小鼠脑组织病理总结演示文稿

小鼠脑组织病理总结演示文稿现在是1页\一共有20页\编辑于星期二优选小鼠脑组织病理总结现在是2页\一共有20页\编辑于星期二内容石蜡切片的制作冰冻切片的制作免疫组化免疫荧光HE病理相关试剂配制注意事项现在是3页\一共有20页\编辑于星期二石蜡切片的制作

取材和固定：处死动物后或者灌注后立即切取组织块，并快速投入固定液中。脱水和透明：梯度酒精和二甲苯浸蜡和包埋：石蜡切片制作：切片贴片：捞片，展片保存：烤片现在是4页\一共有20页\编辑于星期二冰冻切片的制作

取材和固定：灌注后立即切取组织块，并快速投入固定液中，或者处死后直接冷冻。脱水和透明：梯度蔗糖包埋：OCT，3%聚乙烯醇。切片制作：切片贴片：直接贴固定：冰冻丙酮3-5分保存：-20°C现在是5页\一共有20页\编辑于星期二灌注

0.5%戊巴比妥钠100mg/Kg麻醉小鼠，5分钟左右小鼠麻醉好，仰卧位固定四肢，用酒精棉球擦胸腹部毛，前开皮肤暴露胸部肌肉层，剑突上成V型剪开胸廓，暴露心脏，剪掉右心耳（即视野下心脏上色暗红组织），与心尖处30°角刺入左心室，37°左右生理盐水约10ml缓慢注入，冲净血液止，换4%多聚甲醛溶液（4°预冷），10-20分钟，鼠僵硬为好。现在是6页\一共有20页\编辑于星期二固定4%多聚甲醛根据不同实验需求要求石蜡切片的固定时间不同，几小时到一周。我曾用过2天，可以。冲水，固定的时间越长冲水时间越长，预防甲醛沉积。现在是7页\一共有20页\编辑于星期二取脑断头，剪开皮肤拨向两侧暴露颅骨，从枕骨大孔处沿正中线剪开露骨，用镊子掰开露骨，暴露脑组织，用弯头镊将脑组织勾出，在坐标纸上根据小鼠脑图谱取相应脑区组织，厚3mm左右。现在是8页\一共有20页\编辑于星期二脱水和透明，浸蜡石蜡切片：75%，80%，85%，90%，95%（2个），无水乙醇（2）中每个4小时-过夜，正丁醇1-2天。二甲苯（2个）20-30分钟。三个蜡，每个大于2小时。冰冻切片：固定后脱水用10%20%30%蔗糖（0.1MPBS溶）每个室温下4小时——过夜，OCT包埋，先在锡纸盒冻一层，在中间放组织，切面朝下，再用OCT将组织没过，尽量减少气泡，在液氮表面，保持小盒水平，待中心尚透明时取出，放于-80°C保存。现在是9页\一共有20页\编辑于星期二切片石蜡：冷水——温水（54°-56°）——

烤片（80°）

切好烤片后可以室温保存。冰冻：切片温度-18°—-20°

直接贴切好于冰冻丙酮中固定5分后-20°

保存。现在是10页\一共有20页\编辑于星期二固定方法注意事项1.组织块大小2cmx2cmx0.5cm2.组织标本应及时放入固定液中,切忌干涸3.组织固定后必须冲洗,除去多余的固定液4.一般固定剂温度以室温,某些病毒则须低温下处理,用丙酮-20度至-40度固定30分钟5.浓度采用10%中性甲醛或4%多聚甲醛6.固定液量是标本体积20倍7.固定时间不超过24小时现在是11页\一共有20页\编辑于星期二组化实验设计1.对常规组织切片进行仔细观察,根据可提供形态学特点,选择最佳并能反映病变的组织标本2.列出免疫组化的指标3.进行预实验(设立阳性、阴性对照)4.找出抗体的最佳修复方法、稀释度、孵育温度及孵育时间5.每张切片应表明抗体名称,防止相互混淆现在是12页\一共有20页\编辑于星期二现在是13页\一共有20页\编辑于星期二实验过程—70°考片一夜—二甲苯3个每个10分钟无水乙醇，95%，90%，85%，80%每个10分钟—3%双氧水阻断室温10分钟（现配现用）—抗体修复液（现配，400ml一次一个抗体盒）

微波炉高火6-7分—冷却至室温—再修复一次冷却—PBS5分×3—擦片加一抗，4°过夜现在是14页\一共有20页\编辑于星期二—第二日PBS5分×3—加二抗室温20分—PBS5分×3—DAB显色—水冲5-10分—苏木素1-3分—水冲10-15分—80%85%90%每个3分—95%（2个）无水乙醇（2个）二甲苯（2个）每个5分—中性树胶封片。现在是15页\一共有20页\编辑于星期二免疫荧光—PBS5分×3—5%BSA室温封闭1小时—加一抗，4°过夜或根据说明书时间—第二日PBS5分×3—加二抗37°孵育1小时—PBS5分×3—DAPI染色—PBS2分—丙三醇封片荧光显微镜下观察照相。现在是16页\一共有20页\编辑于星期二HE—70°烤片一夜—二甲苯3个每个10分钟无水乙醇，95%，90%，85%，80%每个5分钟—苏木素1-5分—水—盐酸酒精—水—0.5%氨水现在是17页\一共有20页\编辑于星期二—水—95%酒精2分—0.5%醇溶伊红1秒—95%酒精30秒—95%酒精，无水乙醇（3个）每个2分—二甲苯（2个）每个2分钟—中性树胶封片，吹干现在是18页\一共有20页\编辑于星期二病理相关试剂配制

4%多聚甲醛：40g多聚甲醛粉末溶于500ml水（50°左右）黄枪头加一滴1M氢氧化钠至澄清，冷却至室温，与500ml0.2MPBS混合，滤纸过滤。0.2MPB:1000ml0.2M磷酸氢二钠810ml称57.996g0.2M磷酸二氢钠190ml称5.928g蔗糖：用0.1MPBS配制生理盐水：0.85%氯化钠溶液现在是19页\一共有20页\编辑于星期二阻断液：0.3%H2O2甲醇溶液。30%双氧水2ml加入甲醇定容至200ml。（现用现配）修复液：（400ml）