HPV临床常用检测方法

#HPV临床常用检测方法由于HPV不能在体外细胞培养，故不能用简便的血清血检测进行HPV的诊断和分型。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等，其中以PCR方法的敏感性最高，是目前应用最多感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后，是进行HPV检测的主要内容。目前主要是通过应用分子生物学方法进行HPVDNA的检测。1、现有的HPV实验室主要检测手段：聚合酶链反应（PCR,PolymeraseChainReaction）:扩增位于两段已知序列之间的DNA片断的方法。该法有较高的敏感度，可进行HPV分型，缺点是对实验室环境要求较高,容易发生样本间的交叉污染，从而导致假阳性率高。核酸杂交检测有较好的特异性和敏感度，还可以进行HPVDNA的分型，各种核酸杂交检测方法有一泄的优缺点。A核酸印迹原位杂交适用于HPV分型和HPVDNA分子量鉴左，虽然灵敏度高,但因操作复杂，需要新鲜组织标本,不便在临床上大规模使用。B斑点印迹英敏感度和特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用，但实验过程存在有放射性污染,是环保所不能轻视的问题。C原位杂交（insituhybridization,一种核酸杂交技术，可用来测定基因或特定核昔酸序列在核酸分子的所在部位，检测重组体DNA）通过非放射性探针对石蜡组织进行检测，能作定位检测，假阳性率低，但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。D杂交捕获法（HybridCapture）杂交捕获试验是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNA双链释放并分解成为可以杂交的核昔酸单链,DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂合体，特异性抗体将RNA-DNA杂合体捕获，偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA杂合体结合，碱性磷酸酶使酶底物发光，根据光的强弱可确左碱性磷酸酶的含量，从而确怎RNA-DNA杂合体的含量。能检测13种高危型HPV,包括HPV16,18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。各种检测方法的比较？各种检测方法的比较方法学灵敏度特异性技术特点细胞学(Cytology)低低操作容易，成木较低.准确度较差斑点印迹（Dotblot）中中有一定放射性核酸印迹原位朵交(southernblothybridization)标准.麻烦.不宜大规模使用原位朵交（InSitu中棘块组织包埋内检测HPV

hybridization)朵交捕获（HC.HC2）高中无放射性，易使用，商、低危型间有交叉反应，且不能分型普通多聚酚链反应（PCR）很高中取材容易，但目前已应用试剂的只能检测少数爪一型别，如6、11.18等.且由于技术上的问题存在假阳性9■9■9•2、最新推出的HPV的实验室检测技术高灵敏度高危型HPV分型多色荧光实时PCR试剂：为欧洲着名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HPV分型多色荧光实时PCR检测试剂，可同时检测高危型中最主要的16、18.31/33、35/45型。了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒（HPV）感染患者中HPV亚型分布情况及高危型HPV的年龄分布。方法采用专利Invader酶切信号放大法，利用CervistaHPVHRCervisat核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱落细胞HPV的14个亚型DNA。HPV型组亚型备注A5/A651,56,66A718,39,45,59,68A916,31,33,35.52,581.3HPVDNA基因分型检测HybriM八x医用核酸分子杂交仪、DNA提取试剂盒和人乳头状瘤病除核酸分子快速杂交基因分型试剂食（HybriMax美国专利6020187）均为凯帝生物科技有限公司产品。采用低密度搐因芯片和导流杂交技术（flow-throughhybridization）应用寡核昔酸探针杂交，可检出13种高危亚型（HPV16、】8、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68）、5种低危亚型（HPV6、11、42、43和44）及中国人特有的高危亚型（CP83O4、53、66）。具体步骤如下：①利用凯普生物化学科技公司的基因组抽提试刑盒提取样本DNA。②PTC-200（MJRcscaroh）PCR扩增。反应体系25条件为95T9min,95T20sr55930s,72X：30»r扩增40个循环,72P延伸5min。③45七预热后.在HybriMax医用核酸分子快速杂交仪平台上放人标记有21种HPV菜因型寡核昔酸探针的低密度基因芯片，将扩增产物®95T变性5min,冰浴2min,加入检测孔内进行10mm的昴流杂交：④酶梳显色：加入封阻液封闭为反应的空白微孔，酶标显色后观察检测结果；阳性点呈现蓝紫色圆点，多个圆点阳性即为多重感染。每张芯片上有PCR反应质控点和朵交显色质控点各1个。HPV基因分型检测试剂盒（PCR彳反向点杂交法）【产品用途】对人乳头瘤病毒（HPV）的感染情况进行定性检测并加以分型，能够检测23种HPV基因型，直接提示感染HPV的基因空：包括18种商危和5种低危型，可用于临床HPV感染的辅助诊断。【产品优势】.精确分型：能同时对23种HPV基因型进行精确分型，包括18种高危型和5种地位型：.效率启j：讥次检测标木数虽可达96份：.性能好：持片性强、垂复性好，均高于98%：.设备通用：如普通PCR仪和杂交仪，适应于大、中、小型实验室：.内部质拎：具有真正意义上的内部质控，检测结果更加准确：.可以检测篡种临床标木。【技术方法】采用PCR和反向点朵交法相结合的基因芯片技术【检测原理】将大虽不同序列的探针分子固定于支持物的不同位宜上，然后与已做标记的样木进行杂交，通过检测杂交信号的强度和分布来进行分析。