直抗阳性和免疫溶贫

直抗阳性和免疫溶贫第1页/共40页直接抗球蛋白试验检查受检者红细胞在机体内是否被抗体致敏产生直抗阳性的条件自身免疫溶血性贫血溶血性输血反应新生儿溶血病第2页/共40页间接抗球蛋白试验证实红细胞在体外被抗体结合的试验是检查血清中IgG抗体特异性或红细胞抗原的重要手段可用于

未知抗体的检出与确认交叉配合试验确认抗原第3页/共40页间接抗球蛋白试验步骤1：致敏步骤2：洗涤步骤3：加入抗人球蛋白试剂（AHG）

第4页/共40页增强介质可以增强反应性和减少孵育时间LISS

电解质增加溶液的介电常数，减弱了抗原抗体的静电作用。降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合率Polybrene

碱性高分子物质，有效中和红细胞表面负电荷，降低zeta电位，缩短红细胞之间的距离PeG

极强的亲水性，减少红细胞与抗体周围的水分22％BovinealbuminEnzymes第5页/共40页增强介质柱凝集（Columnagglutination）固相技术（Solid-phasetechnology）复合方法RedbloodcellspanelPlasmaorserumScreenDiluentNanoLysAnti-HumanGlobulin(AHG)第6页/共40页2.Incubation20’at37°C3.ShakeandMagnetizeinthesametime12µlofserumorplasmaScreenLysH1H2H3NanoLys60µlofNanoLys15µlofHemascreen1,2,3Screen

Diluent60µlofScreenDiluent抗体筛选方法1.Dispensing第7页/共40页MAGNET抗体筛选方法MAGNETMAGNETMAGNET第8页/共40页DAT阳性血液标本的收集EDTA抗凝血提供红细胞DAT测定，定型，洗脱，自身吸收不抗凝血提供血清抗体筛选，抗体鉴定第9页/共40页DAT阳性血清学研究多特异性抗球蛋白，抗IgG，抗C3测定附着在红细胞上的免疫球蛋白的类型血清抗体筛选与鉴定自身抗体，同种抗体自身＋同种抗体放散试验确认附着抗体的特异性直抗（IgG）阳性，而血清与洗脱液皆无反应需进一步研究：药物处理细胞，A和B细胞，酶处理细胞第10页/共40页红细胞鉴定定型ABO/Rh，磷酸氯奎放散，收集网织红细胞DATIgG，C3放散阴性：A和B细胞，酶处理，药物处理细胞阳性：同种抗体，自身抗体，同种＋自身自身吸收

第11页/共40页血清抗体鉴定阳性自身抗体温抗体，冷抗体

同种抗体特异性鉴定自身吸收鉴定同种抗体阴性IgG抗A，抗B抗体酶处理细胞药物依赖抗体第12页/共40页抗体放散方法方法用途要点Luifreeze-thawABOHDFN快速；红细胞用量少；其它抗体难放散Heat(560C)ABOHDFN；IgM凝集抗体容易；IgG同种和自身抗体难放散酸放散试剂盒温自身和同种抗体容易；当高效价的抗体存在时放散液有假阳性洋地黄皂苷酸温自身和同种抗体洗涤消耗时间乙醚放散温自身和同种抗体第13页/共40页红细胞疾病红细胞增多红细胞减少

红细胞生成减少

红细胞破坏过多（溶血性贫血）红细胞丢失过多第14页/共40页溶血性贫血红细胞内在缺陷遗传性红细胞增多症红细胞酶缺乏的贫血珠蛋白生成障碍性贫血异常血红蛋白病阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞外来因素

免疫溶血性贫血机械性溶血性贫血其它因素引起的溶血性贫血第15页/共40页免疫溶血性贫血的分类自身免疫溶血性贫血（AIHA）

WarmAIHA(WAIHA)

ColdAgglutininSyndrone(CAS)

Mixed-typeAIHA

ParoxysmalColdHemoglobinura(PCH)

DAT-negativeAIHA同种免疫溶血性贫血

HemolyticTransfusionReaction

HemolyticDiseaseoftheFetusandNewborn(HDFN)药物诱发的免疫溶血性贫血

Drug-dependent

Drug-independent第16页/共40页自身免疫溶血性贫血的血清学特征WAIHACASMixed-typeAIHAPCHDATIgGIgG+C3C3C3onlyIgG+C3C3C3only免疫抗体类型IgGIgMIgG,IgMIgG放散液IgG抗体没有反应IgG抗体没有反应血清IAT；在20C，35%未凝集IgM凝集抗体，4C效价>1000(60%)IgGIAT-反应抗体和IgM凝集抗体在DLT试验中IgG双相溶血特异性广范围反应；多种特异性报道通常为抗I通常未知抗P第17页/共40页温抗体型自身免疫溶血性贫血(WAIHA)发病率

1/80000，女性比男性高，年龄多数>40病因分类网状内皮细胞肿瘤慢性淋巴瘤;霍奇金病;非霍奇金淋巴瘤病胶原病系统性红斑狼疮;类风湿性关节炎等

免疫性疾病免疫缺陷综合症;低球蛋白血症等胃肠道疾病某些良性肿瘤第18页/共40页WAIHA发病机制

免疫调节紊乱免疫器官对自身红细胞失去识别能力红细胞膜损伤，改变膜的抗原性

第19页/共40页WAIHA诊断标准临床表现起病慢，数月后才发现贫血，表现为全身虚弱及头昏。各有1/3患者皮肤粘膜苍白及黄胆，半数以上有脾肿大。实验室检查1.贫血：程度不一，可暴发急性溶血现象。外周血涂片上可见多量球形细胞及数量不等的幼红细胞，；

2.骨髓涂片：呈幼红细胞增生象；

3.再生危象：网织红细胞极度减少，骨髓象呈细胞再生障碍，血象呈全细胞减少；

4.DAT试验阳性，为抗IgG和抗C3型。

第20页/共40页WAIHA诊断依据直抗阳性患者近4个月无输血或特殊药物服用史，结合临床表现和实验室检查，可诊断为温抗体型自身免疫溶血性贫血。直抗阴性但临床表现较符合本病症状，肾上腺皮质激素或切脾术有效，其它溶血性贫血除外，可诊断为抗球蛋白蛋白试验阴性的温抗体型自身免疫溶血性贫血。

第21页/共40页WAIHA疗效标准缓解患者临床症状消失部分缓解患者临床症状基本消失。血红蛋白量在80g/L以上，网织红细胞数在5％以下，血清总胆红素测定<34umol/L（2mg/dl）。直抗阴性/阳性。无效患者治疗后仍有不同程度的贫血或溶血症状，实验室检查结果未能达到部分缓解标准者。

第22页/共40页温自身抗体与Rh血型抗体单一的Rh特异性自身抗-e复合的Rh特异性

Mimicking抗体

正常红细胞RhnullD--/D--抗体特异性阳性阴性阴性抗-nl阳性阴性阳性抗-pdl阳性阳性阳性抗-dl第23页/共40页自身抗体同效（mimicking）同种抗体

一位rr型患者的血清中有抗C及抗e抗体，尽管患者的红细胞缺乏C抗原，但事实上此抗C的反应性，是因温反应性自身抗体而引起。这种由于自身抗体所致的反应性，可用自身与同种吸收法来研究决定。在上述情况中，抗e为自身抗体，抗C抗体会吸附到自身及同种的r型细胞上，这与“真实”同种抗C完全不同，后者仅被C阳性红细胞吸收。第24页/共40页温自身抗体（广范围抗dl＋自身抗e）

编号DCEceAHG（370C

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2+第25页/共40页CAS发病机制

当体温较低（300C以下）时这种冷抗体能作用于自身红细胞抗原而发生可逆性的红细胞凝集。凝集的红细胞阻塞微循环而发绀，可伴有轻度的溶血。温度回升，症状消失。原发性者原因不明继发性者相对多见于支原体肺炎以及传染性单核细胞增多症恢复期

第26页/共40页CAS诊断标准临床表现以中老年患者为多，寒冷环境使患者耳郭、鼻尖、手指发绀，但一经加温即消失。除贫血和黄疸外，其他体症很少实验室检查1.患者呈慢性轻至中度贫血，外周血中无红细胞畸形，可有轻度高胆红素血症；

2.反复发作者有含铁血黄素尿；

3.冷凝集素试验阳性，40C效价>1000；

4.DAT试验阳性，为C3型第27页/共40页PCH发病机制

以全身或局部受寒冷刺激后突然发生大量血管内溶血和血红蛋白尿为特征，罕见原发性发病者极为罕见继发性主要由梅毒特别是先天性梅毒及晚期梅毒静止期所引起，现在此病大多出现于某些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、传染性单核细胞增多症等传染病之后，以儿童居多

第28页/共40页PCH诊断标准临床表现患者多数受寒后即有急性发作，表现为寒战、发热（体温可高达400C），全身无力及腰背痛，随后即有血红蛋白尿，多数持续几小时，偶有几天实验室检查1.发作时贫血严重，进展迅速，外周血有红细胞大小不一及畸形，并有球形红细胞、红细胞碎片、嗜碱性点彩细胞及幼红细胞；

2.反复发作者有含铁血黄素尿；

3.DL试验阳性；

4.DAT试验阳性，为C3型第29页/共40页DL冷溶血试验Donath-LandsteinertestDL冷溶血素IgG冷反应性抗体，能结合于几乎所有正常人红细胞均有的P血型抗原，是一种冷温双相温度的冷溶血素，具有强烈的溶血作用。体外最适反应温度00C-40C，150C以下补体不能按序最终激活，故不发生补体溶血，回升370C时抗体与细胞解离，但补体却依次激活，导致溶血。先置于冰水中约30分钟，再置于370C水浴中2小时，溶血，DL抗体存在。

第30页/共40页冷自身免疫溶血性贫血的输血慢性冷凝集素病很少需要输血，但是发生大量溶血时，病人温度约400C的环境。当红细胞输入开始10分钟红细胞快速在病人血液中破坏，然后破坏速度变慢阵发性寒冷性血红蛋白尿患者很少需要输血，因抗体反应温度常只到200C

，所以很少引起溶血，当抗体反应温度如上升到300C即可引起溶血。输P阴性血，但有人成功的输予没洗涤，没加温，P阳性的细胞第31页/共40页自身吸收

区分自身和同种抗体患者血清：自身抗体+同种抗K洗涤患者细胞，560C水浴中孵育5分钟，洗脱部分自身抗体酶处理洗脱红细胞，可增大吸附抗体的能力370C吸附患者血清，移去自身抗体，只留下同种抗体第32页/共40页第33页/共40页Blood-MatchingGoesGeneticHopingtopreventadversetransfusionreactionsandsavelives,Europeanresearchersarelobbyingtoreplaceserology-basedbloodtypingwithmatchingbasedonDNAtests

14MARCH2008VOL319SCIENCE

第34页/共40页配血步入基因时代

为了预防输血不良反应和挽救生命，欧州学者们正在呼吁用DNA检测替代血清学方法来鉴定血型

14MARCH2008VOL319SCIENCE

第35页/共40页Blood-MatchingGoesGenetic

Twodecadesago,a20-year-oldmanenteredDukeUniversityhospitalforahipreplacement.Hehadsicklecelldiseaseandbecausehewasanemic,heneededabloodtransfusionbeforetheoperation.Aswithmostsicklecellpatients,hehadreceivedtransfusionsbefore.Butonthisoccasion,hisbodyrejectedtheblood.Thedoctorstriedagainandagainwithd