾控部门检测3省级疾病预防控制机构收到标本后，应于7天内完成菌株复核鉴定、菌株的耐药性检测，还应对培养阴性标本进行特异性核酸PCR检测。检测完成后，及时将结果反馈市级疾病预防控制机构，并填写菌株登记表，于28天内将菌株送至中国疾病预防控制中心。第110页/共144页病原学监测—结果反馈各级疾病预防控制机构要及时将检测结果填入个案调查表，并录入数据库，通过网络直报。同时及时逐级反馈检测结果，县级疾病预防控制机构收到上级疾病预防控制机构检测结果后，应及时将结果反馈送检的医疗机构。第111页/共144页二、耐药性监测省级疾病预防控制中心收到病例菌株或密切接触者菌株后7天内应完成耐药性检测，同时将病例菌株提供给省级卫生行政部门指定的三级医院用于耐药性检测，医院收到菌株后7天内应完成耐药性检测。第112页/共144页三、人群流脑抗体水平和带菌率监测1各省卫生行政部门应根据过去3年流脑平均发病水平、人口、地理分布特点，以及当地疾病预防控制机构工作能力等综合因素，每年在流脑高发县设立至少2个监测点，低发县设至少1个监测点，动态收集相关资料。各省确定监测点后，于6月底前上报中国疾病预防控制中心备案。第113页/共144页人群流脑抗体水平和带菌率监测2每个监测点分7个年龄组（<1岁、1～2岁、3～4岁、5～6岁、7～14岁、15～19岁、≥20岁），每个年龄组采集至少30人的血清检测抗体水平。每年9月采血1次，每次采血2毫升，编号登记，进行流脑抗体水平的检测，同时注明采样对象接种流脑疫苗时间。第114页/共144页人群流脑抗体水平和带菌率监测3在开展人群抗体水平调查采集血液时，同时采集咽拭子标本，进行流脑菌株分离培养，了解健康人群Nm的带菌率、带菌群型。培养所获得的Nm菌株分纯鉴定合格后，将其纯培养物的菌苔刮到3～5支灭菌的脱脂牛奶菌种管中，置-20℃冰箱保存。第115页/共144页人群流脑抗体水平和带菌率监测4抗体水平与带菌率检测完成后，尽快（最迟于10月底前）将结果电子版上报中国疾病预防控制中心（详见附表2），分离的菌株于检测完成后28天内送中国疾病预防控制中心传染病预防控制所进一步鉴定分析。第116页/共144页表1河南省2010年健康人群流脑A群、C群抗体阳性率第117页/共144页表2河南省2010年健康人群流脑抗体年龄组分布

第118页/共144页肝炎实验室监测第119页/共144页HBsAb和HBsAg2010年病毒性肝炎实验室分别在安阳、漯河、周口、南阳、濮阳、郑州、新乡等6个地区采集了血清标本，采集4个年龄组，分别为2-3岁，5-6岁，13-15岁和18岁以上年龄组第120页/共144页乙肝免疫成功率第121页/共144页Anti-HAVlgG甲肝的综合监测表明，2-3岁和5-6岁的抗体水平较高，分别为90.22%和90.53%，这与近年甲肝疫苗的接种有直接的关系，13-15岁的抗体水平为69.79%，18岁以上的为94.01%，直接反应了甲肝抗体水平随年龄的增长而增加的趋势。第122页/共144页甲肝免疫成功率共三个地区：分别为原阳、卧龙和太康，每个地区30份样本。第123页/共144页标本采集及运送的生物安全要求第124页/共144页法律法规2004年11月12日国务院总理温家宝签署第424号国务院令，公布《病原微生物实验室生物安全管理条例》《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》

《人间传染的病原微生物名录》

第125页/共144页采集病原微生物样本应具备的条件

第一，应具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平