生物学人源性生物制品

生物学人源性生物制品第1页/共98页第四章人源性生物制品

第2页/共98页第3页/共98页4

第一节人源性生物制品的特点与种类

1.1人源性生物制品的特点1、效价高、疗效可靠2、安全性好、不易产生副反应3、稳定性好，便于保存和运输4、资源有限、研究意义重大第4页/共98页5

1.2人源性生物制品的种类1、血液制品

◆

血液制品是指由健康人的血浆或经特异免疫的人血浆，经分离、提纯或由重组DNA技术制成的血浆蛋白组分，以及血液细胞有形成分。用于治疗和被动免疫预防。

◆血液制品属于治疗用生物制品。第5页/共98页6血液制品

全血血液成分制品血浆蛋白制品红细胞制剂白细胞制剂血小板制剂血浆制剂白蛋白类制品免疫球蛋白类制品等第6页/共98页72、尿液制品人的尿液中含有许多重要的生理活性物质。目前产品有尿激酶、激肽释放酶、尿抑胃素、人尿胰蛋白酶抑制剂、人绒毛膜促性腺激素（HCG）等。第7页/共98页83、胎盘制品人胎盘制品主要有人胎盘丙种球蛋白、人胎盘白蛋白、人胎盘RNA酶抑制剂等。第8页/共98页94、人体液细胞中的活性物质人体液细胞包括红细胞、淋巴细胞、血小板、成纤维细胞等。这些细胞内的重要物质，也就是细胞因子具有重要的生理功能。

第9页/共98页101.3血液及其综合利用

(1).血液的组成：A.无形成份——血浆50％～60%红细胞白细胞血小板40％～50%B.有形成份1.血液的成分第10页/共98页第11页/共98页12血浆蛋白的组成：第12页/共98页13（2）血液的功能：A.输送氧气和二氧化碳，以进行肺与组织间的气体交换；B.维持渗透压，调节酸碱和电解质平衡；C.运输养份和代谢产物，传递维生素、激素和药物；E.防御和免疫；F.凝血和溶栓作用等。

第13页/共98页14（3）血容量、休克、渗透压、白蛋白：血容量指全身有效循环血量而言。有效循环血量是指单位时间内通过心血管系统进行循环的血量，而不包括贮存于肝、脾和淋巴血窦中或停滞于毛细血管中的血量。第14页/共98页15休克：在医学上是指由于多种原因引起的全身微循环障碍导致的临床综合征。微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环，是血液与组织细胞进行物质交换的场所。失血性休克、心原性休克、中毒性休克、过敏性休克、神经原性休克第15页/共98页16第16页/共98页172、输血疗法的发展输血发展史的里程碑1628Harvey血液循环1901Landsteiner血型1914Hustin抗凝剂

1917Robertson第17页/共98页18常用的抗凝剂ACDCPD第18页/共98页193、血液的综合利用全血的缺点：大量输全血可使循环超负荷。B.全血输入越多，患者的代谢负担越重。C.全血容易产生同种免疫，不良反应多。D.全血内所含的成分不浓、不纯和不足一个治疗剂量，疗效差。E.全血是宝贵的社会资源，盲目输注全血是对血源的浪费。第19页/共98页20全血适应证：A.全血可用于急性大量血液丢失可能出现低血容量休克患者；B.存在持续活动性出血，估计失血量超过自身血容量30%的患者（我国临床输血技术规范规定）。第20页/共98页21成分输血：

把全血中的各种有效成分分离出来，分别制成高浓度的制品，然后根据不同患者的需要，输给相应制品。这是当前输血技术发展的总趋势，也是输血现代化的重要标志之一。第21页/共98页22成分输血的优点：A.制剂容量小，浓度和纯度高，治疗效果好。B.使用安全，不良反应少。C.减少输血传播疾病的发生。E.便于保存，使用方便。F.综合利用，节约血液资源。

第22页/共98页23（1）、全血临床作用：缺点：输血反应4.血液制品的种类、性质和用途

第23页/共98页24（2）血液成分制品血液成分制品(bloodcomponents)专指用物理的或机械的方法分离出来的血液的一部分，如各种血细胞、血浆等，是从单个或血型相同的供者血液中采集的。第24页/共98页25红细胞制剂浓缩红细胞洗涤红细胞添加液红细胞去白细胞红细胞冰冻红细胞第25页/共98页26白细胞制剂生理功能：临床应用：缺点：TA-GVHD。。。。。。第26页/共98页27血小板制剂常规浓缩血小板、单采浓缩血小板、照射血小板生理功能：临床应用：缺点：人类白细胞抗原（humanleucocyteantigen，HLA）第27页/共98页28血浆制剂《血液制品管理条例》原料血浆必须使用单采血浆机械采集第28页/共98页29新鲜冷冻血浆（FFP）普通冷冻血浆(frozenplasma，FP)新鲜液体血浆(freshliquidplasma，FLP)等第29页/共98页30（3）血浆蛋白制品血浆蛋白制品(plasmaproducts)是指从人血浆中分离制备的有明确临床疗效和应用意义的蛋白制品的总称，国际上将这部分制品称为血浆衍生物(plasmaderivatives)。第30页/共98页31白蛋白类制品生理功能：A.维持血液渗透压：lg白蛋白声生的渗透压相当于20ml液体血浆或40ml全血。B.抗休克作用：能增加血液的有效循环量，对创伤、手术或烧伤所引起的休克有明显疗效。第31页/共98页32C.运输和解毒作用：白蛋白能结合阳离子，也能结合阴离子，故能输送性质不同的物质，如脂肪酸、激素、金属离子、酶和药物，并能结合有毒物质，运送至解毒器官。D.营养供给：组织蛋白和血浆蛋白可互相转化，白蛋白可作为机体内的氮源，为组织提供营养。第32页/共98页33免疫球蛋白类制品肌注免疫球蛋白制剂临床作用：缺点：制造方法：第33页/共98页34B.静脉注射免疫球蛋白制剂（IntravenousImmunoglobulin，IVIG）

临床应用：原发性和继发性免疫缺陷症特发性血小板减少性紫癜川崎病第34页/共98页35C.特异性免疫球蛋白制剂人乙型肝炎免疫球蛋白等第35页/共98页36凝血系统蛋白制品我国现在能作的只有少数几种：凝血因子VIII凝血酶原复合物纤维蛋白原制剂等。第36页/共98页375.血液制品的安全性◆血浆相关病毒的概念◆原料血浆筛查及检疫期管理◆血液制品生产工艺去除病毒能力◆血液制品病毒灭活/去除工艺◆保证血液制品病毒安全性的其他措施第37页/共98页原料血浆的特殊性具有潜在的病毒风险，若获得起始原材料的过程和生产过程控制不严密，可能导致血源性传染病感染：甲型肝炎病毒（HAV）乙型肝炎病毒（HBV）丙型肝炎病毒（HCV）丁型肝炎病毒（HDV）艾滋病病毒（HIV）巨细胞病毒（CMV）人类细小病毒（HPV）朊病毒（CJDV）其他可通过血液传播的病毒第38页/共98页病毒名称大小（nm）

病毒

包膜核酸传播介质全血血液制品乙型肝炎病毒（HBV）42＋DNA

＋＋丙型肝炎病毒（HCV）30-60＋RNA

＋

＋人类免疫缺陷病毒（HIV）100＋RNA

＋

＋人嗜T淋巴细胞病毒（HTLV）90-140＋RNA

＋

＋巨细胞病毒（CMV）200＋DNA＋－EB病毒（EBV）150-180＋DNA＋－甲型肝炎病毒（HAV）27-32－

RNA

＋－丁型肝炎病毒（HDV）28-39＋

RNA

＋＋人细小病毒（HPV）18-26－

DNA

＋

＋克－雅氏病（CJD）蛋白质源性的传染因子（朊蛋白－PrionProtein)埃博拉病毒（Ebola）、西尼罗病毒（West-nile）、SARS病毒、禽流感病毒？？第39页/共98页单采血浆站及单采血浆◆血液制品是以人血浆为原料生产的。◆原料血浆来自单采血浆站采集的血浆。◆单采血浆站由血液制品生产企业设置和管理，应遵守《血液制品管理条例》、《单采血浆站基本标准》、《单采血浆站管理办法》和《单采血浆站质量管理规范》等法律法规的相关规定。第40页/共98页血浆运输和贮存◆血浆采集后，应在6小时内冻结，置

-20℃以下保存，保存期不超过3年。◆血浆用专用冷藏车在-15℃以下运输。第41页/共98页

检验

用国家中检所检定合格的批批检试剂测定HBsAg、HIV抗体、HCV抗体、ALT、梅毒、血浆蛋白、抗-HBs等其他抗体含量。第42页/共98页原料血浆血清学的检测：HBsAg抗－HCV抗－HIVALT梅毒第43页/共98页原料血浆检疫期◆2008年6月31日后建立原料血浆投料前的“检疫期”制度.◆血浆采集复检合格后放置90天等献浆员第二次献浆检测合格后投产。减少窗口期传染。◆若用NAT/PCR检测，“窗口期”可由90天缩短至60天.第44页/共98页三种病毒的窗口期平均天数

ELISANATHCV8223HIV2211HBV5934第45页/共98页

原料血浆采集管理流程（浆站）合格供浆员供浆员注册供血浆者档案查询建立首次供浆者档案新供浆员合格供浆员问询合格？NO拒绝YES体检合格？NOYES血清样本新供浆员

*血清检验合格？NO新供浆员注册YES*血浆采集入浆站血浆库房血浆检测合格供浆员合格？YES拒绝NO运输至血液制品厂家*检测用试剂经国家批批检和入厂确认*采浆耗材经入厂检验合格第46页/共98页

原料血浆管理（血液制品生产厂家）YES验收合格？NoSFDA监督下销毁血浆样品血浆抽样YES保留样品库房待检区*检测

血浆投产2年后销毁合格？检疫期YESNO不合格合格？NO合格血浆QA放行投浆生产永久拒绝供血浆者淘汰不合格血浆省级监督员监督销毁/其他用途检测试剂SFDA放行检测试剂使用前蓉生确认保留样品第47页/共98页血浆采集流程图单采血浆站询问/体检/血浆采集/筛查

生产厂家复检检疫期管理投浆生产《单采血浆站管理办法》/《浆站GMP》《中国药典》三部

《中国药典》三部

《原料血浆检疫期指导原则》GMP冷链运输第48页/共98页第49页/共98页◆Cohn’s低温乙醇血浆组分法——低温乙醇沉淀法生产工艺中可去除一定量的病毒；◆过滤法——包括用于IVIG的深层过滤，经确证能大量除去脂包膜和非包膜病毒，模型病毒为HBV、HIV、ParvovirusB19、HAV。工艺技术去病毒能力第50页/共98页白蛋白三步沉淀病毒Log减少数StepEthand（%）PHLogReductionFactHIVPRVSindbisBEVStepA195.853.33.74.24.2StepⅣ405.854.45.75.43.6StepD104.60.91.73.11.2工艺技术去病毒能力第51页/共98页IVIG三步沉淀病毒Log减少数StepEthand（%）PHLogReductionFactHIVPRVSindbisBEVStepA195.854.03.63.23.4StepB125.155.34.74.64.1StepC257.04.04.72.93.8StepD2.23.01.72.8工艺技术去病毒能力第52页/共98页血液制品的病毒灭活◆血液制品安全控制◆原料血浆安全控制◆

-不同层次的病原体检测方法◆

-检疫期制度：排除潜在危险的血浆◆病毒灭活/去除工艺及其效果验证◆生产与质量管理：cGMP◆质量标准与质量控制第53页/共98页病毒灭活方法：1、巴氏消毒法◆巴氏消毒法（60℃/10h）即在60±0.5℃连续加热10-11小时。白蛋白采用这个方法进行病毒灭活，通常是在除菌过滤、分装到最终容器以后进行加热处理。通常，为防止蛋白质变性，在除菌过滤前要加入低浓度的辛酸钠或辛酸钠与N-乙酰色氨酸作为保护剂。几十年的临床使用情况证明，采用低温乙醇法和巴氏灭活方法生产的白蛋白对肝炎病毒和HIV是安全的。第54页/共98页2、干热法(80℃/72h)冻干品加热法蛋白质冻干除去水分以后可以耐受60-80℃或更高温度。在80℃以上加热可以产生令人满意的对HBV、HCV、HIV和HAV的病毒灭活效果。冻干品加热法一般多用于凝血因子类产品。由于冻干后病毒也更稳定，因此，必须进行在规定条件下的病毒灭活验证。冻干品加热法的病毒灭活效果受产品的水分残留量、组成成分如蛋白质、糖、盐和氨基酸的含量以及冰冻与冻干时间的影响。由于病毒灭活对水分残留量特别敏感，因此要根据验证结果设置允许的水分残留限度，并保持瓶间残留水分的差异处于限度内。第55页/共98页3、S/D法S/D法TNBP(0.3%)/Cholate(0.2%)（30℃/6h）

TNBP(0.3%)/Tween-80(1%)（24℃/6h）

TNBP(0.3%)/Triton-100(1%)（24℃/4~6h）有机溶剂与去污剂的混合物（S/D）能够破坏包膜病毒的脂膜结构，导致受到破坏的病毒无法与感染细胞结合。但该方法不能灭活非脂包膜病毒。第56页/共98页4、低pH法

（pH：４.00±0.20;24℃,21天）低pH法在某些酸性条件下,脂包膜病毒可以被灭活。免疫球蛋白经低pH如pH4）处理，可以有效灭活几种脂包膜病毒。如在免疫球蛋白生产中，通常采用20-22℃，pH4.1培育21天。灭活条件如pH值、孵放时间和温度、胃酶含量、蛋白质浓度、溶质含量等因素，可能影响灭活效果，应确定这些参数允许变化的幅度。第57页/共98页5、ＭＢ（亚甲基蓝）法１μMMB在白色荧光45000lux照射１小时。MB法已用于临床血浆的病毒灭活第58页/共98页6、荧光法补骨脂S-59(150μM)结合UVA(3J/cm2)第59页/共98页7、纳米膜过滤法使用20nm或50nm的膜过滤。

8、γ射线法第60页/共98页病毒去除方法沉淀层析（离子交换或亲和层析）纳米膜过滤第61页/共98页第二节人体来源生物制品制备实例

（Exampleofbio-preparationapplicationtohuman）一、人血浆白蛋白制剂的制备（preparationofhumanbloodplasmaalbumin）（1）结构和性质（structureandcharacter）人血是一种红色混浊的、具有一定腥味与粘滞性的液体。用适当的抗凝剂除去其中的有形成分（如红血球）而得到淡黄色、半透明的液体叫血浆。第62页/共98页血浆中除含有大量的水分以外，还含有血浆蛋白等溶质。白蛋白（albumin）又称清蛋白，白蛋白是血浆蛋白中含量最高（3.8～4.8%）、分子量最小、分子数最多的一类蛋白质。白蛋白对治疗因失血、创伤、烧伤等引起的休克，脑水肿和大脑损伤性所致的脑压增高，防止低蛋白血症，肝硬化或者由肾病引起的水肿与腹水等严重疾病具有良好疗效。第63页/共98页白蛋白为单链分子，由584个氨基酸残基组成，N端为天门冬氨酸，C端为亮氨酸，分子量为6.6×104，在离子强度为0.15时，pI为4.7，易溶于水，在60%硫酸铵饱和度以上沉淀。对酸较稳定，受热变性。从人体中分离的白蛋白有两种：一种是从健康人血浆中分离制得的人血清白蛋白，另一种是从健康产妇胎盘中分离制得的胎盘白蛋白。第64页/共98页

血（无抗凝剂）→自然凝固→分离出血清（无纤维蛋白酶原、凝血因子等）血+混合抗凝剂草酸铵草酸钾离心上清血浆总蛋白：6.2-7.9%白蛋白：3.8-4.8%水：90-92%（现常用肝素、柠檬酸钠）第65页/共98页（2）工艺路线（图3-1）

图3-1白蛋白生产工艺路线利凡诺,NaHCO3pH8.6,离心分离络合物蒸馏水，NaCl，HCl弱酸性，40℃，离心离心液浓缩超滤浓缩液灭活病毒

65℃，1h；60℃，10h热处理液除菌除菌过滤白蛋白液干燥冷冻干燥白蛋白去杂蛋白人血浆（%）第66页/共98页（3）工艺要点

①络合对于络合所要求的pH值，可以略高些，这样，白蛋白络合完全，络合物形成一个相当硬的块，倾倒上清液方便，损失少。但不能太高，以防络合血浆中的其它蛋白，影响解离与白蛋白制剂的纯度。若pH值偏低，络合不完全，络合物松软，甚至成汤状，不利于倾去上清液。血浆搅拌用NaHCO3调节pH至8.5-8.7之间，缓慢加入与血浆等体积的2.3%利凡诺溶液，边加边搅拌，充分络合后。静置2~4h，分离上清与络合物沉淀。第67页/共98页加入2.3%利凡诺溶液比加入5%利凡诺溶液的效果好？因为加5%利凡诺溶液常造成灭活时白蛋白部分变性或者分装困难。加入2.3%利凡诺溶液的体积一般不超过血浆体积的一半。这可能是加入利凡诺溶液除去了解离物中过多的Cl-而澄清，或者是加入的利凡诺（过量）使白蛋白与利凡诺的络合物反溶，从而使造成混浊的物质消失，达到澄清的目的。第68页/共98页②解离生产中要严格控制溶液的温度。25℃左右室温，络合物形成一个硬块，利于去上清和解离。温度太低，虽然不影响络合，但络合物呈稀糊状，倾倒上清液时常会丢失部分络合物，而且络合物内残存较多的利凡诺的水溶液。解离温度要维持在40℃左右，是解离反应的最适温度。第69页/共98页解离液的pH值在1.28~1.45之间，解离效果良好。络合物中加入解离液并搅拌均匀后，将解离后混合溶液pH值控制在6.0左右较理想。以解离后解离混合溶液pH值决定加入解离液的体积。解离后解离混合液的pH值高于6.5时，表明加入的解离液少了，有部分络合物未被解离开；低于5.85，表明加入的解离液多了，解离过度。这两种情况下，解离效果均不佳。第70页/共98页在沉淀中加约二分之一血浆体积的灭菌蒸馏水解离所得到的络合物沉淀，将解离混合物溶液用0.5mol/LHCl调节pH至5.5-6.0，加NaCl至0.15%～0.2%，充分搅拌、40℃过夜解离（8-10h）。第71页/共98页在生产过程中常发现，由于解离效果差，从而不能使生产过程顺利进行。方法：（1）加入活性炭法：在解离效果略差，即能够较顺利地离心，得到部分或全部稍混浊的滤液，但不能正常进行压滤时，加入适当的活性炭于滤液中，搅拦均匀后，立即离心，由于活性炭吸附溶液中粘稠物质，形成大颗粒，经离心可以除去杂质，起到澄清的作用。第72页/共98页（2）加入利凡诺法：在解离时，在由加入的盐酸或（和）盐过多而造成解离物的滤液混浊的情况下，变性前后，向解离物中加入适量的利凡诺溶液均会起到澄清的作用，而回收率却不会降低太多。变性前加利凡诺溶液比变性后加利凡诺溶液的效果显著。由于前者在变性过程中反应温度升高了，反应时间增加了。第73页/共98页（3）多次络合法如果解离效果极差，用以上两种方法处理都难以达到澄清的目的，那只有采取多次络合法，即在尽量除去解离物中粘稠物质后，将其pH值调至9.0~9.2，加入适量的5%利凡诺溶液，进行重络合，继尔重解离，一般都会得到很理想结果。如果仍然出现解离不良的现象，重复以上处理过程，直到得到满意的结果。这种方法使产品纯度高，外观变黄（棕），同时也使成本提高，回收率降低。第74页/共98页③去杂蛋白：白蛋白具有生物活性，凡是使蛋白质变性的温度都会使白蛋白变性。65℃条件下变性1h，离心分离出上清液。④热处理：在60±0.5℃条件下处理10h，灭活病毒。

⑤检验方法：冻干品白色疏松物体。白蛋白含量占95%以上，水分<1%，水溶后pH为6.6-7.2，硫酸铵残量<0.01%，细菌学和热原质检测合格。第75页/共98页

血浆蛋白分离纯化的工业化生产技术第76页/共98页血浆蛋白分离纯化的工业化生产技术第77页/共98页血浆蛋白分离纯化的工业化生产技术第78页/共98页第79页/共98页无菌灌装技术第80页/共98页巴氏病毒灭活和低pH孵放病毒灭活技术第81页/共98页第82页/共98页二、尿激酶（urokinase）的制备（1）天然尿激酶是由两条肽链通过二硫键连接而成。是丝氨酸蛋白酶，丝氨酸、组氨酸是活性中心必需的氨基酸。该酶底物专一性很强，血纤维蛋白溶酶原是唯一的天然蛋白质底物，作用于Arg-Val键上，使纤溶酶原转为纤溶酶。（2）尿激酶的pI为8-9。溶液状态不稳定。用于治疗各种新血栓形成或血栓梗塞疾病。

第83页/共98页（3）工艺流程（图3-2）男性尿

沉淀10℃下，pH8.5上清尿液酸化pH5.0-5.5酸化尿吸附硅藻土，5℃硅藻土吸附物洗涤5℃，水硅藻土柱洗脱0.02%氨水，0.1mol/LNaCl洗脱液去热源、色素DEAE-SephadexA50柱，pH8.0,（二乙氨乙基葡聚糖）流出液（活性部分）浓缩羧甲基纤维素（CMC柱，pH4.2)CMC柱洗脱（HAC-NaAC)NH3+NaCl,pH11.5-11.8洗脱液透析H2O,4℃透析液冻干成品图3-2尿激酶生产工艺路线第84页/共98页（4）工艺要点①收尿：男性尿，8h内处理。调尿液pH6.5以下。②硅藻土吸附：加入1%的硅藻土，5℃下搅拌吸附1h。③洗脱：硅藻土吸附物用5℃冷水洗涤后装柱，当洗脱液由清变浑时开始收集。④除热原、色素：收集液用饱和NaH2PO4，调pH8.0，加NaCl调电导至22M/Ω，过DEAE-SephadexA50层析柱，收集流出活性部分。第85页/共98页⑤CMC浓缩：流出液用1mol/LHAc调至pH4.2，用蒸馏水调电导至16-17M/Ω，通过CM-C层析柱。用10倍体积的pH4.2的HAC-NaAc缓冲液洗涤柱床。洗后用0.1%氨水0.1mol/LNaCl溶液洗脱尿激酶。收集活性组分，杂质被吸附。⑥产品质量：无色澄清液或白色冻干粉末。酶活力>15000IU/mg蛋白质。第86页/共98页三、绒膜促性激素（HCG）的制备（1）HCG的性质（characterofHCG）HCG是一种糖蛋白，由α、β两亚基组成，易溶于水，pI为3.2-3.3。HCG由胎盘滋养层合体细胞所分泌。妇女妊娠45-70天，尿中HCG含量可达30.000-50.000IU/24h。治疗女性不育症，神经性皮炎。男性性功能过低症和隐睾症，子宫出血和习惯性流产。第87页/共98页

图3-3HCG生产工艺路线孕妇尿[粗制]尿：苯甲酸：乙醇/1：0.075：5）用HCl调pH4-5HCG(粗品）提取NaACpH4.8提取液透析水，5℃以下透析内液吸附（CMSepharoseCI-6B）羧甲基琼脂糖凝胶吸附后交换剂洗涤Ⅰ，Ⅱ峰NaAC,pH4.8,pH5.9洗涤后交换剂洗脱NaAC,pH8.5洗脱液冷冻干燥

—30℃HCG精品

溶解蒸馏水，10℃以下HCG溶液透析pH6.8,5℃以下透析内液吸附羟基磷灰石，pH6.8吸附物解吸0.5mmol/L,1.0mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS),pH6.8解吸液干燥—30℃HCG纯品（2）HCG生产工艺路线第88页/共98页（3）工艺要点①吸附粗品：HCl调孕妇尿至pH4-5，加苯甲酸—乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇=1:0.075:5）搅拌1h静置2-3h，过滤，弃滤液，得吸附物。在搅拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮状沉淀产生，静置过夜，离心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗涤，干燥得粗制品。第89页/共98页②提取：加10倍量的4℃1/15mol/L、pH4.8醋酸盐缓冲液，搅拌4h，离心，取上清液。沉淀再提取2h。合并两次提取液，弃去沉淀。③离子交换层析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸盐缓冲液平衡后样品上柱。依次用pH4.8、0.01mol/L的醋酸盐缓冲液和pH5.9、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液洗涤出两个峰（杂质）。再用pH8.5、0.2mol/L的醋酸盐缓冲液洗脱，得到的第3峰即为HCG。第90页/共98页④羟基磷灰石柱层析：柱用pH6.8、0.5mmol/L磷酸盐缓冲液平衡。样品用pH6.8、0.5mmol/L的磷酸盐缓冲液进行层析上柱。洗脱先用pH6.8、0.5mmol/L再用pH6.81.0mmol/L的磷酸盐缓冲液。得到I、II活性峰。然后冷冻干燥。HCG纯品的比活性为10,000-12,000IU/mg蛋白质。

第91页/共98页四、白细胞介素-2（IL-2）的制备

（1）性质：由活化的淋巴细胞所产生的，糖蛋白有一个链内二硫桥（58位，105位）。等电点为pH6.5。（2）工艺路线（图3-4）

诱生白细胞培养液0.4mol/LNaCl,PBS,pH6.5UltrogelACA44柱，pH7.6图3-4为IL-2生产工艺路线人血白细胞诱生鸡瘟病毒，丝裂原培养液，